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RGD多肽水凝胶对Tenon囊成纤维细胞活化和YAP信号的影响
1
作者 吕瑶 梁亮 +2 位作者 覃勉 蒋汝平 吴霞 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2024年第9期686-691,共6页
目的 探究不同浓度的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽水凝胶,对Tenon囊成纤维细胞(HTF)活化和Yes相关蛋白(YAP)表达的影响。方法 制备0.5%、1.0%、2.0%三种浓度RGD多肽水凝胶,透射电子显微镜观察其内部微观结构,流变学检测弹性模量(E)... 目的 探究不同浓度的精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)多肽水凝胶,对Tenon囊成纤维细胞(HTF)活化和Yes相关蛋白(YAP)表达的影响。方法 制备0.5%、1.0%、2.0%三种浓度RGD多肽水凝胶,透射电子显微镜观察其内部微观结构,流变学检测弹性模量(E)。构建SD雄性大鼠结膜损伤模型后,分为空白组(不作处理)、低浓度RGD组(结膜下注射0.5%RGD多肽水凝胶)、中浓度RGD组(结膜下注射1.0%RGD多肽水凝胶)、高浓度RGD组(结膜下注射2.0%RGD多肽水凝胶),观察1周后取材,Masson染色观察大鼠结膜处胶原纤维增生情况,免疫组织化学检测大鼠结膜YAP、平滑肌肌动蛋白-α(α-SMA)表达情况。利用转化生长因子-β2(TGF-β2)刺激HTF活化构建瘢痕化细胞模型,按照实验要求分为对照组、 0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组、正常组,培养24 h后,Western blot检测HTF中YAP、结缔组织生长因子(CTGF)、α-SMA、纤连蛋白(FN)和I型胶原蛋白(Col I)的蛋白相对表达量;激光共聚焦显微镜观察细胞骨架蛋白(F-actin)和YAP蛋白表达定位。结果 电镜下观察可见,RGD多肽水凝胶内部纳米纤维交联密度随多肽浓度增加而升高,流变学测得0.5%、1.0%及2.0%RGD多肽水凝胶弹性模量(E)依次约为0.067 kPa、0.150 kPa、2.170 kPa。Masson染色结果显示,除中浓度RGD组大鼠结膜胶原纤维增生面积比明显低于空白组外(P<0.05),低浓度组、高浓度组与空白组差异均无统计学意义(均为P>0.05)。免疫组织化学结果显示,与空白组相比,低浓度RGD组、中浓度RGD组、高浓度RGD组大鼠YAP及α-SMA蛋白相对表达量均下降,中浓度RGD组下降最明显,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。细胞免疫荧光染色结果显示,与对照组相比,0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组HTF的F-actin绿色荧光减弱,YAP红色荧光从细胞核转位于细胞质表达。Western blot检测结果显示,与对照组相比,0.5%RGD水凝胶组、1.0%RGD水凝胶组、2.0%RGD水凝胶组HTF中YAP、CTGF、α-SMA、FN及Col I蛋白相对表达量均下降,1.0%RGD水凝胶组下降最明显,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。结论 RGD多肽水凝胶的最佳作用浓度为1.0%,其通过抑制YAP蛋白的表达水平及其核转位,减少HTF的活化及其纤维化蛋白的表达,从而产生抗瘢痕效果。 展开更多
关键词 tenon囊成纤维细胞 RGD多肽水凝胶 细胞外基质 Yes相关蛋白 瘢痕化
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采用耗能装配节点的榫卯木构架抗震性能有限元分析
2
作者 吴忠铁 张轲 +2 位作者 解宁 赵城 吴为 《地震工程学报》 北大核心 2025年第1期10-21,共12页
针对榫卯木构架常规梁柱榫卯节点的缺陷,提出一种榫卯木构架的梁柱耗能装配节点。为研究该耗能装配节点对木构架抗震性能的影响,利用有限元软件ABAQUS建立带有全钢耗能装配节点、橡胶柔性耗能装配节点、无加固的榫卯式节点三种不同类型... 针对榫卯木构架常规梁柱榫卯节点的缺陷,提出一种榫卯木构架的梁柱耗能装配节点。为研究该耗能装配节点对木构架抗震性能的影响,利用有限元软件ABAQUS建立带有全钢耗能装配节点、橡胶柔性耗能装配节点、无加固的榫卯式节点三种不同类型榫卯木构架的有限元模型,并进行单调荷载加载分析和低周反复加载分析,主要研究这三类榫卯木构架模型的破坏特征、滞回曲线、骨架曲线、承载力及耗能能力等力学性能;同时,利用能力谱曲线和需求谱曲线,采用性能点探讨三类木构架的抗震性能。结果表明,与原榫卯木构架相比,该耗能装配节点能够有效地调整和控制木构架的破坏模式,增强梁柱节点的非线性力学性能,显著提高榫卯木构架的整体抗震性能。 展开更多
关键词 榫卯木构架 耗能装配节点 力学性能 性能点 抗震性能
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抗青光眼术后滤过泡瘢痕化组织人Tenon囊成纤维细胞的生长特性 被引量：10
3
作者 李中秋 张孝生 卢弘 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期308-312,共5页
背景 抗青光眼滤过术后瘢痕组织中的主要细胞成分是人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）,探讨滤过泡瘢痕组织中HTFs的生长特性可为抗青光眼滤过术后预防瘢痕形成的研究提供实验基础. 目的 研究抗青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化组织中HTFs的体外生... 背景 抗青光眼滤过术后瘢痕组织中的主要细胞成分是人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）,探讨滤过泡瘢痕组织中HTFs的生长特性可为抗青光眼滤过术后预防瘢痕形成的研究提供实验基础. 目的 研究抗青光眼滤过术后滤过泡瘢痕化组织中HTFs的体外生长特性. 方法 收集因抗青光眼小梁切除术后滤过泡瘢痕化行二次手术的患者8例8眼的Tenon囊组织（4 mm＆#215;5 mm）,同期以同样的取材方法收集行斜视矫正术患者8例8眼的正常Tenon囊组织.采用组织块贴壁法将Tenon囊组织进行原代培养,用鼠抗人波形蛋白细胞免疫荧光法鉴定培养的HTFs,并用巢式PCR法检测培养的HTFs中是否受到支原体的污染.分别于第0、4、7、11、14天以发光法细胞活力检测HTFs,并绘制各组细胞的生长曲线,计算细胞群体倍增时间（PDT）.比较瘢痕组和正常组HTFs形态学和PDT的差异;将瘢痕组第5代与第15代HTFs的形态及PDT进行比较,评价细胞传代生长特性的稳定性. 结果 HTFs原代培养1～2周达到融合,呈长梭形,形态符合HTFs,传代细胞4～6 d达到融合.瘢痕组与正常组HTFs的生长特性相近,对鼠抗人波形蛋白抗体呈阳性反应,PCR检测未见支原体反应条带.瘢痕组和正常组HTFs的PDT分别为（20.54±3.51）h和（18.86±2.91）h,差异无统计学意义（t=0.634,P=0.561）.细胞培养后第4、7、11和14天,瘢痕组HTFs的细胞数与正常组比较差异均无统计学意义（t=2.663,P=0.081;t=0.194,P=0.863;t=3.338,P=0.053;t=0.627,P=0.565）,2个组的HTFs随培养时间的延长显示出一致的增生曲线.瘢痕组第5代和第15代细胞PDT分别为（20.54±3.51）h及（22.84±4.15）h,差异无统计学意义（t=0.733,P=0.505）;第5代与第15代间细胞生长曲线可见其增生能力均稳定,两代间HTFs在各时间点的细胞数差异均无统计学意义（t=1.528,P=0.235;t=0.269,P=0.786;t=1.954,P=0.139;t=0.730,P=0.506）.结论 抗青光眼术后滤过泡瘢痕化患者的HTFs体外培养生长状态良好,增生能力稳定,是进行青光眼术后滤过区抗纤维化研究的良好靶细胞. 展开更多
关键词 人 成纤维细胞 细胞学 tenon囊 细胞学 青光眼 细胞培养 细胞增生
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汉防己甲素抑制人眼Tenon囊成纤维细胞的凋亡效应 被引量：9
4
作者 李岱 杨柳 +1 位作者 林少春 吴开力 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第1期1-4,共4页
目的研究汉防己甲素(Tet)抑制人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)的凋亡效应。方法用组织块混合消化液培养法体外培养人眼TCFs,并对培养的传代细胞进行形态学鉴定。通过透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪观察Tet抑制人眼TCFs的凋亡作用。结果人眼... 目的研究汉防己甲素(Tet)抑制人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)的凋亡效应。方法用组织块混合消化液培养法体外培养人眼TCFs,并对培养的传代细胞进行形态学鉴定。通过透射电镜、TUNEL法和流式细胞仪观察Tet抑制人眼TCFs的凋亡作用。结果人眼TCFs体外生长良好。透射电镜下见Tet处理后的人眼TCFs细胞质固缩,呈现凋亡表现;TUNEL法可见Tet组出现大量的阳性凋亡细胞;流式细胞仪检测TCFs经Tet作用后G0/G1期细胞减少22.2%,S期细胞增加20.53%,G2/M期细胞增加1.6%,Tet抑制TCFs细胞周期于G1期,Tet组凋亡率明显高于对照组(P=0.000)。结论Tet可以诱导人眼TCFs发生凋亡,进而发挥其抑制增生的作用。 展开更多
关键词 汉防己甲素 成纤维细胞 tenon囊 细胞凋亡 流式细胞术
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TGF-β_1对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和结缔组织生长因子表达的影响 被引量：11
5
作者 黄明海 郭海科 +2 位作者 吴静 陈建苏 赵松滨 《眼科研究》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期272-275,共4页
目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法用MTT法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度... 目的研究转化生长因子β1(TGFβ1)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖和诱导表达结缔组织生长因子(CTGF)的影响。方法用MTT法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞增殖的影响;免疫细胞化学染色法检测不同质量浓度TGFβ1(0、0.1、1、10ng/mL)对Tenon’s囊成纤维细胞诱导表达CTGF的影响。结果GFβ1能够剂量依赖性地促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖(P<0.05);TGFβ1能够促进CTGF的表达,有随质量浓度的增加而增强的趋势(P<0.05),但1ng/mL和10ng/mLTGFβ1组之间无统计学差异(P>0.05)。结论GFβ1能够促进Tenon’s囊成纤维细胞增殖,并促进其下游介质CTGF的表达,可能是青光眼滤过术后滤过泡瘢痕形成的重要机制。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β1 结缔组织生长因子 tenon’s囊成纤维细胞 青光眼滤过术
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转化生长因子-β2诱导人Tenon囊成纤维细胞转化及其在瘢痕形成中的作用 被引量：7
6
作者 朱晓燕 李磊 +3 位作者 鲜光军 李海军 谭燕 谢琳 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期215-219,共5页
背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患... 背景研究表明转化生长因子-β2（TGF-β2）能够促进瘢痕形成，但其在青光眼滤过术后局部瘢痕形成中的作用机制值得研究。目的探讨TGF-β2对人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）转化以及在滤过术后瘢痕形成中的作用。方法在斜视手术中获取3例患者的Tenon囊组织，并用组织块培养法在含质量分数10％胎牛血清的DMEM中培养，培养的细胞贴壁后达到70％～80％亚融合状态时更换为无血清培养基饥饿培养24h，然后分别加入质量浓度1、2、5、10、20Ixg／LTGF-β2诱导HTFs24h，另用2tzg／L或5μg／LTGF-β2 诱导HTFs6、24、48、72h，阴性对照组培养基中不加TGF-β2 用Westernblot法检测HTFs中α-平滑肌肌动蛋白（n—SMA）和pSmad2蛋白的表达，采用细胞免疫荧光技术检测“-SMA及纤维状肌动蛋白（F—actin）表达的定位，采用凝胶收缩实验检测培养细胞收缩力的变化。结果不同质量浓度TGF—B，组HTFs中0I—SMA表达的强度均明显强于阴性对照组，2tzg／L、5μg／LTGF—B，作用24～48h后HTFs中d—SMA表达强度达峰值，10μg／L、20μg／LTGF-β2组较2μg／L、5μg／LTGF-β2组α—SMA蛋白表达强度减弱。对照组HTFs中有少量α—SMA及F—actin表达，1、2、5μg／LTGF-β2组d—SMA及F—actin荧光表达明显增强，阳性细胞数明显增加，10μg／LTGF-β2组α—SMA及F-actin荧光表达较低质量浓度组减弱。2μg／LTGF-β2作用后pSmad2表达强度明显强于PBS组和FBS组，在作用后30rain～2h表达较强，2h后开始出现下降。对照组HTFs收缩凝胶面积所占原面积的百分数为（78．00-3．13）％，1、2、5、10tzg／LTGF-β2组分别为（63．88±1．78）％、（20．69±O．65）％、（19．49±O．54）％、（16．24~0．84）％，HTFs收缩凝胶面积占原面积的百分数随着TGF-β2质量浓度的增加而明显增加（F组别=859．400，P=0．000）。结论TGF-β2可诱导成纤维细胞转分化，一定程度上其作用呈质量浓度依赖性和时间依赖性，且细胞收缩力随质量浓度的增加而增强，可能是青光眼滤过术后滤过通道建立失败的重要机制。 展开更多
关键词 转化生长因子-Β2 青光眼 滤过手术 瘢痕形成 tenon囊成纤维细胞 Α-平滑肌肌动蛋白
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重组γ-干扰素作用人Tenons囊成纤维细胞体外研究 被引量：8
7
作者 郭彦 葛坚 +3 位作者 刘海泉 李艳艳 郑健梁 黄祥坤 《眼科研究》 CSCD 2000年第4期329-332,共4页
目的 体外研究人重组γ－干扰素对人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作用。方法 以人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作为实验对象，分别加入０．１～１０＾６ Ｕ／ｍｌ人重组γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）、０．００１～１０ｍｇ／Ｌ丝裂霉素（ＭＭ... 目的 体外研究人重组γ－干扰素对人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作用。方法 以人Ｔｅｎｏｎｓ囊成纤维细胞作为实验对象，分别加入０．１～１０＾６ Ｕ／ｍｌ人重组γ－干扰素（ＩＦＮ－γ）、０．００１～１０ｍｇ／Ｌ丝裂霉素（ＭＭＣ）、０．１～１０３ｍｇ／Ｌ５－氟尿嘧啶（５－Ｆｕ）孵育４８ｈ，然后以ＭＴＴ法进行检测。结果 高浓度和低浓度ＩＦＮ－γ实验组ＯＤ值较对照组升高（Ｐ〈０．０５）。 展开更多
关键词 人重组γ-干扰素 成纤维细胞 tenons囊 青光眼
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后Tenon囊下注射曲安奈德辅助全视网膜光凝治疗糖尿病视网膜病变 被引量：5
8
作者 鲁丹 王康 +3 位作者 王艳玲 林鹏耀 李茜 李明铭 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2013年第5期439-442,共4页
目的评价全视网膜光凝前行后Tenon囊下注射曲安奈德在治疗糖尿病视网膜病变上的临床疗效及安全性。方法采用随机、双眼平行对照的研究方法。筛选于我院就诊的糖尿病视网膜病变患者,将双眼患有增生型糖尿病视网膜病变或严重非增生型糖尿... 目的评价全视网膜光凝前行后Tenon囊下注射曲安奈德在治疗糖尿病视网膜病变上的临床疗效及安全性。方法采用随机、双眼平行对照的研究方法。筛选于我院就诊的糖尿病视网膜病变患者,将双眼患有增生型糖尿病视网膜病变或严重非增生型糖尿病视网膜病变的24例(48眼)患者分为两组,对照组仅行全视网膜光凝,试验组在行全视网膜光凝前1周先行后Tenon囊下注射曲安奈德20mg。6个月后观察最佳矫正视力(logMAR)、视网膜厚度以及眼压的变化。结果治疗后6个月与治疗前视力相比较,对照组最佳矫正视力有所降低,而试验组有所提高,两组治疗后6个月最佳矫正视力相比差异有统计学意义(P=0.04)。治疗后6个月与治疗前视网膜厚度相比较,对照组黄斑中心凹厚度增加了32.8μm,试验组降低了9.7μm,两组相比差异有统计学意义(P=0.03);对照组旁中心凹厚度增加了23.2μm,试验组降低了5.1μm,两组相比差异有统计学意义(P=0.04);对照组中心凹周边厚度增加了18.3μm,试验组增加了0.5μm,两组相比差异无统计学意义(P=0.06)。随访期内,试验组和对照组眼压波动均在正常范围之内。结论全视网膜光凝前行后Tenon囊下注射20mg曲安奈德能有效降低糖尿病性黄斑水肿,是预防由视网膜激光引起的视力下降安全有效的方法。 展开更多
关键词 后tenon囊 曲安奈德 糖尿病视网膜病变 黄斑水肿 全视网膜光凝
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HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞的旁观者效应及其机制研究 被引量：4
9
作者 王继兵 葛坚 +2 位作者 段山 刘炳乾 郑建樑 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2006年第3期281-284,共4页
目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观... 目的观察HSV-tk/GCV系统对人Tenon囊成纤维细胞(HTFs)的旁观者效应并研究其作用机制。方法将转HSV-tk基因HTFs(HTFs-tk)与正常HTFs于两种接种密度下以不同比例混合,加入5μg/m l更昔洛韦作用5 d,MTT法检测对HTFs的杀伤作用;染料传输法观察HTFs细胞间隙连接细胞间通讯(G JIC)的能力;免疫细胞化学检测Cx43分布;RT-PCR及W estern b lot检测Cx43表达。结果旁观者效应随HTFs-tk/HTFs比例增加而增强,高细胞接种密度组明显强于低密度组;染料通过G JIC传输6级以上;Cx43主要分布于HTFs细胞膜并检测到其mRNA与蛋白表达。结论旁观者效应需要细胞间密切接触,Cx43介导G JIC可能是HSV-TK/GCV系统对HTFs产生旁观者效应的主要机制,HTFs表达Cx43可能在结膜伤口愈合反应中发挥重要作用。 展开更多
关键词 旁观者效应 HSV—tk基因 tenon囊 成纤维细胞 人
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榫头尺寸对速生杨木T型榫节点的力学性能影响研究 被引量：1
10
作者 宋孟柯 关惠元 《林产工业》 北大核心 2025年第3期36-43,共8页
为提高速生人工林用于家具生产制造优势,利用阶梯式榉木分体椭圆榫对速生杨木T型榫节点进行连接,探究了横纹连接和顺纹连接两种方式下,榫头尺寸对榫节点抗拔强度和抗弯强度的影响。结果表明:横纹连接时,榫头厚度对榫节点抗拔强度和抗弯... 为提高速生人工林用于家具生产制造优势,利用阶梯式榉木分体椭圆榫对速生杨木T型榫节点进行连接,探究了横纹连接和顺纹连接两种方式下,榫头尺寸对榫节点抗拔强度和抗弯强度的影响。结果表明:横纹连接时,榫头厚度对榫节点抗拔强度和抗弯强度均产生显著影响,且对抗拔强度的影响(p<0.001)大于对抗弯强度的影响(p=0.003);顺纹连接时,就抗拔强度而言,榫头宽度对其不产生显著影响(p=0.274),榫头厚度对其产生显著影响(p=0.015)。就抗弯强度而言,榫头宽度、榫头厚度、榫头宽度和榫头厚度双因子交互,均对其产生显著性影响,且榫头宽度的影响(p=0.012)小于榫头厚度的影响(p<0.001)。因此,速生杨木与榉木接合时,适当调整榫头宽度和厚度能有效提高榫节点强度。研究结果可为相关设计提供依据和参考。 展开更多
关键词 速生杨木 榫节点增强 等效转化 榫头尺寸 方差分析
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CCK-8检测法研究槲皮素对人Tenon囊成纤维细胞的抑制作用 被引量：8
11
作者 王涛 李冰晴 +1 位作者 王津津 王桂云 《眼科新进展》 CAS 2007年第8期576-580,共5页
目的观察槲皮素(quercetin,QU)对体外培养的(human Tenon’s capsule fibro-blasts,HTCF)增殖的抑制作用。方法体外培养HTCF。配制QU溶液,其浓度依次为20μmol·L-1、40μmol·L-1、60μmol.L-1、80μmol·L-1、100μmol... 目的观察槲皮素(quercetin,QU)对体外培养的(human Tenon’s capsule fibro-blasts,HTCF)增殖的抑制作用。方法体外培养HTCF。配制QU溶液,其浓度依次为20μmol·L-1、40μmol·L-1、60μmol.L-1、80μmol·L-1、100μmol·L-1,采用活细胞计数试剂盒CCK-8检测不同浓度QU作用下HTCF的增殖,并在光学显微镜下观察细胞的形态变化。结果不同药物浓度HTCF形态学检测显示:50μmol·L-1QU作用48h后,细胞收缩,胞核固缩,聚集在核膜边缘;100μmol·L-1QU作用48h后,细胞未见增殖,出现凋亡小体,细胞的增殖几乎完全被抑制。细胞生长抑制实验的结果显示:QU在各浓度组对体外培养的HTCF均有抑制作用,抑制效应呈剂量时间依赖关系。结论QU能抑制体外培养的HTCF的增殖,且该作用呈剂量和时间依赖性。 展开更多
关键词 槲皮素 人tenon囊成纤维细胞 青光眼
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特异性转化生长因子-β_2 shRNA对人眼Tenon囊成纤维细胞的抑制作用 被引量：5
12
作者 骆玮 孙璐 李静敏 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2010年第12期1150-1153,共4页
目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)特异性短发夹RNA(shRNA)对人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人... 目的观察转化生长因子-β2(TGF-β2)特异性短发夹RNA(shRNA)对人眼Tenon囊成纤维细胞(TCFs)TGF-β2表达的影响及对人TCFs增生的抑制作用。方法根据小干扰RNA(siRNA)的设计原则,针对TGF-β2基因序列特征构建特异性shRNA载体,转染培养的人TCFs。MTT比色法检测细胞的增生情况;ELISA法检测shRNA对TGF-β2蛋白表达的抑制作用。结果 TGF-β2shRNA转染组的细胞增生及TGF-β2蛋白的表达均受到抑制。转染24、48、72h后MTT比色法检测显示,TGF-β2shRNA转染组培养的Tenon囊的成纤维细胞的增生值分别为0.5426±0.05、0.5210±0.03、0.4055±0.04,明显低于阴性对照组的0.5655±0.03、0.5378±0.03、0.5268±0.04,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=54.691,P=0.000;Ftime=66.888,P=0.000)。ELISA法检测显示,TGF-β2shRNA转染组TGF-β2蛋白的表达水平下降,24、48、72hTGF-β2蛋白的表达量分别为(543.58±25.32)、(400.26±30.74)、(202.72±23.24)ng/L,明显低于阴性对照组的(659.78±20.95)、(547.45±24.65)、(442.87±17.43)ng/L及空白组的(721.75±30.19)、(756.61±30.19)、(787.60±18.37)ng/L,3个组和各时间点的总体差异均有统计学意义(F组=163.082,P=0.000;F时间=31.498,P=0.000)。结论 TGF-β2特异性shRNA能显著抑制人TCFsTGF-β2的表达,载体介导的TGF-β2特异性shRNA对眼前节术后的抗瘢痕化治疗具有潜在的可能性。 展开更多
关键词 RNA干扰技术 tenon囊 成纤维细胞 转化生长因子-Β2
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结缔组织生长因子对人Tenon囊成纤维细胞中E-cadherin蛋白表达的促进作用 被引量：6
13
作者 李静 谢安明 《中华实验眼科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期695-698,共4页
背景 青光眼滤过手术后滤过通道的瘢痕化是手术失败的主要原因,其主要病理机制是成纤维细胞的异常增生、间质-上皮转分化及细胞外基质的重塑.结缔组织生长因子（CTGF）是促进瘢痕形成的关键因子,而CTGF是否能促进人Tenon囊成纤维细胞（H... 背景 青光眼滤过手术后滤过通道的瘢痕化是手术失败的主要原因,其主要病理机制是成纤维细胞的异常增生、间质-上皮转分化及细胞外基质的重塑.结缔组织生长因子（CTGF）是促进瘢痕形成的关键因子,而CTGF是否能促进人Tenon囊成纤维细胞（HTFs）的间质-上皮转分化尚不清楚.目的 观察CTGF对HTFs间质-上皮转分化的影响.方法 用体积分数10％胎牛血清的DMEM高糖型培养液进行HTFs体外常规培养和传代,取3～6代细胞用于实验.将培养的HTFs分为空白对照组和CTGF处理组,空白对照组用DMEM完全培养液培养细胞,CTGF处理组在培养液中加入CTGF,使终质量浓度为50 ng/ml.细胞培养后48 h,采用细胞免疫荧光染色技术鉴定HTFs中上皮钙黏素（E-cadherin）蛋白的表达,采用Western blot法对HTFs中E-cadherin蛋白的表达量进行检测.结果 空白对照组及CTGF处理组HTFs均生长良好,呈长梭形,漩涡状排列.细胞免疫荧光染色显示,CTGF处理组HTFs细胞质呈红色荧光,细胞核呈蓝色荧光;空白对照组HTFs仅见DAPI蓝染的细胞核,无E-cadherin表达的红色荧光.Western blot法检测结果显示,空白对照组HTFs中E-cadherin蛋白无表达,而CTGF处理组HTFs中E-cadherin蛋白的相对表达量为0.63±0.08.结论 间叶组织来源的成纤维细胞本身不表达E-cadherin,在CTGF的刺激下成纤维细胞能够表达E-cadherin,CTGF促进HTFs的间质-上皮转分化. 展开更多
关键词 人 成纤维细胞 tenon囊 结缔组织生长因子 转分化 青光眼/手术 滤过泡 瘢痕化
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汉防己甲素对人眼Tenon囊成纤维细胞中bax、bcl-2、TGF-β2 mRNA表达的影响 被引量：2
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作者 李岱 孙明 +3 位作者 李青春 杨芳 林少春 吴开力 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期97-100,共4页
目的观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon's capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5mol/... 目的观察汉防己甲素(Tet)对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(tenon's capsule fibroblasts,TCFS)中bax、bcl-2、转化生长因子-β2(TGF-β2)mRNA表达的影响,探讨其可能的作用机制。方法将体外培养的第3代TCFS分别置于浓度为10-5mol/LTet的培养液和1640培养液中培养48 h,采用实时荧光定量PCR检测细胞中bax、bcl-2和TGF-β2 mRNA的表达变化。结果同对照组比较,Tet实验组中bax mRNA的表达量明显升高,bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量显著下降,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论一定浓度的汉防己甲素可以通过降低bcl-2、TGF-β2 mRNA的表达量,同时提高bax mRNA的表达量来抑制TCFS的增殖,并可诱导其凋亡,可能成为一种潜在的抗青光眼滤过瘢痕药物。 展开更多
关键词 汉防己甲素 tenon囊成纤维细胞 BAX BCL-2 转化生长因子-Β2 实时荧光定量PCR
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TGF-β1对Tenon囊成纤维细胞增生和HSP47表达的影响 被引量：3
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作者 盘如刚 陈晓明 +1 位作者 李茅 刘东敬 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2007年第12期933-936,共4页
目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(HTF)增生和热休克蛋白47(HSP47)表达的影响。方法青光眼患者Tenon囊组织体外培养,用不同质量浓度0.01、0.1、1、5、10ng/mLTGF-β1处理细胞,继续培养24h,用MTT比色法检测吸光度... 目的探讨转化生长因子β1(TGF-β1)对人Tenon囊成纤维细胞(HTF)增生和热休克蛋白47(HSP47)表达的影响。方法青光眼患者Tenon囊组织体外培养,用不同质量浓度0.01、0.1、1、5、10ng/mLTGF-β1处理细胞,继续培养24h,用MTT比色法检测吸光度值(A),用免疫细胞化学检测HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白含量,用实时荧光定量PCR检测HSP47和Ⅰ型胶原mRNA表达。结果TGF-β1能促进HTF的增生(P<0.05),诱导HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维蛋白(P<0.05),促进HTF表达HSP47和Ⅰ型胶原纤维mRNA(P<0.05),其作用随TGF-β1质量浓度的增加而增强。结论TGF-β1通过促进HTF纤维增生,诱导下游介质HSP47和Ⅰ型胶原蛋白表达而促进HTF纤维化,可能是青光眼滤过手术后瘢痕形成的重要机制。 展开更多
关键词 转化生长因子Β1 热休克蛋白47 tenon囊成纤维细胞
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青蒿琥酯对人Tenon囊成纤维细胞增殖与凋亡的影响 被引量：2
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作者 陈静 陈艺 +1 位作者 邹秀兰 邹玉平 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2017年第6期523-526,共4页
目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对人Tenon囊成纤维(human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)细胞增殖与凋亡的影响,探讨青光眼术后滤过泡瘢痕化的治疗对策。方法体外培养HTFs细胞,应用不同浓度(50μg·mL^(-1)、100μg·mL... 目的观察青蒿琥酯(artesunate,Art)对人Tenon囊成纤维(human Tenon’s capsule fibroblasts,HTFs)细胞增殖与凋亡的影响,探讨青光眼术后滤过泡瘢痕化的治疗对策。方法体外培养HTFs细胞,应用不同浓度(50μg·mL^(-1)、100μg·mL^(-1)、150μg·mL^(-1)、200μg·mL^(-1))的Art处理细胞,采用MTT法检测Art对细胞增殖的影响,流式细胞仪检测Art对细胞凋亡的影响,Western blot检测Art对凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2表达的影响。结果 Art作用细胞48 h后,MTT结果显示:与空白对照组比较,不同浓度的Art处理组对HTFs细胞的增殖均有抑制作用,且呈浓度依赖性抑制(均为P<0.05)。流式细胞仪结果显示:与空白对照组比较,50μg·mL^(-1)、100μg·mL^(-1)、150μg·mL^(-1)、200μg·mL^(-1) Art作用后细胞凋亡率逐渐增加(均为P<0.05),分别为8.80%±0.88%、11.60%±0.56%、16.30%±1.03%、23.40%±1.62%。Western blot检测结果显示:与空白对照组比较,不同浓度Art处理组Bax蛋白表达明显增加,Bcl-2蛋白表达明显降低,且均呈浓度依赖性(均为P<0.05)。结论 Art可抑制HTFs细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能是通过调节凋亡相关蛋白Bax、Bcl-2的表达而实现的。Art可能成为一种潜在的抗青光眼术后滤过泡瘢痕化的药物。 展开更多
关键词 青蒿琥酯 人tenon囊成纤维细胞 细胞增殖 细胞凋亡 青光眼
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K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制 被引量：2
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作者 樊芳 马清敏 +4 位作者 赵智华 李科军 赵晓彬 田净净 贾志旸 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2021年第4期301-305,共5页
目的探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法人Tenon囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者。采用CCK-8实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出T... 目的探讨K115对转化生长因子-β1(TGF-β1)诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法人Tenon囊成纤维细胞取自于河北省人民医院眼科行青光眼手术的患者。采用CCK-8实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞增殖的影响,筛选出TGF-β1对细胞增殖最佳作用浓度为5.0μg·L^(-1),最佳作用时间为24 h;K115对细胞增殖起始作用浓度为5.0μmol·L^(-1),最佳作用浓度为10.0μmol·L^(-1)。依据这两个浓度进行分组,分别是对照组(不加TGF-β1与K115),TGF-β1组(加5.0μg·L^(-1) TGF-β1),TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组(加5.0μg·L^(-1)TGF-β1和5.0μmol·L^(-1)的K115),TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组(加5.0μg·L^(-1) TGF-β1和10.0μmol·L^(-1)的K115)。采用Transwell实验检测K115对人Tenon囊成纤维细胞迁移的影响;免疫荧光法测定人Tenon囊成纤维细胞中α-SMA蛋白的表达;流式细胞仪检测细胞凋亡情况。对实验所得各指标进行统计学分析。结果本研究细胞培养状态良好,6~8周可见人Tenon囊成纤维细胞铺满培养瓶瓶底。用CCK-8试剂盒检测各组细胞增殖情况结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组、TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组光密度值分别为0.977±0.042、1.306±0.059、0.862±0.035、0.558±0.042,TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组、TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组光密度值均小于TGF-β1组(均为P<0.05),并且呈现浓度依赖性减小,K115浓度越大细胞增殖减少幅度越大。Transwell实验结果显示,对照组、TGF-β1组、TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组、TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组迁移细胞数分别为(38.67±3.06)个、(81.00±4.00)个、(44.33±3.21)个、(23.67±2.52)个;TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组与TGF-β1组比较,迁移细胞数降低,差异有统计学意义(P<0.05);TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组与对照组及TGF-β1组比较,迁移细胞数均明显降低,差异均有统计学意义(均为P<0.05)。各组细胞内α-SMA蛋白免疫荧光染色结果显示,对照组人Tenon囊成纤维细胞胞浆内可见散在分布的绿色荧光物质,TGF-β1处理后24 h(TGF-β1组),胞浆内绿色丝状荧光物质明显增加,荧光强度差异有统计学意义(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组和TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组细胞胞浆内的荧光强度呈浓度依赖性减弱,K115浓度越高荧光强度减弱越明显(均为P<0.05)。流式细胞仪检测结果显示,对照组细胞凋亡率为(2.400±0.346)%,TGF-β1组为(0.900±0.173)%,TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组为(1.333±0.252)%,TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组为(1.067±0.058)%;TGF-β1组的细胞凋亡率较对照组降低(P<0.05);TGF-β1+5.0μmol·L^(-1) K115组和TGF-β1+10.0μmol·L^(-1) K115组的细胞凋亡率均较对照组降低(均为P<0.05),而与TGF-β1组比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。结论K115对TGF-β1诱导的人Tenon囊成纤维细胞增殖和迁移有明确的抑制作用,其作用机制可能与K115抑制了TGF-β1诱导的细胞内α-SMA的表达进而调控了细胞活化有关。 展开更多
关键词 K115 转化生长因子-Β1 人tenon囊成纤维细胞 青光眼 细胞增殖 细胞迁移
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ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对人Tenon囊成纤维细胞增殖、凋亡和黏附性的影响 被引量：1
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作者 张晓辉 孙乃学 +3 位作者 冯朝晖 王超 张懿 王建明 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期38-41,共4页
目的观察ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(ocular Tenon capsule fibroblasts,OTFs)增殖、凋亡和黏附性的影响。方法体外培养的第4～6代OTFs经溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导后,不同浓度Y-27... 目的观察ROCK-Ⅰ选择性抑制剂Y-27632对体外培养的人眼Tenon囊成纤维细胞(ocular Tenon capsule fibroblasts,OTFs)增殖、凋亡和黏附性的影响。方法体外培养的第4～6代OTFs经溶血磷脂酸(lysophosphatidic acid,LPA)诱导后,不同浓度Y-27632处理,采用MTT测定细胞增殖抑制率和细胞黏附抑制率,未经LPA诱导OTFs细胞同时采用Annexin V-FITC/PI双标记流式细胞术测定细胞凋亡率,以及细胞平板克隆增殖实验测定不同浓度Y-27632组OTFs细胞增殖克隆形成率。结果 6、30、150、750μmol/L Y-27632各组经LPA诱导的OTFs细胞增殖抑制D(490)与LPA组比较,差异均有统计学意义(P<0.05,P<0.01),OTFs细胞黏附抑制D(490)与LPA组比较,同样具有统计学差异(P<0.05,P<0.01)。随着Y-27632浓度增加,细胞凋亡率相应增加。未经LPA诱导的OTFs细胞克隆形成率随着Y27632浓度的增高而降低。结论 Y-27632有效抑制LPA诱导的OTFs增殖和细胞间黏附,诱导细胞早期凋亡。 展开更多
关键词 Y-27632 人tenon囊成纤维细胞 增殖 凋亡 黏附性
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环孢素A对人Tenon’s囊成纤维细胞增殖及TGF-β_1分泌的影响 被引量：2
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作者 王继兵 张晓敏 +1 位作者 康凤英 杨连洲 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2004年第3期267-270,共4页
目的　观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞 (HTFs)增殖及其转化生长因子 β1 (TGF β1 )分泌的影响。方法　以体外培养的人HTFs为实验对象 ,分别加入 0 0 0 1～ 10 μg/mLCsA作用 48h ,细胞计数观察CsA对细胞增殖的... 目的　观察环孢素A(CsA)对体外培养的人Tenon’s囊成纤维细胞 (HTFs)增殖及其转化生长因子 β1 (TGF β1 )分泌的影响。方法　以体外培养的人HTFs为实验对象 ,分别加入 0 0 0 1～ 10 μg/mLCsA作用 48h ,细胞计数观察CsA对细胞增殖的影响。收集 0 0 0 1～ 5 μg/mLCsA处理后细胞培养上清液 ,采用ELISA方法检测细胞TGF β1 的分泌量。光镜及透射电镜观察细胞的结构变化。结果　CsA在 0 1～ 10 μg/mL范围内以质量浓度依赖方式抑制人HTFs的增殖 ,IC50 为0 5 5 μg/mL ,并在 0 0 1～ 5 μg/mL范围内刺激细胞TGF β1 的分泌。CsA作用后细胞形态学改变的主要特征为胞浆内大量空泡形成。结论　一定质量浓度的CsA可能通过直接的细胞损伤作用在促进TGF β1 分泌的同时仍显著抑制人HTFs的增殖。 展开更多
关键词 环孢素A 成纤维细胞 tenon’s囊 转化生长因子-Β1 人
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后Tenon囊下注射曲安奈德后玻璃体腔内药物质量浓度的测定 被引量：7
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作者 关红英 李双农 《眼科研究》 CSCD 北大核心 2009年第6期507-510,共4页
目的探讨后Tenon囊下注射曲安奈德(TA)后玻璃体腔内的药物质量浓度及代谢情况。方法32只健康成年有色家兔,右眼为实验眼,给予后Tenon囊下注射TA20mg(0.1mL);左眼为对照眼,给予后Tenon囊下注射生理盐水0.1mL,依据注射后不同时间点分为第1... 目的探讨后Tenon囊下注射曲安奈德(TA)后玻璃体腔内的药物质量浓度及代谢情况。方法32只健康成年有色家兔,右眼为实验眼,给予后Tenon囊下注射TA20mg(0.1mL);左眼为对照眼,给予后Tenon囊下注射生理盐水0.1mL,依据注射后不同时间点分为第1、3、7天,2、3、4、6、8周8个亚组,于注药前及注药后各时间点行裂隙灯检查、眼压测量并处死1组家兔,取玻璃体样本,用高效液相色谱法测定药物质量浓度并行药物代谢动力学分析。结果所有家兔未见手术及药物所致的并发症。玻璃体腔内药物质量浓度于第2周达到最高,为(1.91±0.13)μg/mL,以后逐渐下降。结论后Tenon囊下注射TA,在玻璃体腔内可达到并维持一定的药物质量浓度。 展开更多
关键词 曲安奈德 玻璃体 药代动力学 高效液相色谱法 tenon囊
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