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白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用
被引量：
15
1
作者
李红梅
江晓
+5 位作者
刘助红
赵哲
任春华
胡超群
石磊
王广军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期142-148,共7页
研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、R...
研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、Real-time PCR和其他已发表的4种LAMP方法在检测灵敏度、实际应用方面进行比较。结果显示,研究建立的实时荧光LAMP检测方法在63℃恒温反应30min可检测到最低为105倍稀释的基因组DNA模板,与Real-time PCR检测方法的灵敏度相当,高于巢式PCR和其他已发表的4种LAMP方法的检测灵敏度;而且特异性较好,与传染性皮下及造血组织坏死病毒等5种常见对虾病原DNA均无交叉反应。通过构建质粒进一步进行灵敏度测试显示,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法最低检测限度为24个拷贝质粒DNA,检出时间亦为30min。通过对66份待检样品的检测结果显示,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为7.57%,准确率为100%,高于其他WSSV的检测方法。因此,研究建立的WSSV实时荧光LAMP检测方法,操作简单,反应速度快,特异性好,灵敏度高,成本低廉,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合对虾养殖现场及诊断实验室的WSSV快速检测。
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关键词
白斑综合症病毒
实时荧光L
amp
ESE-Quant
TUBE
SCANNER
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职称材料
实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌
被引量：
25
2
作者
贾雅菁
付博宇
+4 位作者
王羽
马晓燕
张先舟
苑宁
张伟
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期184-189,共6页
建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated i...
建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,Real Amp)检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了Real Amp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/m L,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/m L。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。
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关键词
实时荧光环介导等温扩增检测技术
蜡样芽胞杆菌
检测
牛乳
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职称材料
题名
白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用
被引量：
15
1
作者
李红梅
江晓
刘助红
赵哲
任春华
胡超群
石磊
王广军
机构
中国科学院南海海洋研究所热带海洋生物资源与生态重点实验室
广州迪澳生物科技有限公司
中国水产科学研究院珠江水产研究所
出处
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第1期142-148,共7页
基金
广东省中国科学院全面战略合作项目(2011B090300040)
广东省鱼病防治专项资金项目资助
文摘
研究利用ESE-Quant tube scanner检测平台,建立了一套基于环介导等温扩增技术(Loop-Mediated Isothermal Amplification,LAMP)的实时荧光检测方法,用于白斑综合征病毒(White Spot Syndrome Virus,WSSV)的检测;并在此基础上,与巢式PCR、Real-time PCR和其他已发表的4种LAMP方法在检测灵敏度、实际应用方面进行比较。结果显示,研究建立的实时荧光LAMP检测方法在63℃恒温反应30min可检测到最低为105倍稀释的基因组DNA模板,与Real-time PCR检测方法的灵敏度相当,高于巢式PCR和其他已发表的4种LAMP方法的检测灵敏度;而且特异性较好,与传染性皮下及造血组织坏死病毒等5种常见对虾病原DNA均无交叉反应。通过构建质粒进一步进行灵敏度测试显示,本研究建立的实时荧光LAMP检测方法最低检测限度为24个拷贝质粒DNA,检出时间亦为30min。通过对66份待检样品的检测结果显示,实时荧光LAMP检测方法的检出阳性率为7.57%,准确率为100%,高于其他WSSV的检测方法。因此,研究建立的WSSV实时荧光LAMP检测方法,操作简单,反应速度快,特异性好,灵敏度高,成本低廉,可以直观、实时地观察反应的进行情况,适合对虾养殖现场及诊断实验室的WSSV快速检测。
关键词
白斑综合症病毒
实时荧光L
amp
ESE-Quant
TUBE
SCANNER
Keywords
White spot syndrome virus(WSSV)
real-time
fluorescence
loop mediated
isothermal
amplification
(
real
amp
)
ESE-Quant tube scanner
分类号
S945.4 [农业科学—水产养殖]
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职称材料
题名
实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌
被引量：
25
2
作者
贾雅菁
付博宇
王羽
马晓燕
张先舟
苑宁
张伟
机构
河北农业大学食品科技学院
河北农业大学理工学院
出处
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016年第6期184-189,共6页
基金
河北省自然科学基金项目(C2008000216)
文摘
建立牛乳中蜡样芽孢杆菌便捷可靠的检测方法,根据已公布的蜡样芽孢杆菌hbl A基因序列设计内外引物,并向反应体系中加入荧光染料SYBRGreenⅠ,利用实时荧光监测仪,建立实时荧光环介导等温扩增技术(real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification,Real Amp)检测蜡样芽孢杆菌的方法,扩增产物经电泳和酶切鉴定。通过21株致病菌验证RealAmp特异性,并比较了Real Amp与普通环介导等温扩增技术的敏感性,对人工污染的检出限进行了测定。结果表明对21 株致病菌进行特异性实验,4株蜡样芽胞杆菌呈阳性结果,17株非蜡样芽胞杆菌均呈阴性结果。RealAmp检测纯菌的灵敏度为8.2 CFU/m L,比普通环介导等温扩增技术的灵敏度高10倍,人工污染牛乳RealAmp的检出限为8.2 CFU/m L。并且在20 min左右即可判定结果。该方法快速、准确、灵敏度高、操作便捷、可实时监控检测蜡样芽孢杆菌,有望成为快速检测蜡样芽孢杆菌的有效方法。
关键词
实时荧光环介导等温扩增检测技术
蜡样芽胞杆菌
检测
牛乳
Keywords
real-time fluorescence loop-mediated isothermal amplification（real amp）
Bacillus cereus
detection
milk
分类号
TS207.4 [轻工技术与工程—食品科学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
白斑综合症病毒实时荧光LAMP检测方法的建立及应用
李红梅
江晓
刘助红
赵哲
任春华
胡超群
石磊
王广军
《水生生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
15
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
实时荧光环介导等温扩增技术检测牛乳中的蜡样芽孢杆菌
贾雅菁
付博宇
王羽
马晓燕
张先舟
苑宁
张伟
《食品科学》
EI
CAS
CSCD
北大核心
2016
25
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