程序性死亡因子-1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞程序性死亡-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)作为重要的免疫检查点,在肿瘤免疫治疗领域具有重要意义。目前,晚期消化系统肿瘤如胃癌、结直肠癌、肝癌的治疗手段有...程序性死亡因子-1(programmed cell death protein 1,PD-1)和细胞程序性死亡-配体1(programmed death-ligand 1,PD-L1)作为重要的免疫检查点,在肿瘤免疫治疗领域具有重要意义。目前,晚期消化系统肿瘤如胃癌、结直肠癌、肝癌的治疗手段有限,PD-1/PD-L1免疫检查点抑制剂作为后线的新兴治疗选择之一,仍面临有相当数量患者治疗效果不理想的情况。非编码RNA(non-coding RNA,ncRNA)如微小RNA(microRNA,miRNA)、长链非编码RNA(long non-coding RNA,lncRNA)和环状RNA(circular RNA,circRNA)已被证实能够影响PD-1/PD-L1的表达及功能,深入研究ncRNA对PD-1/PD-L1的作用有助于为癌症中免疫检查点抑制剂的应用提供新的思路,从而提高临床免疫治疗的有效性。本文就ncRNA干预PD-1/PD-L1调控消化系统肿瘤的研究进展进行综述。展开更多
程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)和程序性死亡配体1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一对经典免疫检查点,其相互作用在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。但由于PD-1和PD-L1存在复杂的糖基化修饰,且真核...程序性死亡受体1(programmed cell death protein 1,PD-1)和程序性死亡配体1(programmed cell death 1 ligand 1,PD-L1)是一对经典免疫检查点,其相互作用在肿瘤免疫逃逸中发挥重要作用。但由于PD-1和PD-L1存在复杂的糖基化修饰,且真核细胞中的PD-1和PD-L1在蛋白质水平的表达量低,限制了靶向二者相互作用的药物筛选及抑制剂的开发。本研究针对二者相互作用的关键结构域,利用金门桥组装(golden gate assembly)无缝克隆技术构建了表达功能性截短体蛋白质PD-1^(33-150)和PD-L1^(19-239)的真核载体,并利用HEK-293T细胞系验证了其高效表达。经亲和层析纯化,每升细胞培养基可获得蛋白质纯度>95%的PD-1^(33-150)和PD-L1^(19-239)蛋白分别为5 mg和3 mg。利用生物膜干涉技术(biolayer interferometry,BLI)和流式细胞术(flow cytometry,FCM),我们检测了纯化后PD-1^(33-150)和PD-L1^(19-239)的结合动力学参数、平衡常数以及其细胞结合活性。与昆虫细胞和大肠杆菌在蛋白质水平表达的PD-1胞外域相比,哺乳细胞表达的PD-1^(33-150)对PD-L1的亲和力提高了近24和50倍,同时使结合的解离速率降低至原来的1/400以下,这可能是由于不同的糖基化修饰对PD-1和PD-L1蛋白的相互作用具有重要影响。综上,本研究建立了人源PD-1^(33-150)/PD-L1^(19-239)功能性截短体在蛋白质水平的高效表达与纯化平台,为PD-1/PD-L1抗体药物筛选及小分子免疫检查点抑制剂的开发提供了高质量的分子工具。展开更多
以程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1,PD-1)抑制剂为代表的免疫检查点抑制剂在胃癌中显示良好疗效,逐步改变晚期胃癌的治疗格局。对于程序性死亡蛋白配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)高表达的患者,PD-L1单抗的治疗...以程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1,PD-1)抑制剂为代表的免疫检查点抑制剂在胃癌中显示良好疗效,逐步改变晚期胃癌的治疗格局。对于程序性死亡蛋白配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)高表达的患者,PD-L1单抗的治疗效果更为优异,且与PD-L1蛋白表达水平呈正相关。而对于PD-L1阴性或低表达这类免疫治疗非优势人群,以PD-1单抗为基础的用药方案疗效有限,尝试双特异性抗体、ADC等不同药物的联合也是一种趋势。为了精准指导临床实践,中国抗癌协会胃癌专业委员会组织国内胃癌领域专家进行多轮讨论,系统汇总国内外最新指南和循证证据,并结合我国临床实际,从病理检测、晚期治疗以及围术期治疗3个方面制订了本专家共识,旨在提高胃癌诊治的科学性和规范性,尤其是指导基层医生对免疫治疗的选择和应用。展开更多
目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分...目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分析小鼠外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T和PD-1+T细胞亚群比例变化;心、肝、肾等脏器匀浆涂板检测细菌定植量变化;HE染色分析免疫器官的病理改变;免疫组化染色检测免疫器官内CD4、CD8和PD-1阳性细胞表达及定位,使用Image J软件对阳性细胞数变化进行定量。结果HE染色提示各级免疫器官随病程进展出现不同程度病理损伤;与Sham组小鼠相比,CLP组小鼠各脏器及外周血细菌定植量均显著增高(P<0.05),以肝脏感染最为严重;CLP组小鼠在术后第1、3、5天时外周血CD4^(+)T淋巴细胞比例较Sham组分别下降56%、70.57%和87.42%(P<0.001),CD8^(+)T淋巴细胞比例只在第5天时下降48.33%(P<0.001),而表达PD-1的CD4^(+)T细胞亚群比例分别升高为Sham组的673.08倍、423.08倍和600倍(P<0.001);免疫组化结果显示,CLP术后胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4阳性细胞比例在早期最高时分别上升为Sham组的7.65倍、2.66倍和3.7倍(P<0.001),后期最低时分别较早期下降82.8%(P<0.001)、41.9%(P<0.01)和60.15%(P<0.001);CD8阳性细胞比例在早期升高后下降不显著;PD-1阳性细胞占比持续升高,最高时分别上升为Sham组的6.24倍、13.9倍和20.96倍(P<0.001),且其表达区域与CD4阳性细胞大致相同。结论脓毒症时炎症反应可引起免疫器官严重损伤,CD4^(+)T淋巴细胞持续耗竭,机体预防感染的能力下降,可能是造成肠道菌群异位加重,导致全身感染的重要原因。展开更多
文摘以程序性死亡蛋白-1(programmed death protein-1,PD-1)抑制剂为代表的免疫检查点抑制剂在胃癌中显示良好疗效,逐步改变晚期胃癌的治疗格局。对于程序性死亡蛋白配体-1(programmed death-ligand 1,PD-L1)高表达的患者,PD-L1单抗的治疗效果更为优异,且与PD-L1蛋白表达水平呈正相关。而对于PD-L1阴性或低表达这类免疫治疗非优势人群,以PD-1单抗为基础的用药方案疗效有限,尝试双特异性抗体、ADC等不同药物的联合也是一种趋势。为了精准指导临床实践,中国抗癌协会胃癌专业委员会组织国内胃癌领域专家进行多轮讨论,系统汇总国内外最新指南和循证证据,并结合我国临床实际,从病理检测、晚期治疗以及围术期治疗3个方面制订了本专家共识,旨在提高胃癌诊治的科学性和规范性,尤其是指导基层医生对免疫治疗的选择和应用。
文摘目的探究脓毒症中免疫耗竭的特征并分析其与肠道菌群异位的相关性。方法采用随机数字表法将130只小鼠分为盲肠穿刺结扎(cecal ligation and puncture,CLP)组(n=100)和假手术(sham)组(n=30),通过CLP建立小鼠脓毒症模型;流式细胞术检测分析小鼠外周血CD4^(+)T、CD8^(+)T和PD-1+T细胞亚群比例变化;心、肝、肾等脏器匀浆涂板检测细菌定植量变化;HE染色分析免疫器官的病理改变;免疫组化染色检测免疫器官内CD4、CD8和PD-1阳性细胞表达及定位,使用Image J软件对阳性细胞数变化进行定量。结果HE染色提示各级免疫器官随病程进展出现不同程度病理损伤;与Sham组小鼠相比,CLP组小鼠各脏器及外周血细菌定植量均显著增高(P<0.05),以肝脏感染最为严重;CLP组小鼠在术后第1、3、5天时外周血CD4^(+)T淋巴细胞比例较Sham组分别下降56%、70.57%和87.42%(P<0.001),CD8^(+)T淋巴细胞比例只在第5天时下降48.33%(P<0.001),而表达PD-1的CD4^(+)T细胞亚群比例分别升高为Sham组的673.08倍、423.08倍和600倍(P<0.001);免疫组化结果显示,CLP术后胸腺、脾脏和肠系膜淋巴结中CD4阳性细胞比例在早期最高时分别上升为Sham组的7.65倍、2.66倍和3.7倍(P<0.001),后期最低时分别较早期下降82.8%(P<0.001)、41.9%(P<0.01)和60.15%(P<0.001);CD8阳性细胞比例在早期升高后下降不显著;PD-1阳性细胞占比持续升高,最高时分别上升为Sham组的6.24倍、13.9倍和20.96倍(P<0.001),且其表达区域与CD4阳性细胞大致相同。结论脓毒症时炎症反应可引起免疫器官严重损伤,CD4^(+)T淋巴细胞持续耗竭,机体预防感染的能力下降,可能是造成肠道菌群异位加重,导致全身感染的重要原因。
