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竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用
被引量：
1
1
作者
叶碧欢
陈友吾
+4 位作者
舒金平
张威
张亚波
李海波
宋其岩
《浙江农林大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期644-651,共8页
【目的】筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因,为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。【方法】基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据,利用实时荧光定量PCR扩...
【目的】筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因,为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。【方法】基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据,利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物,分析相关性和扩增效率;利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a),并验证其表达稳定性。【结果】GeNorm分析结果显示:PRS27a和RPS3的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH;最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示:RPL13α的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示:β-actin和GAPDH的P>0.5,不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因,6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。【结论】PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。
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关键词
森林保护学
竹林金针虫
平沙绿僵菌
内参基因
实时荧光定量
pcr
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职称材料
MiR-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用
被引量：
6
2
作者
程孟文
周毅
《口腔医学研究》
CAS
北大核心
2017年第9期928-932,共5页
目的:探讨微小RNA-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用。方法:体外分离培养人牙周膜细胞(hPDLCs),取第3~6代用于实验。首先,对hPDLCs进行成骨诱导液处理,在3、7、14d后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34a基因的表达变化。然后,构...
目的:探讨微小RNA-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用。方法:体外分离培养人牙周膜细胞(hPDLCs),取第3~6代用于实验。首先,对hPDLCs进行成骨诱导液处理,在3、7、14d后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34a基因的表达变化。然后,构建慢病毒载体pCDH-pre-miR-34a和pCDH,将慢病毒载体感染hPDLCs,构建pre-miR-34a过表达细胞模型(hPDLCs/34a)和空载体对照细胞模型(hPDLCs/pCDH),并诱导hPDLCs成骨分化3、7、14和21d。分析成骨标志基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)及骨涎蛋白(BSP)表达变化,ALP活性及钙化结节形成的茜素红染色情况。结果:hPDLCs经成骨分化诱导后,miR-34a基因表达在第3天开始明显升高,并呈逐渐增高趋势,差异均有统计学意义(P<0.001)。与hPDLCs/pCDH组相比,hPDLCs/34a组的ALP活性和茜素红染色均有明显减弱。qRT-PCR结果显示:hPDLCs/34a组的ALP表达量在成骨诱导7d时较hPDLCs/pCDH组降低(P<0.05);Runx2、OCN及BSP表达量的差异在各时间点基本无统计学意义。结论:在体外条件下,miR-34a抑制人牙周膜细胞成骨向分化。
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关键词
人牙周膜细胞
成骨分化
微小RNA-34a
实时荧光定量
pcr
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职称材料
题名
竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用
被引量：
1
1
作者
叶碧欢
陈友吾
舒金平
张威
张亚波
李海波
宋其岩
机构
浙江省林业科学研究院
中国林业科学研究院亚热带林业研究所
出处
《浙江农林大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期644-651,共8页
基金
浙江省自然科学基金资助项目(LQ19C160006)
浙江省省属科研院所资助项目(2019F1068-1)。
文摘
【目的】筛选平沙绿僵菌Metarhizium pingshaense侵染条件下筛胸梳爪叩甲Melanotus cribricollis幼虫稳定表达的内参基因,为该竹林金针虫相关基因的表达研究奠定基础。【方法】基于筛胸梳爪叩甲幼虫的转录组数据,利用实时荧光定量PCR扩增特异性引物,分析相关性和扩增效率;利用GeNorm、NormFinder和BestKeeper软件评估筛选出6个候选内参基因(β-actin、GAPDH、α-tubulin、RPL13α、RPS3、RPS27a),并验证其表达稳定性。【结果】GeNorm分析结果显示:PRS27a和RPS3的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPL13α、β-actin和GAPDH;最适合的内参基因数目为2。NormFinder分析结果显示:RPL13α的表达最稳定,随后依次是α-tubulin、RPS3、RPS27a、β-actin和GAPDH。BestKeeper分析结果显示:β-actin和GAPDH的P>0.5,不适合作为本试验条件下的内参基因。不同软件分析得出的候选内参排序存在一定差异。综合分析和表达稳定性验证表明PRS27a或RPS3是最佳内参基因,6个目的基因的表达水平变化趋势均基本一致。【结论】PRS27a和RPS3是研究平沙绿僵菌侵染的竹林金针虫相关基因表达的最佳内参基因。
关键词
森林保护学
竹林金针虫
平沙绿僵菌
内参基因
实时荧光定量
pcr
Keywords
forest protection
bamboo wireworm
Metarhizium pingshaense
reference gene
quantitative
realtime
pcr
(
qrt-pcr
)
分类号
S763.38 [农业科学—森林保护学]
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职称材料
题名
MiR-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用
被引量：
6
2
作者
程孟文
周毅
机构
武汉大学口腔医学院口腔基础医学省部共建国家重点实验室培训基地和口腔生物医学教育部重点实验室
武汉大学口腔医院修复科
出处
《口腔医学研究》
CAS
北大核心
2017年第9期928-932,共5页
基金
国家自然科学基金(编号:81200812)
武汉市应用基础研究计划项目(编号:2016060101010043)
文摘
目的:探讨微小RNA-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用。方法:体外分离培养人牙周膜细胞(hPDLCs),取第3~6代用于实验。首先,对hPDLCs进行成骨诱导液处理,在3、7、14d后利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-34a基因的表达变化。然后,构建慢病毒载体pCDH-pre-miR-34a和pCDH,将慢病毒载体感染hPDLCs,构建pre-miR-34a过表达细胞模型(hPDLCs/34a)和空载体对照细胞模型(hPDLCs/pCDH),并诱导hPDLCs成骨分化3、7、14和21d。分析成骨标志基因碱性磷酸酶(ALP)、Runt相关转录因子2(Runx2)、骨钙素(OCN)及骨涎蛋白(BSP)表达变化,ALP活性及钙化结节形成的茜素红染色情况。结果:hPDLCs经成骨分化诱导后,miR-34a基因表达在第3天开始明显升高,并呈逐渐增高趋势,差异均有统计学意义(P<0.001)。与hPDLCs/pCDH组相比,hPDLCs/34a组的ALP活性和茜素红染色均有明显减弱。qRT-PCR结果显示:hPDLCs/34a组的ALP表达量在成骨诱导7d时较hPDLCs/pCDH组降低(P<0.05);Runx2、OCN及BSP表达量的差异在各时间点基本无统计学意义。结论:在体外条件下,miR-34a抑制人牙周膜细胞成骨向分化。
关键词
人牙周膜细胞
成骨分化
微小RNA-34a
实时荧光定量
pcr
Keywords
Human periodontal ligament cells Osteogenic differentiation MicroRNA- 34a
quantitative
realtime
pcr
分类号
R781.4 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
竹林金针虫实时荧光定量PCR内参基因的筛选与应用
叶碧欢
陈友吾
舒金平
张威
张亚波
李海波
宋其岩
《浙江农林大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
1
在线阅读
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职称材料
2
MiR-34a在牙周膜细胞成骨向分化中的作用
程孟文
周毅
《口腔医学研究》
CAS
北大核心
2017
6
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职称材料
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