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重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性
被引量：
11
1
作者
张志珍
杨生生
毛积芳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期5-8,共4页
为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌B...
为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 .
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关键词
重组人胰高血糖素样肽-
1
融合蛋白
纯化
生物学活性
表达
在线阅读
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职称材料
人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性
被引量：
4
2
作者
狄旭
刘长征
+4 位作者
陈松森
张艳丽
邓艳春
孙兰
杨京
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期227-233,共7页
为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序...
为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .
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关键词
Gly—hPTH(
1
—34)衍生物
融合表达
羟胺切割
纯化
生物学活性
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职称材料
题名
重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性
被引量：
11
1
作者
张志珍
杨生生
毛积芳
机构
第二军医大学生物化学与分子生物学教研室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第1期5-8,共4页
文摘
为获得重组人胰高血糖素样肽 1[recombinanthumanglucagon likepeptide 1(7～ 37) ,rhGLP 1]并研究其生物学活性 ,采用亚磷酸二酯法合成hGLP 1cDNA的 6个寡核苷酸片段 ,拼接成完整的hGLP 1cDNA ,构建重组质粒pGEX hGLP 1,转化大肠杆菌BL2 1(DE3)获得表达菌株 .高密度发酵培养的菌体超声破碎后 ,裂解液用Glutathione Sepharose 4B亲和层析纯化得到GST融合蛋白 .经CNBr裂解、QAE SepharoseFF柱层析和脱盐 ,得到纯度大于 90 %的rhGLP 1,质谱测定分子量结果与理论值一致 .生物学活性分析表明 ,rhGLP 1具有明显的降血糖活性 .
关键词
重组人胰高血糖素样肽-
1
融合蛋白
纯化
生物学活性
表达
Keywords
recombinant hglp 1
,
fusion protein
,
purification
,
bioactivity
分类号
Q57 [生物学—生物化学]
R394.8 [医药卫生—医学遗传学]
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职称材料
题名
人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性
被引量：
4
2
作者
狄旭
刘长征
陈松森
张艳丽
邓艳春
孙兰
杨京
机构
医学分子生物学国家重点实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期227-233,共7页
文摘
为研究Gly hPTH(1 34)衍生物的生物学活性 ,用重叠PCR方法合成编码hPTH(1 34)的DNA片段 ,克隆到融合表达载体pGEX 2T的缩短型谷胱甘肽转移酶基因GST6 9△的 3′末端 ,构建正确读码框架的融合基因 .在两个基因间引入蛋白质羟胺切割位点序列 ,转入E .coliJM10 9中 ,IPTG诱导表达 .该融合蛋白的表达量占菌体总蛋白的 2 0 %以上 ,主要以包涵体形式存在 ,盐酸羟胺切割表达产物 .分析表明 ,80 %左右的融合蛋白被裂解为GST6 9△和Gly hPTH(1 34) .经分子筛柱层析和反相层析分离纯化获得重组Gly hPTH(1 34)衍生物 ,纯度达 98%以上 ,回收率约为 10mg/升发酵液 ,分子量为 4 177,等电点 (pI)为 8 4 0 ,N端 16个氨基酸 ,除第一个为甘氨酸外 ,其余与天然hPTH(1 34)序列一致 .Western印迹结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物具有hPTH(1 34)的免疫学活性 .体外活性测定结果表明 ,Gly hPTH(1 34)衍生物能刺激人成骨细胞HOSTE85增殖、增加细胞内胶原合成、ALP活性增高和cAMP生成量增加 ,并呈量效关系 ,提示它具有与化学合成的hPTH(1 34)相同的生物学活性 ,N端多一个Gly对其活性无明显影响 .
关键词
Gly—hPTH(
1
—34)衍生物
融合表达
羟胺切割
纯化
生物学活性
Keywords
Gly-PTH(1-34) analogue,
recombinant
fusion protein
, hydroxylamine cleavage,
purification
,
bioactivity
分类号
Q57 [生物学—生物化学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人胰高血糖素样肽-1的表达、纯化及其生物学活性
张志珍
杨生生
毛积芳
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
11
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人甲状旁腺素(1-34)衍生物在大肠杆菌中表达、纯化及其生物学活性
狄旭
刘长征
陈松森
张艳丽
邓艳春
孙兰
杨京
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2005
4
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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引证文献
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