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基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum): 1; 作者谭英赵玲敏 +5 位作者翁齐彪黄力行鄢庆枇黄将远白月郑江《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期942-950,共9页; 鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配... 展开更多; 关键词鳗弧菌核酸适配体实时荧光定量pcr 检测限; 在线阅读下载PDF 职称材料

白斑综合征病毒和对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1: 2; 作者李海平葛辉 +7 位作者温凭吴丽云李慧耀巫旗生张哲杨求华何丽斌徐春燕《渔业研究》 2024年第6期572-579,共8页; 【背景】白斑综合征病毒(WSSV)是一种高度传染性和致命性的病原体,对全球虾类养殖业构成重大威胁。WSSV可通过水平传播和垂直传播迅速扩散,虾在感染WSSV 3~10 d内累积死亡率最高可达到100%。由于缺乏有效的预防和治疗措施,开发快速、准... 展开更多; 关键词白斑综合征病毒(WSSV) 荧光定量pcr TAQMAN探针病毒检测水产养殖; 在线阅读下载PDF 职称材料

一种山茶刺盘孢Colletotrichum camelliae实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：2: 3; 作者张晓阳程淑媛 +11 位作者蒋军喜陈艳黄纪刚刘爽刘克东邱慧芳江武叶茵袁倩余玉华单崇蕾刘家鑫《生物灾害科学》 2024年第1期134-141,共8页; 【目的】建立一种快速检测茶树炭疽病病原菌山茶刺盘孢(Colletotrichumcamelliae)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以茶树炭疽病病原菌山茶刺盘孢(C. camelliae)为检测目标,根据刺盘孢属ApMat基因片段设计特异性引物,建立q PCR检测... 展开更多; 关键词茶炭疽病山茶刺盘孢实时荧光定量pcr 快速检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR检测技术研究被引量：11: 4; 作者韩阳张丽辉 +3 位作者王永吉林琳周丽洪姬广海《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期315-320,共6页; 水稻细菌性条斑病是我国水稻上的检疫性病害之一。设计并筛选出特异性引物对Xoc2071F/Xoc2071R(Xoc2071),其扩增片段大小为329 bp,利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法进行水稻细菌性条斑菌的实时荧光PCR检测。结果表明,引物对Xoc2071能特... 展开更多; 关键词水稻细菌性条斑病菌检测荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

乳品检测中实时荧光定量PCR仪的研制: 5; 作者彭年才苏明权张镇西《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2007年第5期62-64,共3页; 完成了荧光检测系统、PCR热循环扩增系统、DNA核酸定量分析诊断系统等仪器关键技术研究,针对乳品检验及临床应用要求,在国家权威部门完成了仪器性能检测、使用验证、临床试验等全过程,实现了产品化和应用示范,并达到了准确性、安全性和... 展开更多; 关键词乳品检验荧光pcr仪快速检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

马铃薯Y病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用被引量：4: 6; 作者李玉琦李秋丽 +6 位作者王雅丽黄珊珊胡超肖婉露黄雅敏赵鹏飞黄伟《中国蔬菜》北大核心 2020年第12期22-27,共6页; 根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,相关系数R^2为0.9912,可特异性检测PVY,灵敏度达常规RT-PCR的1... 展开更多; 关键词马铃薯Y病毒实时荧光定量RT-pcr RT-pcr 定量检测; 在线阅读下载PDF 职称材料

重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测: 7; 作者孙华张自德 +1 位作者江仁望王峰《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期186-191,195,共7页; 为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过... 展开更多; 关键词过氧化氢酶表达纯化过氧化氢酶活性 DNA损伤保护荧光定量pcr; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum): 1; 作者谭英赵玲敏翁齐彪黄力行鄢庆枇黄将远白月郑江; 机构海水养殖生物育种全国重点实验室、鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心、集美大学水产学院福建省鳗鱼养殖与加工重点实验室、长乐聚泉食品有限公司; 出处《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期942-950,共9页; 基金福建省自然科学基金项目,2021J01823号,2023J01762号厦门市科技补助项目,2023CXY0302号鳗鲡现代产业技术教育部工程研究中心开放基金项目,RE202308号。; 文摘鳗弧菌(Vibrio anguillarum)可感染鲈鱼、鳗鲡等多种水产养殖动物,是水产养殖中的重要病原菌,对其进行快速检测是病害防控的基础。利用鳗弧菌与其核酸适配体间较强的亲和特异性,通过核酸适配体来识别、结合鳗弧菌,然后以结合的核酸适配体为模板,进行SYBR Green I实时荧光定量PCR(qPCR)扩增,通过Ct值来定量检测鳗弧菌的浓度,从而建立了鳗弧菌的适配体-qPCR定量检测方法。从特异性、标准曲线、灵敏度、重复性和应用效果对该方法进行分析,表明该方法具有很强的特异性,能特异性地扩增鳗弧菌,且对哈维氏弧菌、溶藻弧菌、变形假单胞菌、大肠杆菌、嗜水气单胞菌和迟钝爱德华氏菌均无扩增;在10^(3)~10^(11) CFU/L的检测范围内有较好的线性关系,可用于鳗弧菌的定量检测;同时,该方法有较高的灵敏度和稳定性,其最低检测限为10^(3) CFU/L,组内和组间变异系数分别小于0.17%和1.98%;最后采用该方法对鱼体组织样品进行了应用检测,证明了该方法具有较好的可行性和应用性,可用于水产品或食品中鳗弧菌的定量检测。; 关键词鳗弧菌核酸适配体实时荧光定量pcr 检测限; Keywords Vibrio anguillarum aptamer real-time quantitative pcr(qpcr) limit of detection; 分类号 S947 [农业科学—水产养殖] Q939 [生物学—微生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名白斑综合征病毒和对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法的建立被引量：1: 2; 作者李海平葛辉温凭吴丽云李慧耀巫旗生张哲杨求华何丽斌徐春燕; 机构福建海洋研究所福建省水产研究所; 出处《渔业研究》 2024年第6期572-579,共8页; 基金福建省属公益类科研院所基本科研专项(2022R1007003、2022R1013007) 2023年度“揭榜挂帅”科技项目(2023F05) 2023年度福建省促进海洋与渔业产业高质量发展专项资金项目(FJHYF-L-2023-5)。; 文摘【背景】白斑综合征病毒(WSSV)是一种高度传染性和致命性的病原体,对全球虾类养殖业构成重大威胁。WSSV可通过水平传播和垂直传播迅速扩散,虾在感染WSSV 3~10 d内累积死亡率最高可达到100%。由于缺乏有效的预防和治疗措施,开发快速、准确和敏感的WSSV检测技术对及时诊断和实施控制措施至关重要。【目的】建立一种WSSV和对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法,提高WSSV检测的灵敏度和特异性。【方法】首先,基于WSSV基因组保守序列设计合成特异性引物和TaqMan探针,建立WSSV单重荧光定量PCR检测体系,经特异性和重复性试验证实,该方法对WSSV具有良好的特异性和重复性。在此基础上,设计合成凡纳滨对虾(Litopenaeus vannamei)内参基因引物和探针,并对引物碱基进行优化替换,建立WSSV-对虾内参基因双重荧光定量PCR检测体系。【结果】敏感性试验结果显示,该双重检测体系对WSSV的检测下限可达15拷贝·μL^(-1),在6.6~6.6×10^(5)拷贝·μL^(-1)范围内,WSSV质粒标准品的起始模板量对数值与循环阈值(Ct值)呈良好的线性关系(R^(2)=0.9930)。同时,内参基因的引入可有效地区分样本中由核酸提取或操作问题引起的假阴性结果。【结论】综上所述,本研究建立的WSSV-对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法灵敏度高、特异性强、重复性好,可为WSSV的快速诊断及流行病学调查提供可靠的技术手段,对控制WSSV的暴发流行、保障对虾养殖业的可持续发展具有重要意义。; 关键词白斑综合征病毒(WSSV) 荧光定量pcr TAQMAN探针病毒检测水产养殖; Keywords white spot syndrome virus(WSSV) real-time fluorescence quantitative pcr(qpcr) TaqMan probe virus detection aquaculture; 分类号 S917.4 [农业科学—水产科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名一种山茶刺盘孢Colletotrichum camelliae实时荧光定量PCR快速检测方法的建立被引量：2: 3; 作者张晓阳程淑媛蒋军喜陈艳黄纪刚刘爽刘克东邱慧芳江武叶茵袁倩余玉华单崇蕾刘家鑫; 机构九江市农业技术推广中心江西农业大学农学院九江市柴桑区农业技术推广中心九江市农业科学院上犹县农业技术推广中心; 出处《生物灾害科学》 2024年第1期134-141,共8页; 基金江西省研究生创新专项资金项目(YC2022-B109) 九江市重点研发计划项目(S2022ZDYFN369、S2022ZDYFN344)。; 文摘【目的】建立一种快速检测茶树炭疽病病原菌山茶刺盘孢(Colletotrichumcamelliae)的实时荧光定量PCR检测方法。【方法】以茶树炭疽病病原菌山茶刺盘孢(C. camelliae)为检测目标,根据刺盘孢属ApMat基因片段设计特异性引物,建立q PCR检测技术体系,验证引物特异性,测试反应的灵敏度,绘制标准曲线,并采集田间病叶测试检测效果。【结果】设计的四组引物对中,引物对CcF/CcR特异性最好,扩增效率最高;用于定量检测C. camelliae的灵敏度为10 pg/μL,DNA浓度的对数(X)与Ct值(Y)之间的线性关系为Y=-3.529 6X+36.938(R^(2)=0.9957,E=92.01);该体系检测C.camelliae溶解曲线对应的特异峰值Tm为(85.5±0.5)℃;用该体系在人工接种C. camelliae的病斑组织和田间病叶中检测到了C. camelliae的存在。【结论】建立的q PCR反应体系可特异性定量检测C. camelliae,并可应用于田间病害的早期诊断。; 关键词茶炭疽病山茶刺盘孢实时荧光定量pcr 快速检测; Keywords Camellia sinensis Colletotrichum camellia real-time quantitative pcr(qpcr) rapid detection; 分类号 S435.711 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR检测技术研究被引量：11: 4; 作者韩阳张丽辉王永吉林琳周丽洪姬广海; 机构云南农业大学植物保护学院; 出处《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2012年第3期315-320,共6页; 基金农业部公益性(农业)行业科研专项(3-23) 公益性行业(农业)科研专项(201003029); 文摘水稻细菌性条斑病是我国水稻上的检疫性病害之一。设计并筛选出特异性引物对Xoc2071F/Xoc2071R(Xoc2071),其扩增片段大小为329 bp,利用SYBR GreenI荧光定量PCR方法进行水稻细菌性条斑菌的实时荧光PCR检测。结果表明,引物对Xoc2071能特异性检测到目标病原菌产生荧光信号而其他菌种不产生荧光信号。检测的灵敏度是2.25 fg/μL质粒DNA和1.0×102cfu/mL的菌悬液,相当于1个细菌的基因,比常规PCR电泳检测的灵敏度高约100倍。此实时荧光PCR可以检测到仅需10 g的带菌种子上目标菌的存在。; 关键词水稻细菌性条斑病菌检测荧光定量pcr; Keywords Xanthomonas oryzae pv. oryzicola detection fluorescence quantitative pcr （qpcr）; 分类号 S435.111.49 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名乳品检测中实时荧光定量PCR仪的研制: 5; 作者彭年才苏明权张镇西; 机构西安天隆科技有限公司第四军医大学西京医院分子生物学研究中心西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室; 出处《中国乳品工业》 CAS 北大核心 2007年第5期62-64,共3页; 文摘完成了荧光检测系统、PCR热循环扩增系统、DNA核酸定量分析诊断系统等仪器关键技术研究,针对乳品检验及临床应用要求,在国家权威部门完成了仪器性能检测、使用验证、临床试验等全过程,实现了产品化和应用示范,并达到了准确性、安全性和有效性的要求。; 关键词乳品检验荧光pcr仪快速检测; Keywords real-time pcr quantitative pcr nucleic acid detection system development of qpcr system; 分类号 TS252.7 [轻工技术与工程—农产品加工及贮藏工程]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名马铃薯Y病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用被引量：4: 6; 作者李玉琦李秋丽王雅丽黄珊珊胡超肖婉露黄雅敏赵鹏飞黄伟; 机构平顶山市农业科学院甘肃省农业科学院马铃薯研究所; 出处《中国蔬菜》北大核心 2020年第12期22-27,共6页; 基金甘肃省农业科学院重点研发计划项目(2019GAAS16)。; 文摘根据文献报道和GenBank已登录序列设计引物建立了马铃薯Y病毒(potato virus Y,PVY)实时荧光定量RT-PCR检测技术体系。该技术标准曲线循环阈值与模板浓度呈现良好的线性关系,相关系数R^2为0.9912,可特异性检测PVY,灵敏度达常规RT-PCR的1000倍,重复性好。利用建立的检测方法对山东省、青海省、贵州省、黑龙江省和河北省5个地区马铃薯植株中的PVY进行检测,检出率较常规RT-PCR技术分别高16.00、33.33、25.00、14.29、20.00百分点。因此,建立的PVY实时荧光定量RT-PCR检测体系具有特异性强、灵敏度高的特点,可以快速、准确地检测马铃薯带病种薯和植株中PVY的含量,为马铃薯Y病毒的早期监测和有效防治提供了有效的技术手段。; 关键词马铃薯Y病毒实时荧光定量RT-pcr RT-pcr 定量检测; Keywords potato virus Y RT-qpcr RT-pcr quantitative detection; 分类号 S435.32 [农业科学—农业昆虫与害虫防治]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测: 7; 作者孙华张自德江仁望王峰; 机构暨南大学药学院暨南大学中药药效物质基础及创新药物研究广东省高校重点实验室; 出处《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期186-191,195,共7页; 基金广东省教育厅科技创新项目(2012KJCX0017); 文摘为了了解人过氧化氢酶在各种常见肿瘤细胞中的表达情况,构建人过氧化氢酶的原核表达载体,在大肠杆菌中表达、纯化人过氧化氢酶,并进行活性检测.我们通过常规分子克隆手段构建原核表达载体pET-15bhCAT,将其转化大肠杆菌Rosetta-gami,经过IPTG诱导,表达产物经超声破碎后用Ni-NTA柱进行亲和层析纯化,用试剂盒检测重组hCAT酶活性,然后检测其对DNA氧化损伤的保护作用.通过荧光定量PCR(qPCR)测定hCAT基因在HLF-1正常细胞与几种常见肿瘤细胞中的表达情况.本研究成功构建了pET-15b-hCAT的原核表达载体,SDSPAGE检测结果表明,IPTG诱导表达出一条分子质量约为59.7 ku的目的蛋白,该蛋白主要以可溶的形式存在,活性检测表明经纯化得到的rhCAT比活力为62.9 U/mg,pUC19质粒氧化损伤保护实验显示rhCAT对DNA有一定的损伤保护作用.qPCR检测显示hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.成功构建了人过氧化氢酶的原核表达载体,利用大肠杆菌Rosetta-gami获得了hCAT的可溶性表达,纯化的rhCAT具有活性,hCAT基因在U937、K562、PC3、HeLa、HT-1080、HepG-2等肿瘤细胞中的表达量明显低于HLF-1正常细胞.这为后续功能研究及性质实验奠定了基础.; 关键词过氧化氢酶表达纯化过氧化氢酶活性 DNA损伤保护荧光定量pcr; Keywords hydrogen peroxidase expression and purification rhCAT activity protective of DNA oxidant damage real-tine quantitative pcr detecting system （qpcr）; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	基于核酸适配体的SYBR Green I qPCR法检测鳗弧菌(Vibrio anguillarum)	谭英赵玲敏翁齐彪黄力行鄢庆枇黄将远白月郑江	《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心	2024	0	在线阅读下载PDF 职称材料
2	白斑综合征病毒和对虾内参基因双重荧光定量PCR检测方法的建立	李海平葛辉温凭吴丽云李慧耀巫旗生张哲杨求华何丽斌徐春燕	《渔业研究》	2024	1	在线阅读下载PDF 职称材料
3	一种山茶刺盘孢Colletotrichum camelliae实时荧光定量PCR快速检测方法的建立	张晓阳程淑媛蒋军喜陈艳黄纪刚刘爽刘克东邱慧芳江武叶茵袁倩余玉华单崇蕾刘家鑫	《生物灾害科学》	2024	2	在线阅读下载PDF 职称材料
4	水稻细菌性条斑病菌的实时荧光PCR检测技术研究	韩阳张丽辉王永吉林琳周丽洪姬广海	《云南农业大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心	2012	11	在线阅读下载PDF 职称材料
5	乳品检测中实时荧光定量PCR仪的研制	彭年才苏明权张镇西	《中国乳品工业》 CAS 北大核心	2007	0	在线阅读下载PDF 职称材料
6	马铃薯Y病毒实时荧光定量RT-PCR检测体系的建立及应用	李玉琦李秋丽王雅丽黄珊珊胡超肖婉露黄雅敏赵鹏飞黄伟	《中国蔬菜》北大核心	2020	4	在线阅读下载PDF 职称材料
7	重组人过氧化氢酶在大肠杆菌中的表达、纯化和活性检测	孙华张自德江仁望王峰	《暨南大学学报（自然科学与医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2014	0	在线阅读下载PDF 职称材料