重组犬瘟热病毒rCDV-3的转瓶培养及其在水貂体内的免疫效果评价

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作者 冯楚楚 蔡佳希 +2 位作者 李子树 王毓 薛向红 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期954-959,976,共7页

为克服犬瘟热疫苗生产病毒效价低的瓶颈,本研究在5 L转瓶中培养Vero细胞,接种重组犬瘟热病毒(CDV)(rCDV-3)和野生型CDV(CDV-3),比较二者的病毒滴度。将rCDV-3按10^(6.0)TCID_(50)接种小鼠和按不同剂量(10^(4.0)TCID_(50)~10^(6.0)TCID_(... 为克服犬瘟热疫苗生产病毒效价低的瓶颈,本研究在5 L转瓶中培养Vero细胞,接种重组犬瘟热病毒(CDV)(rCDV-3)和野生型CDV(CDV-3),比较二者的病毒滴度。将rCDV-3按10^(6.0)TCID_(50)接种小鼠和按不同剂量(10^(4.0)TCID_(50)~10^(6.0)TCID_(50))接种水貂,同时设立PBS对照组,免疫后观察各组小鼠及水貂的临床症状,并对小鼠称重。测定接种后小鼠(接种后14 d、28 d及56 d)和水貂(接种后7 d、14 d及28 d)血清中和抗体水平。接种后28 d用CDV强毒r HBF-1攻击免疫组和对照组水貂,21 d后采用荧光定量PCR(q PCR)测定攻毒后各组水貂直肠病毒排出量和各脏器病毒载量。结果显示,在5 L转瓶中,rCDV-3和CDV-3最高病毒滴度分别为10^(6.75)TCID_(50)/mL和10^(5.67)TCID_(50)/mL;接种后小鼠和水貂无临床症状,不同剂量感染的小鼠体质量百分比的变化基本一致,各组小鼠和水貂均产生了高水平的中和抗体。水貂攻毒后,免疫组水貂均无临床症状,对照组水貂出现体温升高、排便稀、结膜炎等典型CDV感染的临床症状,并在21 d内全部死亡。qPCR测定水貂直肠排毒量和脏器病毒载量,发现对照组的排毒量显著高于免疫组。对照组水貂心脏、肝脏、直肠和淋巴结的病毒载量均显著高于免疫组,且对照组水貂的心脏和淋巴结病毒载量最高。综上所述,本研究在5 L转瓶培养rCDV-3的增殖能力较强,并可诱导小鼠和水貂产生高水平的保护性体液免疫应答,并能够保护水貂抵抗CDV强毒攻击。表明,rCDV-3扩大培养后滴度高,为犬瘟热疫苗的进一步提质增效奠定基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 重组病毒 转瓶 疫苗

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犬细小病毒核酸疫苗、重组活载体疫苗与弱毒疫苗免疫犬实验研究 被引量：9

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作者 谢之景 杨松涛 +5 位作者 夏咸柱 闫芳 赵忠鹏 高玉伟 邹啸环 黄耕 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期1562-1566,共5页

分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检... 分别用犬细小病毒(CPV)核酸疫苗(pVCPV-VP2)、CPV重组活载体疫苗(CAV2/CPV)与CPV弱毒疫苗对犬进行了免疫试验,以检测不同CPV疫苗的免疫原性。采用CPV ELISA、CPV HI与CPV微量中和试验检测免疫犬的体液免疫水平,采用淋巴细胞转化试验检测犬的细胞免疫水平。结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV均能诱导机体产生抗CPV ELISA抗体与抗CPV中和抗体,但是pVCPV-VP2不能诱导机体产生可检测的抗CPV HI抗体,而CAV2/CPV能够诱导机体产生抗CPV HI抗体。淋巴细胞转化试验结果,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬的外周血淋巴细胞对ConA与CPV的刺激均出现明显的增殖反应。结果表明,pVCPV-VP2和CAV2/CPV免疫犬均能诱导机体产生抗CPV的特异性体液免疫反应和细胞免疫反应,两者所表达的VP2蛋白均具有较好的免疫原性。CAV2/CPV以及pVCPV-VP2和CAV2/CPV联合免疫犬的抗CPV体液免疫水平和细胞免疫水平均比用pVCPV-VP2单独免疫犬的体液免疫水平和细胞免疫水平高。但CAV2/CPV诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应仍然比CPV弱毒疫苗诱导机体产生的抗CPV特异性免疫反应弱。另外,CAV2/CPV还能诱导机体产生抗CAV-2的特异性免疫反应。 展开更多

关键词 犬细小病毒 核酸疫苗 重组活载体疫苗

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犬瘟热重组N蛋白抗原间接ELISA方法的建立及应用 被引量：13

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作者 姜骞 周洁 +6 位作者 刘家森 李慕瑶 司昌德 韩凌霞 孟庆文 陈洪岩 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期225-228,232,共5页

本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释... 本研究以纯化的犬瘟热病毒(CDV)重组N蛋白为诊断抗原,建立了犬瘟热病毒抗体检测的间接ELISA诊断方法,将其命名为rN-CDV ELISA。确定最佳抗原包被量为0.167μg/孔,待检血清最佳稀释倍数为1∶100,其作用时间为45 min,羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2 000,作用时间为60 min,S/P值≥0.208者判为阳性,S/P值≤0.16者判为阴性,介于两者之间者判为可疑。该抗原不与犬细小病毒、犬传染性肝炎、犬副粘病毒、犬波特氏杆菌等4种疾病的阳性血清反应,具有良好的特异性;批内、批间重复试验,变异系数均小于15%,具有良好的重复性;检测血清样品96份,与进口诊断试剂盒的符合率为97.1%。本研究为现地免疫犬群抗体检测和进行CDV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 重组N蛋白 间接ELISA

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犬细小病毒ELISA抗体检测试剂盒的研制及应用 被引量：9

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作者 姜骞 李慕瑶 +6 位作者 刘家森 司昌德 葛艳华 郭东春 韩凌霞 孟庆文 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第2期141-144,共4页

本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10... 本研究以纯化的犬细小病毒(CPV)重组VP2蛋白为包被抗原,建立了检测CPV抗体的间接ELISA方法,其抗原包被浓度为0.158μg/mL;待检血清稀释倍数为1∶100,作用时间为60min;羊抗犬酶标抗体稀释倍数为1∶2000,作用时间为60min;底物作用时间为10min;判定标准为S/P≥0.282时为阳性,S/P≤0.226时为阴性。该方法与犬瘟热、犬传染性肝炎、犬副粘病毒病、犬波特氏杆菌病等4种犬常见传染病阳性血清无交叉反应,具有较好的特异性;批内、批间重复试验变异系数均小于15%,显示该方法具有良好的重复性;与商品化CPVELISA试剂盒进行比较,符合率为96.5%。本研究为现地免疫犬群抗体监测和进行CPV流行病学调查提供了一种简便的血清学诊断方法。 展开更多

关键词 犬细小病毒 重组VP2蛋白 间接ELISA

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抗犬瘟热病毒重组核衣壳蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 被引量：9

5

作者 周洁 姜骞 +6 位作者 张洪英 刘家森 刘立奎 陈洪岩 韩凌霞 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期528-532,共5页

以纯化的重组犬瘟热病毒（CDV）N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1：106、1：105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻... 以纯化的重组犬瘟热病毒（CDV）N蛋白免疫BALB/c小鼠,应用常规杂交瘤技术获得两株能稳定分泌特异性单克隆抗体的杂交瘤细胞系,分别命名为A4C6C12和A5B8H7间接ELISA检测腹水效价分别为1：106、1：105;亚类鉴定结果分别为IgG2a、IgG2b,轻链均为K型;Western blot和ELISA分析结果显示2株单克隆抗体均能与重组N蛋白和CDV发生反应,而与犬细小病毒及犬腺病毒等无交叉反应;ELISA叠加试验的增值结果表明两株单克隆抗体识别的抗原位点不同.特异性抗CDV-rN的单克隆抗体的获得,为进一步用于临床诊断研究奠定了基础. 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 重组核衣壳蛋白 单克隆抗体

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犬干扰素-γ的稀释复性及活力测定 被引量：9

6

作者 陈忠广 张桂红 +2 位作者 夏春丽 李宝贤 李一经 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2008年第9期82-86,共5页

文章探讨了不同折叠促进剂、加样方式、温度、pH在稀释法复性条件下对重组犬IFN-γ体外折叠的复性影响。结果表明,0.5mol·L-1精氨酸、0.5mol·L-1盐酸胍、2.0mol·L-1尿素均能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,其中精氨酸... 文章探讨了不同折叠促进剂、加样方式、温度、pH在稀释法复性条件下对重组犬IFN-γ体外折叠的复性影响。结果表明,0.5mol·L-1精氨酸、0.5mol·L-1盐酸胍、2.0mol·L-1尿素均能有效抑制复性过程中蛋白质的聚集,其中精氨酸的效果最好。在4℃、pH8.0、精氨酸浓度0.5mol·L-1,蛋白浓度0.15mg·mL-1及脉冲加样操作方式下,复性后重组犬IFN-γ的活性为1.35×104U·mL-1,比活为3.74×106U·mg-1。 展开更多

关键词 重组犬IFN—γ 稀释复性 折叠促进剂 活性 比活 包涵体

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表达犬瘟热病毒融合蛋白基因重组腺病毒的构建与鉴定 被引量：3

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作者 鞠会艳 高玉伟 +1 位作者 杨松涛 夏咸柱 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期89-96,共8页

利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPol... 利用pVAX1载体的表达元件CMV启动子和poly(A)多聚腺苷酸信号构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因(F)的重组犬腺病毒。首先,利用酶切、连接等实验方法构建了含CDV启动子F蛋白基因表达盒的转移质粒pVAXΔE3LPF。再以含CAV-2SY株全基因组的pPoly2-CAV-2为载体,构建重组质粒pCAV-2-pVAXLPF,利用脂质体介导方法转染MDCK细胞,转染3次后,细胞出现了典型的犬腺病毒感染样病变。电镜负染和切片观察、酶切、PCR扩增及测序鉴定的结果表明,成功构建了含犬瘟热病毒融合蛋白基因的重组犬腺病毒,表达的融合蛋白分子质量为72ku。在MDCK细胞上连续传30代试验表明重组病毒CAV-2-pVAXLPF具有良好的遗传稳定性。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 融合蛋白基因 重组腺病毒

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犬干扰素α2的原核表达及抗病毒活性分析 被引量：5

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作者 姚凌云 王晶宇 +8 位作者 欧阳伟 钱晶 吴世妍 夏兴霞 诸玉梅 王晓丽 潘群兴 芮荣 王永山 《中国动物传染病学报》 CAS 北大核心 2018年第2期59-63,共5页

本研究将人工合成的犬干扰素α2成熟区序列插入原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-28a-Ca IFN-α2;然后将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,分子量约为23 k Da的... 本研究将人工合成的犬干扰素α2成熟区序列插入原核表达载体p ET-28a(+)中,构建重组表达质粒p ET-28a-Ca IFN-α2;然后将该质粒转化至大肠杆菌Rosetta感受态中进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE和Western blot分析鉴定,分子量约为23 k Da的目的蛋白表达,表达的重组蛋白主要以包涵体的形式存在,表达量约占菌体总蛋白的52.5%。包涵体蛋白经变性、复性和纯化处理后,获得的重组Ca IFN-α2纯度为92%;用MDCK/VSV微量细胞病变抑制法检测重组蛋白的抗病毒活性为3.16×106/m L。本研究结果为进一步研制新型犬用干扰素制品奠定了物质基础。 展开更多

关键词 重组犬干扰素α2 原核表达系统 抗病毒活性

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青海省犬隐孢子虫病的血清学检测 被引量：2

9

作者 马利青 王戈平 +4 位作者 陆艳 蔡其刚 叶成玉 李晓卉 牛小迎 《中国动物传染病学报》 CAS 2010年第4期65-67,共3页

利用重组的微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23蛋白作为ELISA诊断抗原,对来自青海地区的部分放牧犬和宠物藏獒犬进行隐孢子虫特异性抗体的检测。结果在497份血清中检出150份阳性血清,阳性率为30.18%。其中放牧犬阳性率为32.77%,... 利用重组的微小隐孢子虫(Cryptosporidium parvum)P23蛋白作为ELISA诊断抗原,对来自青海地区的部分放牧犬和宠物藏獒犬进行隐孢子虫特异性抗体的检测。结果在497份血清中检出150份阳性血清,阳性率为30.18%。其中放牧犬阳性率为32.77%,藏獒的阳性率为37.95%,宠物犬的阳性率为10.42%。 展开更多

关键词 隐孢子虫 重组蛋白 P23 ELISA 犬

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重组葡激酶对犬股动脉血栓的再通作用 被引量：3

10

作者 陈飞虎 杨军 +3 位作者 刘建辉 王静 智强 刘颖雪 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期447-449,共3页

目的　研究重组葡激酶对体内血栓的溶解作用。方法　采用狗股动脉富含红细胞血栓形成模型。结果　重组葡激酶明显减少狗股动脉富含红细胞血栓的长度及湿重，促进栓塞动脉再通，给药后，动脉血流量明显增加，再通率提高。结论　重组葡激... 目的　研究重组葡激酶对体内血栓的溶解作用。方法　采用狗股动脉富含红细胞血栓形成模型。结果　重组葡激酶明显减少狗股动脉富含红细胞血栓的长度及湿重，促进栓塞动脉再通，给药后，动脉血流量明显增加，再通率提高。结论　重组葡激酶具有极显著溶解犬实验性动脉血栓的作用，等剂量条件下。 展开更多

关键词 重组葡激酶 动脉血栓 溶栓疗法

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重组犬γ干扰素的分泌表达及抗病毒活性鉴定 被引量：2

11

作者 姜艳平 吴煜 +5 位作者 张希 姜新鹏 唐丽杰 乔薪瑗 崔文 李一经 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2015年第6期30-33,共4页

为了研究犬γ干扰素在抗病毒方面的应用价值,依据乳酸菌密码子的偏好性和原核表达载体p AMJ399的特点,在不改变编码蛋白的基础上,将原有的犬γ干扰素序列重新优化,构建重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565,获得了分泌表达的犬γ干... 为了研究犬γ干扰素在抗病毒方面的应用价值,依据乳酸菌密码子的偏好性和原核表达载体p AMJ399的特点,在不改变编码蛋白的基础上,将原有的犬γ干扰素序列重新优化,构建重组乳酸乳球菌p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565,获得了分泌表达的犬γ干扰素蛋白,将培养p AMJ399-Ca IFNγ/PSM565的培养上清液进行5倍浓缩后与MDCK细胞进行作用24 h后,接种VSV病毒,通过观察病变、MTT法检测活细胞数及荧光定量PCR检测方法,均证实该蛋白能够抑制VSV的复制,具有明显的抗病毒活性。为进一步研究犬γ干扰素在临床上的抗病毒应用和作为细胞因子佐剂的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 犬γ干扰素 重组乳酸乳球菌 分泌表达 活性检测

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表达猪繁殖与呼吸综合征病毒GP5蛋白基因重组犬2型腺病毒的构建及鉴定 被引量：2

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作者 周井祥 薛江东 +3 位作者 刘晔 张守峰 朱霞 扈荣良 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期920-923,共4页

为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切... 为构建表达猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)GP5蛋白的重组犬2型腺病毒(CAV-2),本研究将PRRSV GP5蛋白基因表达盒连接于E3区部分缺失的CAV-2全基因组重组质粒pPolyⅡ-CAV-2中,构建重组质粒pPoly-Ⅱ-CAV-2-GP5。并采用PmeⅠ和AscⅠ双酶切和脂质体介导法,将其转染MDCK细胞,获得重组病毒rCAV-2-GP5,经酶切鉴定显示该重组病毒含有目的基因。经RT-PCR检测表明,rCAV-2-GP5能够转录相应GP5蛋白基因mRNA;western blot检测证实GP5蛋白在MDCK细胞中得到表达。体外连续传30代检测表明,rCAV-2-GP5具有良好的遗传稳定性。本实验为PRRSV新型疫苗的研制奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 GP5蛋白 犬2型腺病毒 重组病毒

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犬瘟热病毒截短P蛋白单克隆抗体的制备与鉴定 被引量：1

13

作者 袁维峰 贾红 +5 位作者 于萍萍 侯绍华 郭晓宇 史利军 赵占中 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第4期22-25,共4页

为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤... 为制备针对犬瘟热病毒(canine distemper virus,CDV)P1蛋白的单克隆抗体(McAb),本研究利用重组犬瘟热病毒P1蛋白免疫BALB/c小鼠,并将其脾淋巴细胞与SP2/0进行融合,用CDV包被ELISA板,通过间接ELISA法筛选出两株稳定分泌抗CDV-P1的杂交瘤细胞株(E9E4C10、E9F8D9)。间接ELISA检测腹水效价均为1∶106,亚类鉴定结果均为IgG2b。Western blotting和间接免疫荧光(IFA)分析结果表明,两株单克隆抗体均能与重组P1蛋白和CDV发生反应;ELISA叠加试验增殖结果表明,两株单克隆抗体识别的抗原表位不同。本研究制备的特异性抗CDV-P1的单克隆抗体为建立CDV免疫学检测方法和P蛋白的功能研究奠定了基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 重组P蛋白 单克隆抗体 鉴定

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两种细胞株检测重组犬α-干扰素效价的比较 被引量：1

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作者 胡勇 俞海洋 +6 位作者 刘伯玉 赵俊 汤仁树 陈伟 沈杭 梅杨 王明丽 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期549-552,共4页

本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其... 本研究采用人羊膜细胞WISH株和人喉癌上皮细胞Hep-2株,以微量细胞病变抑制法(CPE抑制法)对同批次的8组重组犬α干扰素样品进行了效价检测,以中国药品生物制品检定所使用的标化重组人α干扰素为标准,将在两株细胞上所测结果进行比较。其检测的结果具有很好的相关性(r=0.9976,p>0.05),并且重复性较好。用结晶紫染色法评价干扰素效价能够准确地反应细胞的状态,所得结果准确、客观。表明Hep-2与WISH细胞测定结果没有差异,该方法可用于重组犬干扰素制品的效价测定。此外本研究还测定了最适试验条件如细胞浓度、接种用病毒滴度、加样方法等。 展开更多

关键词 重组犬α干扰素 效价 WISH细胞 HEP-2细胞

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国内流行犬瘟热病毒DNA重组疫苗的初步研究 被引量：1

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作者 吴凌 孙雨航 +2 位作者 许楚楚 李昌盛 夏成 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2016年第1期41-43,46,共4页

为了探究H蛋白的免疫原性以及抗体效价,构建了1株犬瘟热病毒（CDV）ZH-10株H基因的真核表达载体pCI-H,对表达产物的免疫原性进行了初步研究,并进行了小鼠的DNA免疫试验.结果显示,pCI-H免疫组血清可与感染病毒的MDCK细胞发生特异性IPMA... 为了探究H蛋白的免疫原性以及抗体效价,构建了1株犬瘟热病毒（CDV）ZH-10株H基因的真核表达载体pCI-H,对表达产物的免疫原性进行了初步研究,并进行了小鼠的DNA免疫试验.结果显示,pCI-H免疫组血清可与感染病毒的MDCK细胞发生特异性IPMA反应呈现特异的棕红色;ELISA血清抗体滴度可达1∶28～1∶79;病毒中和抗体可达1∶11～1∶32.研究结果表明,H蛋白具有免疫原性,但诱导抗体效价不足,需进一步完善. 展开更多

关键词 犬瘟热 ZH-10株 H基因 真核表达 DNA重组疫苗

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增强型绿色荧光蛋白eGFP基因与犬瘟热N蛋白基因重组质粒的构建

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作者 夏婷婷 苏晓慧 +1 位作者 翟少华 简子健 《新疆农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期349-353,共5页

【目的】构建增强型绿色荧光蛋白(e GFP)基因与犬瘟热核蛋白N基因(CDV N)的重组质粒,为获得犬瘟热重组病毒的感染性克隆奠定研究基础。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增e GFP,CDV N基因,并融合重组基因。【结果】成功克隆了e GFP基因和... 【目的】构建增强型绿色荧光蛋白(e GFP)基因与犬瘟热核蛋白N基因(CDV N)的重组质粒,为获得犬瘟热重组病毒的感染性克隆奠定研究基础。【方法】设计重组PCR引物,分别扩增e GFP,CDV N基因,并融合重组基因。【结果】成功克隆了e GFP基因和CDV N基因,大小分别为720 bp和1 572 bp,经测序鉴定与Gen Bank中已发表的e GFP(登录号:X83959)和CDV N(登录号:AY466011)序列同源性分别为100%和99.81%。重组基因e GFP-CDV N大小为2 292 bp,与预期大小一致。【结论】采用重组PCR技术构建的Te GFP-CDVN重组质粒,可用于e GFP-CDVN重组蛋白的表达。 展开更多

关键词 重组PCR EGFP基因 犬瘟热N蛋白 重组基因

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重组犬α干扰素急性毒性试验研究

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作者 罗畅民 赵俊 +4 位作者 汤仁树 李京培 胡勇 王燕来 王明丽 《现代农业科技》 2010年第14期286-287,共2页

为观察小鼠体内重组犬α干扰素急性毒性反应,进行重组犬α干扰素临床安全用药试验。结果表明:在连续观察14 d内,各组小鼠外部表现及行为特征均正常,体温和体重的变化也在正常范围之内,内脏病理解剖无器官病变情况,血液生化指标检查;注射... 为观察小鼠体内重组犬α干扰素急性毒性反应,进行重组犬α干扰素临床安全用药试验。结果表明:在连续观察14 d内,各组小鼠外部表现及行为特征均正常,体温和体重的变化也在正常范围之内,内脏病理解剖无器官病变情况,血液生化指标检查;注射1.0×106IU/只雌性小鼠ALT为(85.2±5.2)U/L,较正常对照组高,其他各组生化指标与对照组相比无显著性差异(P>0.05)。可见,该试验设定的最高剂量1.0×106IU/只及其以下剂量对小白鼠均无明显毒性作用,在临床上应用该重组犬α干扰素是安全的。 展开更多

关键词 重组犬α干扰素 急性毒性实验 小鼠

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表达犬瘟热病毒H基因重组新城疫病毒的构建及其免疫原性研究 被引量：4

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作者 田美杰 葛金英 +7 位作者 王喜军 冯娜 马良 帅磊 苏华 高玉伟 夏咸柱 步志高 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期257-261,共5页

为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活... 为研制安全、有效的新型犬瘟热疫苗,本研究利用新城疫病毒(NDV)LaSota弱毒疫苗株反向遗传操作系统,构建出表达犬瘟热病毒(CDV)弱毒疫苗株Rockborn-20/8血凝素(H)蛋白的重组病毒rLa-CDV-H,并对其生物学特性进行鉴定,评估其作为犬瘟热活载体疫苗的安全性和有效性。通过免疫荧光和western blot试验证明了CDV H蛋白的正确表达;重组病毒株保持了LaSota亲本株的低致病性和高滴度鸡胚生长特性;重组病毒rLa-CDV-H接种12周龄比格犬后,可以诱导显著的CDV中和抗体反应。本研究表明重组病毒rLa-CDV-H具有作为犬瘟热重组病毒活载体疫苗的潜力。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 血凝素蛋白 重组新城疫病毒

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犬瘟热病毒F1蛋白的原核表达及其抗原性分析 被引量：2

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作者 江勇 姜骞 +5 位作者 林欢 刘家森 郭东春 韩凌霞 司昌德 曲连东 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期405-407,共3页

为表达和鉴定犬瘟热病毒(CDV)F1蛋白,本研究通过RT-PCR扩增了CDV HLJ2-07株F1基因,并将其克隆至pET-30a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为47.5ku以包涵体形式表达的F1重组蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白31.5%。West... 为表达和鉴定犬瘟热病毒(CDV)F1蛋白,本研究通过RT-PCR扩增了CDV HLJ2-07株F1基因,并将其克隆至pET-30a(+)载体中,转化大肠杆菌BL21(DE3),在IPTG诱导下获得大小约为47.5ku以包涵体形式表达的F1重组蛋白,重组蛋白占菌体总蛋白31.5%。Western blot分析表明,表达产物能够被兔抗CDV阳性血清所识别,具有良好的抗原性。间接ELISA检测表明,重组蛋白与犬细小病毒、犬副流感病毒、犬传染性肝炎病毒及犬波特氏杆菌等疾病的阳性血清无交叉反应。本研究为进一步建立检测CDV抗体间接ELISA方法及研制F1蛋白亚单位疫苗奠定了基础。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 F1重组蛋白 抗原性

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犬瘟热病毒疫苗变异株的分离及其P1蛋白的表达、鉴定 被引量：2

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作者 于萍萍 贾红 +4 位作者 侯绍华 袁维峰 郭晓宇 崔治中 朱鸿飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第5期30-34,共5页

从河北某宠物医院病犬的脾脏中分离到1株犬瘟热病毒,H基因测序结果表明,该分离株与疫苗株的同源性为99.5%,有3个氨基酸突变,但不影响其糖基化位点。将该株病毒P1基因克隆到pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta感受态细胞,在I... 从河北某宠物医院病犬的脾脏中分离到1株犬瘟热病毒,H基因测序结果表明,该分离株与疫苗株的同源性为99.5%,有3个氨基酸突变,但不影响其糖基化位点。将该株病毒P1基因克隆到pET32a(+)载体,转化大肠杆菌BL21(DE3)及Rosetta感受态细胞,在IPTG诱导下获得大小为50ku,可溶性表达的P1重组蛋白。Western blotting、间接ELISA试验结果显示表达产物能被犬瘟热高免血清所识别,表明其具有良好的反应原性,有望用于犬瘟热的检测。 展开更多

关键词 犬瘟热病毒 变异株 P1重组蛋白 抗原性

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