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重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达
被引量：
3
1
作者
董鲁
谢琪璇
+2 位作者
潘善培
肖銮娟
刘红军
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2003年第1期73-78,共6页
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和...
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达.
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关键词
重组人巨细胞病毒
HCMV
嵌合肽
毕赤酵母
基因表达
基因工程
病毒检测
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职称材料
巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHC MVp的研究
2
作者
余巍
谢琪璇
+4 位作者
潘善培
肖銮娟
熊波
李文星
董志炜
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期162-167,共6页
目的:提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法:将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS -PAGE结果分...
目的:提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法:将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS -PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果:摇瓶培养时,转化子在体积分数1%的甲醇pH 6 0的条件下诱导72h ,A6 0 0 (菌体密度)为4 5 2 ,目的蛋白表达量达到10 2mg/L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1%甲醇诱导4 8h ,最终A6 0 0 (菌体密度)达到12 4 ,每升发酵液中含目的蛋白5 7 2 1mg。结论:通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。
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关键词
重组人巨细胞病毒嵌合肽
巴斯德毕赤酵母
高密度
发酵
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职称材料
题名
重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达
被引量：
3
1
作者
董鲁
谢琪璇
潘善培
肖銮娟
刘红军
机构
暨南大学生殖免疫研究中心
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2003年第1期73-78,共6页
基金
深圳市科委科技计划项目
文摘
目的:在巴斯德毕赤酵母中表达人巨细胞病毒gp52C末端和pp150C末端串联片段的嵌合肽.方法:用SacⅠ和BglⅡ分别酶切CMVp-pPIC9K重组质粒,电打孔法导入毕赤酵母GS115后,在缺组氨酸的MD板上筛选出转化子,然后根据甲醇利用快速型(Mut+)和甲醇利用缓慢型(Muts)菌株的不同生长特点,筛选出Mut+和Muts型转化子,用PCR法进一步鉴定阳性克隆.分别用甲醇诱导Mut+和Muts型转化子表达目的蛋白4d,取培养产物冻干浓缩,进行SDS-PAGE和Westernblotting,筛选出能特异表达目的蛋白的菌株,分析蛋白的含量及纯度.结果:重组人巨细胞病毒可在甲醇利用快速型毕赤酵母中有效表达,其表达量约占培养上清分泌蛋白的76 5%.结论:重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽可在真核细胞毕赤酵母中成功表达.
关键词
重组人巨细胞病毒
HCMV
嵌合肽
毕赤酵母
基因表达
基因工程
病毒检测
Keywords
human
cytomegalovirus
(HCMV)
recombinant
peptide
s
Pichia pastoris
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHC MVp的研究
2
作者
余巍
谢琪璇
潘善培
肖銮娟
熊波
李文星
董志炜
机构
暨南大学生殖免疫研究所
出处
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期162-167,共6页
基金
深圳市科技局计划基金资助项目
文摘
目的:提高人巨细胞病毒嵌合肽(rHCMVp)在巴斯德毕赤酵母中的表达量,并进行发酵罐高密度发酵。方法:将生长培养基的菌体离心后等量接入诱导培养基中(包括不同体积分数的甲醇、pH值)培养,通过菌体密度检测和发酵液上清的SDS -PAGE结果分析不同条件、不同诱导时间对人巨细胞病毒嵌合肽表达的影响,并依据优化条件进行高密度发酵。结果:摇瓶培养时,转化子在体积分数1%的甲醇pH 6 0的条件下诱导72h ,A6 0 0 (菌体密度)为4 5 2 ,目的蛋白表达量达到10 2mg/L。2L发酵罐进行了高密度发酵,经体积分数1%甲醇诱导4 8h ,最终A6 0 0 (菌体密度)达到12 4 ,每升发酵液中含目的蛋白5 7 2 1mg。结论:通过条件优化,进行高密度发酵,获得大量的rHCMVp。
关键词
重组人巨细胞病毒嵌合肽
巴斯德毕赤酵母
高密度
发酵
Keywords
recombinant
human
cytomegalovirus
peptide
(
rhcmvp
)
Pichia pastoris
high-density
fermentation
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人巨细胞病毒(HCMV)嵌合肽在毕赤酵母中的表达
董鲁
谢琪璇
潘善培
肖銮娟
刘红军
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
2003
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
巴斯德毕赤酵母高密度发酵表达rHC MVp的研究
余巍
谢琪璇
潘善培
肖銮娟
熊波
李文星
董志炜
《暨南大学学报（自然科学与医学版）》
CAS
CSCD
北大核心
2005
0
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职称材料
已选择
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