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H5、H7和H9亚型禽流感病毒四重荧光RT-PCR检测方法的建立与应用 被引量:4
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作者 王素春 仲焕香 +6 位作者 姜楠 姜利建 潘子豪 孙福亮 刘华雷 黄保续 王楷宬 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期1429-1437,共9页
旨在提高对禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)检测效率,及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域,设计并合成了相关探针和引物,建立了禽流感病毒(AIV)四重荧光RT-PCR检测方法,该方法可在检测禽... 旨在提高对禽流感病毒(avian influenza virus,AIV)检测效率,及时发现疫病。本研究通过分析M基因以及H5、H7和H9亚型的HA基因序列保守区域,设计并合成了相关探针和引物,建立了禽流感病毒(AIV)四重荧光RT-PCR检测方法,该方法可在检测禽流感病毒(AIV)的同时,确定病原是否为H5、H7和H9亚型。结果显示,该检测方法耗时短、特异性好、检测下限达到10^-5 ng·μL^-1。采用该方法检测临床采集的13个活禽交易市场的384份禽咽喉和泄殖腔双拭子样品,经检测,其中有60份样品为流感病毒阳性,且全部是H9亚型,该结果与行业标准方法(NY/T 772-2013)检测结果一致,κ值为1(P<0.001)。本方法能实现对禽流感病毒及H5、H7和H9亚型的高通量快速检测,将在AIV快速检测中发挥重要作用。 展开更多
关键词 禽流感 H5亚型 H7亚型 H9亚型 四重荧光RT-pcr检测方法
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四重实时荧光PCR快速检测转基因玉米及其加工产品 被引量:2
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作者 王凤军 叶素丹 +1 位作者 凌云 周晓红 《中国粮油学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第10期182-188,共7页
运用四重实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米及其深加工制品进行筛选检测。选定花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)以及根癌农杆菌CP4蛋白基因和5-莽草酸-3... 运用四重实时荧光聚合酶链式反应技术(polymerase chain reaction,PCR)对转基因玉米及其深加工制品进行筛选检测。选定花椰菜花叶病毒35S启动子(pCaMV35S)、农杆菌的胭脂碱合成酶基因终止子(tNOS)以及根癌农杆菌CP4蛋白基因和5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(EPSPS)为外源基因,选定编码玉米淀粉合成酶异构体zSTSII-2(zSSIIb)基因作为玉米物种的内参照基因。设计和合成靶标基因特异性引物和多重荧光探针,经特异性、重复性、灵敏性和适用性等方法学验证建立了四重实时荧光PCR检测方法。结果表明该方法检测特异性强,重复性好,扩增效率在90%~110%,标准曲线相关系数R^2≥0.99,最低检测限为每20μL反应13个拷贝,最低定量限为每20μL反应1.3个拷贝,其检测结果与SN/T 1204—2016标准方法检测结果一致,由于四个目标基因可以在一个反应管中进行扩增反应,且含有内源基因和外源基因,可降低试剂成本,简化操作程序,缩短检测时间,为玉米及其深加工产品转基因成分的快速检测提供参考。 展开更多
关键词 转基因玉米 四重实时荧光pcr 快速检测
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白砂糖DNA提取方法的比较
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作者 齐玲倩 刘秀 +3 位作者 丁梦璇 李静媛 刘远远 尹建军 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期244-248,共5页
为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度... 为了得到高效的白砂糖DNA提取方法,以5种白砂糖为研究对象,从前处理方法、裂解液成分及DNA纯化方法等方面对传统CTAB法进行改良,并比较了CTAB法和改良CTAB法的提取效果,结果表明:改良CTAB法提取的白砂糖DNA浓度都在2.60μg/m L以上,纯度在1.8左右,且通过实时荧光定量PCR能扩增出18Sr DNA基因的对应荧光信号。因此,改良CTAB法能够高效地提取白砂糖的DNA,可为后续的分子检测奠定基础。 展开更多
关键词 白砂糖 DNA提取 改良CTAB法 实时荧光定量pcr(real-time fluorescence quantification pcr qpcr)
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