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开拓创新、协同攻关,助力人血白蛋白的迭代研发及临床研究
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作者 贾继东 牛俊奇 《临床肝胆病杂志》 北大核心 2025年第3期401-403,共3页
白蛋白是人血浆中含量最高的蛋白质,除维持血浆胶体渗透压外,还有物质转运、解毒、维持血管完整性、抗氧化、抗炎及免疫调控等功能。在肝病领域,目前白蛋白主要用于预防大量放腹水后循环功能障碍和治疗肝硬化低白蛋白血症和腹水、自发... 白蛋白是人血浆中含量最高的蛋白质,除维持血浆胶体渗透压外,还有物质转运、解毒、维持血管完整性、抗氧化、抗炎及免疫调控等功能。在肝病领域,目前白蛋白主要用于预防大量放腹水后循环功能障碍和治疗肝硬化低白蛋白血症和腹水、自发性腹膜炎以及肝肾综合征。研发重组人血白蛋白有助于降低人血白蛋白制品的潜在生物安全风险和大量依赖进口的弊端。由于缺乏对已上市人血白蛋白关键注册临床试验结果的借鉴,人血白蛋白的临床试验设计、实施和审评均面临诸多挑战。因此需要制药企业、临床医学、方法学以及评审监管等方面的专家,求真务实、锐意创新、协同攻关。 展开更多
关键词 白蛋白类 重组人血白蛋白 肝硬化 临床试验
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葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞株中rHSA产量的影响 被引量:2
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作者 牛宇辉 李向茸 +5 位作者 吴贝 李洪珊 李殿玉 陈磊 魏锁成 冯若飞 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期278-286,共9页
目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA... 目前,悬浮CHO细胞作为外源蛋白的最有潜力的工程细胞株被广泛应用,探索其高密度生长和高表达外源蛋白的培养条件也成为研究的热点。葡萄糖和丁酸钠在促进CHO细胞生长和外源蛋白表达方面具有重要作用,所以研究葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的影响有重要的应用价值。首先利用单因素试验确定了葡萄糖和丁酸钠对CHO-rHSA工程细胞表达重组人血清白蛋白的作用,并筛选出最优添加条件;然后利用双因素组合作用试验优选出可有效提高rHSA表达量的葡萄糖及丁酸钠的组合培养条件。细胞培养第3天开始,每48 h添加终浓度为7 g/L的葡萄糖,可使rHSA产量平均提高121.93%;细胞培养第2天添加终浓度为1.0 mmoL/L的丁酸钠,可使rHSA产量平均提高110.01%;丁酸钠和葡萄糖组合使用可使CHO-rHSA工程细胞株培养时间从7 d左右延长到14 d左右,使rHSA表达量达平均达到了85.642 mg/L,rHSA表达量与未处理组相比平均提高了212.49%,比单独使用葡萄糖平均提高了134.85%,比单独使用丁酸钠平均提高了88.35%。确定待细胞培养48 h 时添加1.0 mmol/L 丁酸钠和3.0→7.0 g/L葡萄糖为CHO工程细胞株高效表达的培养条件。丁酸钠和葡萄糖组合使用可更高效的表达外源蛋白,葡萄糖可以减弱丁酸钠对CHO细胞生长的抑制作用,为提高CHO工程细胞株外源蛋白表达提供新的理论依据。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白 丁酸钠 葡萄糖 CHO-rhsa工程细胞株
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基因工程菌Pichia pastoris连续培养的生长及抑制动力学 被引量:7
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作者 吴康华 郭美锦 +2 位作者 庄英萍 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期605-609,共5页
在同一稀释率μ(μ=0 .1 4h-1)下用不同浓度的甘油流加进行连续培养 ,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母 ( Pichia pastori)生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量 ( DCW和WCW)、底物得率系数 ( YX/ S)、底物比消耗速率 ( qs)、呼吸... 在同一稀释率μ(μ=0 .1 4h-1)下用不同浓度的甘油流加进行连续培养 ,研究甘油浓度对基因工程菌毕赤酵母 ( Pichia pastori)生长的影响。结果表明甘油浓度对细胞生物量 ( DCW和WCW)、底物得率系数 ( YX/ S)、底物比消耗速率 ( qs)、呼吸熵 ( RQ)与二氧化碳释放率 ( CER)都有影响 ,在低甘油残留浓度 ( <63.3g/L)下 ,甘油是激活剂 ,菌体生长符合 Monod方程 ,Ks=1 9.62 g/L,甘油激活常数 Ka=1 9.45 g/L;而在高甘油残留浓度 ( >63.3g/L )下甘油是抑制剂 ,菌体生长特征符合 Haldance方程 ,Ks=0 .0 1 4g/L,KI=1 5 6.67g/L。毕赤酵母生长的甘油抑制浓度为 5 5 .42 展开更多
关键词 基因工程菌 毕赤酵母 连续培养 生长动力学 重组人血清白蛋白 抑制动力学 甘油浓度
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基于氧碳平衡的重组巴氏毕赤酵母碳源代谢分析 被引量:7
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作者 郭美锦 储炬 +2 位作者 庄英萍 杭海峰 张嗣良 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2003年第12期1724-1728,共5页
基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1... 基于氧元素和碳元素平衡对重组巴氏毕赤酵母 (Pichiapastoris)的不同碳源代谢进行了分析 .结果表明 :以甘油为惟一碳源 ,当比生长速率由 0 0 6 4h-1增大到 0 2 5 7h-1时 ,用于细胞生长的甘油代谢比速率由1 36mmol·g-1·h-1增大到 5 4 6mmol·g-1·h-1,而用于细胞维持代谢流比例降低了 10 4 % ,同时甘油用于合成代谢和分解代谢的比速率均增大 ,但是分解代谢流比例逐渐下降 ,而合成代谢流比例却升高了 5 9% ;以甲醇为碳源进行表达重组人血清白蛋白恒化培养时 ,当比生长速率由 0 0 19h-1增大至 0 0 4 6h-1时 ,用于产物重组人血清白蛋白形成的比速率呈先增大后减少的趋势 ,在比生长速率为 0 0 2 7h-1时最大 ,为 0 31mmol·g-1·h-1,占甲醇总代谢流的 13 2 % . 展开更多
关键词 氧碳元素平衡 重组巴氏毕赤酵母 代谢流分析 恒化培养 重组人血清白蛋白
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重组人白蛋白干扰素α-2b融合蛋白的抗HBV机制 被引量:4
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作者 徐丙发 范鲁雁 +2 位作者 范清林 魏伟 宋礼华 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期274-275,共2页
关键词 rhsa—IFNα-2b 乙肝病毒 STAT1 ISGF3 2'-5’-OAS
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基因工程菌Pichia pastoris高密度发酵表达重组人血清白蛋白 被引量:4
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作者 郭美锦 庄英萍 +2 位作者 吴康华 储炬 张嗣良 《华东理工大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2002年第1期101-103,116,共4页
在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生... 在摇瓶条件下对基因工程菌 Pichia pastoris的发酵条件进行了实验 ,并根据摇瓶发酵的优化结果进行了补料分批高密度发酵。在分批发酵时 ,接种量为 1 0 %且种子细胞光密度 ( OD60 0 )为2 0左右时 ,细胞生长的延迟期约为 2 .1 1 h,细胞生长光密度与培养时间的关系模型为 :y=0 .7841 e0 .2 319t(线性相关系数 r=0 .9936) ;在补料发酵时细胞浓度可达 1 1 5 g/L~ 1 60 g/L (干重 ) ,在 1 2 0 h重组人血清白蛋白表达量达 3. 展开更多
关键词 重组巴氏毕赤酵母 高密度发酵 重组人血清蛋白 基因表达 分批发酵 补料发酵
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HSA转基因水稻二重微滴数字PCR定量检测方法研究 被引量:1
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作者 李晓飞 姚晓青 +4 位作者 闫晓红 李俊 朱莉 吴刚 罗军玲 《中国油料作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第5期1098-1107,共10页
重组人血清白蛋白(HSA,Human serum albumin)基因工程水稻是我国自主研发的可规模化生产水稻重组人血清白蛋白(OsrHSA)的转基因品系,具有极高的推广价值和应用前景,但是目前缺乏对其进行精准定量检测的方法。微滴数字PCR(ddPCR,droplet ... 重组人血清白蛋白(HSA,Human serum albumin)基因工程水稻是我国自主研发的可规模化生产水稻重组人血清白蛋白(OsrHSA)的转基因品系,具有极高的推广价值和应用前景,但是目前缺乏对其进行精准定量检测的方法。微滴数字PCR(ddPCR,droplet digital PCR)是近年来新兴的前沿PCR技术,不依赖标准物质即可实现对DNA分子的绝对定量,在转基因产品定量领域被广泛应用。本研究基于ddPCR平台建立了适用于重组人血清白蛋白基因工程水稻(114-7-2品系)的二重ddPCR精准定量检测方法。通过对引物探针的特异性进行验证、对引物探针工作浓度和反应退火温度进行优化,获得最佳反应条件。进而对该方法检测限、定量限和结果重复性做了测定。最后通过对不同含量的重组人血清白蛋白转基因水稻样品进行定量检测,分析比较传统实时荧光定量PCR(quantitative real-time PCR,qRT-PCR)和二重ddPCR的优劣,结果表明本研究建立的转基因水稻HSA/PLD二重ddPCR方法稳定性更好、灵敏度高、成本低廉,精准可靠,适用于不依赖标准物质的精准定量HSA转基因水稻转化体含量分析,可取代qRT-PCR方法进行HSA转基因水稻的绝对定量检测,完善了我国转基因水稻成分精确定量检测技术体系。 展开更多
关键词 基因工程水稻 水稻重组人血清白蛋白(Osrhsa) 微滴数字PCR 绝对定量 转基因
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人重组血清白蛋白基因T载体和pET28a表达载体的构建及鉴定
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作者 云妙英 王涛 +2 位作者 肖宇红 张京文 陈正华 《首都医科大学学报》 CAS 2006年第5期639-642,共4页
目的构建重组人血清白蛋白(rHSA)表达基因的克隆载体及表达载体,为下一步的蛋白表达和构建rHSA融合基因打下基础。方法从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人血清白蛋白表达基因的特异引物进行PCR,PCR产物回... 目的构建重组人血清白蛋白(rHSA)表达基因的克隆载体及表达载体,为下一步的蛋白表达和构建rHSA融合基因打下基础。方法从人胎盘中提取总RNA,利用RT-PCR方法构建cDNA-mRNA杂交链,然后用人血清白蛋白表达基因的特异引物进行PCR,PCR产物回收后与T载体连接,经过转化、质粒酶切、测序等一系列手段对插入情况和序列是否正确进行鉴定。用另一组带有酶切位点的引物和pfu酶进行PCR,用EcoRⅠ和HindⅢ双酶切PCR回收片段及pET28a表达载体,二者经过连接、转化、质粒酶切、测序等手段重新鉴定序列是否正确。结果插入到T载体和pET28a载体中的序列为1 830 bp的带有24个氨基酸信号肽的基因片段,此序列和GenBank中公布的rHSA序列相一致,并显示在485、750、1 685等位点可能有等位基因多态性。结论从胎盘中提取mRNA后,利用RT-PCR构建的人血清白蛋白基因序列完全正确,为下一步的工作提供了基础。 展开更多
关键词 人血清白蛋白基因 载体 序列鉴定
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重组毕氏酵母发酵过程的结构模型 被引量:5
9
作者 周海英 袁景淇 +2 位作者 邓建慧 任乐民 易静 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2002年第10期1443-1447,共5页
分析了毕氏酵母 ( Pichia pastoris)以甘油和甲醇为碳源时的代谢途径 .建立了胞内物质流和能量流的平衡方程——结构模型 .经过适当的降维 ,解得比碳源消耗速率、比氧消耗速率、比乙酰辅酶 A生成速率、细胞比生长速率等关键反应速率 .... 分析了毕氏酵母 ( Pichia pastoris)以甘油和甲醇为碳源时的代谢途径 .建立了胞内物质流和能量流的平衡方程——结构模型 .经过适当的降维 ,解得比碳源消耗速率、比氧消耗速率、比乙酰辅酶 A生成速率、细胞比生长速率等关键反应速率 .结合反应器模型获得操作变量与过程状态变量间的关系 .用实验数据对模型进行了初步验证 .结果表明 。 展开更多
关键词 发酵过程 代谢途径 毕氏酵母 重组人血清白蛋白 结构模型 生长动力学
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重组毕氏酵母结构模型的改进及实验验证 被引量:2
10
作者 任海涛 袁景淇 +1 位作者 邓建慧 贺秉坤 《上海交通大学学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2004年第4期551-554,共4页
对早先建立的甲醇营养型重组毕氏醇母(Pichiapastoris)结构模型的产物生成部分进行了动态改进.甲醇流加初期蛋白生成所需的酶系尚处于诱导期,为了描述该酶系浓度和活性从低到高对产物比生成速率的影响,引入了一阶闭环调节器模型加以逼近... 对早先建立的甲醇营养型重组毕氏醇母(Pichiapastoris)结构模型的产物生成部分进行了动态改进.甲醇流加初期蛋白生成所需的酶系尚处于诱导期,为了描述该酶系浓度和活性从低到高对产物比生成速率的影响,引入了一阶闭环调节器模型加以逼近,同时考虑了细胞体积增大对胞内酶系浓度的稀释作用.设计了6次实验以验证模型的有效性.结果表明,该模型能对细胞生长和蛋白生成给出满意的描述,同时,各罐批间参数变化不是很大,表明该模型具有较强的鲁棒性. 展开更多
关键词 毕氏酵母 重组人血清白蛋白 结构模型 模型验证
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重组人组蛋白H3和H4的表达纯化及其细胞毒性分析 被引量:1
11
作者 朱明昂 陶悦 +2 位作者 张小秦 曹清 莫茜 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期191-198,共8页
细胞外组蛋白在脓毒症、类风湿性关节炎、急性肺损伤等多种疾病的发生发展中起关键作用,但由于缺乏合适的标准品,至今无法对患者体内的胞外组蛋白进行精确定量,导致在多种感染性疾病中无法根据血清组蛋白含量对疾病进行精确分级,也无法... 细胞外组蛋白在脓毒症、类风湿性关节炎、急性肺损伤等多种疾病的发生发展中起关键作用,但由于缺乏合适的标准品,至今无法对患者体内的胞外组蛋白进行精确定量,导致在多种感染性疾病中无法根据血清组蛋白含量对疾病进行精确分级,也无法据此合理用药。同时,对患者体内胞外组蛋白精确定量也有助于确定细胞毒性机制研究的使用剂量。本研究用大肠杆菌表达单体变性组蛋白H3和H4,亲和纯化后用梯度稀释和透析方法,可以得到复性的组蛋白单体H3、H4以及H3/H4复合物。通过对蛋白质在纯化过程中稳定性的比较,发现H3/H4复合物较单体更为稳定。以该复合物(50μg/m L)处理HUVEC细胞,细胞存活率约为20%,与小牛胸腺组蛋白(200μg/m L)的毒性类似。该复合物引起的细胞毒性可被人血清白蛋白以浓度依赖的形式(0.625~10 mg/m L)缓解,提示其构象基本正确。因此,重组组蛋白H3/H4复合物可以作为精确定量组蛋白的标准品,对基于组蛋白含量的疾病分级和组蛋白毒性机制的研究均有应用价值。 展开更多
关键词 重组人组蛋白 人血清白蛋白 表达纯化 细胞毒性 脓毒症
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一种转基因猪血中重组人血清白蛋白分离纯化新方法 被引量:3
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作者 余谦 王勇 +3 位作者 钱小红 秦伟捷 张普民 张养军 《分析测试学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期539-545,共7页
基因工程技术已经成为研究和生产重组人血清白蛋白(rHSA)替代人血清白蛋白(HSA)的重点技术,而白蛋白的纯化则是该技术的关键。本文主要介绍了从转基因猪血中纯化rHSA的一种新方法,即热乙醇沉淀与多级色谱分离相结合的rHSA纯化方法。热... 基因工程技术已经成为研究和生产重组人血清白蛋白(rHSA)替代人血清白蛋白(HSA)的重点技术,而白蛋白的纯化则是该技术的关键。本文主要介绍了从转基因猪血中纯化rHSA的一种新方法,即热乙醇沉淀与多级色谱分离相结合的rHSA纯化方法。热乙醇沉淀法可从猪血浆中获得rHSA粗提取液,此时rHSA的纯度可达69.5%,回收率达51.3%。进一步采用多级色谱分离法,即阴离子交换色谱和反相色谱法进一步纯化,得到rHSA的最终纯度约为100.0%,总回收率为41.1%。该方法为从转基因猪血浆中大规模纯化用于临床和生化研究的高纯度rHSA提供可能,同时也为rHSA替代HSA奠定了基础。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白(rhsa ) 纯化 热乙醇沉淀法 多级色谱分离法
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非诱导型基因重组工程菌发酵产人血清白蛋白各种参数的变化规律 被引量:1
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作者 战伟超 李辰雨 +1 位作者 徐世艾 林剑 《中国酿造》 CAS 北大核心 2015年第7期74-78,共5页
以无甲醇诱导型基因重组人血清白蛋白的毕赤氏酵母(Pichia pastoris)NCY-1为实验菌株,在10 L机械搅拌通风发酵罐水平和3 L摇瓶水平的基础上研究了该菌株发酵过程中参数的变化规律及铵根离子(NH4+)对发酵液中重组人血清白蛋白(r HSA)的... 以无甲醇诱导型基因重组人血清白蛋白的毕赤氏酵母(Pichia pastoris)NCY-1为实验菌株,在10 L机械搅拌通风发酵罐水平和3 L摇瓶水平的基础上研究了该菌株发酵过程中参数的变化规律及铵根离子(NH4+)对发酵液中重组人血清白蛋白(r HSA)的影响。研究结果表明:发酵液中的r HSA的含量随菌体浓度的增加而增加;30 h后菌体进入稳定期,此时流加10 g/L的葡糖糖有利于发酵液中r HSA的表达,流加后发酵液中的r HSA最高产量可达到185 mg/L;发酵液中存在活性较高的蛋白酶,在发酵后期分解r HSA,但发酵液中铵离子(NH4+)质量浓度为3.0 g/L时能较好的抑制r HSA的分解。 展开更多
关键词 非甲醇诱导型重组酵母 毕赤氏酵母 硫酸铵:重组人血清白蛋白
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氧在重组毕氏酵母发酵过程中的摄取与传递
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作者 梁捷明 汪志锋 袁景淇 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2006年第10期2397-2400,共4页
Oxygen uptake and transfer rates were studied in recombinant Pichia pastoris cultivation carried out in a stirred tank bioreactor.The oxygen uptake rate was determined by the macrokinetic model proposed earlier.Based ... Oxygen uptake and transfer rates were studied in recombinant Pichia pastoris cultivation carried out in a stirred tank bioreactor.The oxygen uptake rate was determined by the macrokinetic model proposed earlier.Based on pseudo-steady state mass transfer balance, an oxygen transfer model was established.Volumetric oxygen transfer coefficient k_La was estimated as a function of aeration rate and power input per unit volume.Oxygen uptake rate obtained from the macrokinetic model matched well with the oxygen transfer rate estimated by the mass balance model during the whole cultivation.The application of the oxygen transfer model for on-line biomass estimation was also presented. 展开更多
关键词 氧传递速率 摄氧率 毕氏酵母 重组人血清白蛋白
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重组人血清白蛋白在紫花苜蓿中的转基因表达 被引量:3
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作者 陈林涛 韦双双 +4 位作者 黄永林 吴昊 郭子怡 陈银华 王大勇 《热带作物学报》 CSCD 北大核心 2018年第4期720-725,共6页
为获得高产重组人血清白蛋白的转基因紫花苜蓿"游客"(Medicago sativa L. cv.‘Eureka’)株系用于规模化生产rHSA,构建了rHSA植物表达载体。以紫花苜蓿子叶愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,筛选出潮霉素抗性植株... 为获得高产重组人血清白蛋白的转基因紫花苜蓿"游客"(Medicago sativa L. cv.‘Eureka’)株系用于规模化生产rHSA,构建了rHSA植物表达载体。以紫花苜蓿子叶愈伤组织为受体,通过农杆菌介导法进行遗传转化,筛选出潮霉素抗性植株,提取抗性再生紫花苜蓿植株基因组DNA做PCR鉴定,结果表明重组人血清白蛋白基因片段已整合到紫花苜蓿基因组中;提取转基因植株总蛋白,Western blotting检测结果表明rHSA在转基因植株中成功表达。此结果表明转基因紫花苜蓿可稳定表达rHSA。 展开更多
关键词 重组人血清白蛋白 紫花苜蓿 农杆菌 转基因
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