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Cas9和PE介导湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因敲除的研究 被引量:2
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作者 周磊 李东旭 +3 位作者 冒魏佳 刘孜斐 高雪 万永杰 《南京农业大学学报》 北大核心 2025年第2期419-426,共8页
[目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可... [目的]本文利用CRISPR/Cas9系统和先导编辑(prime editor, PE)对湖羊骨骼肌卫星细胞中的肌肉生长抑制素(myostatin,MSTN)基因外显子进行敲除,旨在比较2种技术敲除MSTN基因的效率,以验证新型基因编辑工具PE用于湖羊骨骼肌卫星细胞上的可行性。[方法]针对湖羊MSTN基因的3个外显子分别设计向导RNA(single guide RNA,sgRNA)以及引导RNA(prime editing guide RNA,pegRNA),构建相应的质粒后将含有Cas9/sgRNA或PE/pegRNA的质粒共同转染湖羊骨骼肌卫星细胞。24 h后观察细胞荧光,48 h后再将细胞消化,使用流式细胞分选仪根据荧光强度筛选出转染成功的强阳性细胞,收集细胞,获得基因组DNA后进行桑格测序,检测2种基因编辑工具对MSTN基因的打靶效率。[结果]成功构建了分别针对湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因3个外显子敲除的基因编辑工具,质粒测序结果显示序列插入正确;CRISPR/Cas9的编辑效率(65%、88%、91%)显著高于PE的编辑效率(57%、29%、33%),而PE的插入缺失率显著低于CRISPR/Cas9。[结论]在转染效率相近的情况下,CRISPR/Cas9相比于PE对于湖羊骨骼肌卫星细胞MSTN基因的敲除有更高的编辑效率。 展开更多
关键词 基因编辑 CRISPR/Cas9 先导编辑(pe) MSTN 湖羊 骨骼肌卫星细胞
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引导编辑技术的研究进展及应用 被引量:1
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作者 邱梅玉 张雪梅 +1 位作者 张宁 刘明军 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第4期1345-1355,共11页
以CRISPR/Cas9为基础的引导编辑系统是新开发出的一种基因编辑技术,可以精确实现12种碱基的互换、插入和缺失,并且不需要产生双链断裂和引入外源供体DNA。本文从基因编辑的发展、引导编辑系统的原理、特点、优化、脱靶效应、在动植物和... 以CRISPR/Cas9为基础的引导编辑系统是新开发出的一种基因编辑技术,可以精确实现12种碱基的互换、插入和缺失,并且不需要产生双链断裂和引入外源供体DNA。本文从基因编辑的发展、引导编辑系统的原理、特点、优化、脱靶效应、在动植物和基因治疗研究中的应用、引导编辑系统的设计等几方面进行综述,为促进相关领域的科研工作者了解引导编辑系统及进一步利用引导编辑系统在动植物科学基础研究和育种方面的应用提供指导。 展开更多
关键词 CRISPR/Cas9 引导编辑(prime editing pe) pegRNA 应用研究
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引导编辑系统研究进展 被引量:1
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作者 林秋鹏 朱秀丽 +1 位作者 马琳莎 姚鹏程 《华南农业大学学报》 CSCD 北大核心 2024年第2期159-171,共13页
引导编辑(Prime editing,PE)系统是一种全新的、革命性的基因组编辑策略。该系统由引导编辑器(Prime editor)组成,包括nCas9(H840A)与逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)的融合蛋白;以及包含PBS(Primer binding site)序列和RT模板(RT t... 引导编辑(Prime editing,PE)系统是一种全新的、革命性的基因组编辑策略。该系统由引导编辑器(Prime editor)组成,包括nCas9(H840A)与逆转录酶(Reverse transcriptase,RT)的融合蛋白;以及包含PBS(Primer binding site)序列和RT模板(RT template,RTT)序列的pegRNA(Prime editing guide RNA)两大部分。PE系统可以在双链不断裂的情况下实现所有12种类型的碱基替换及小片段DNA增删,是精准编辑的全新范式。自2019年开发至今不到4年时间,PE系统作为一种通用的技术平台,已广泛应用于医疗、农业等各个领域,产生了一大批新种质资源、基因治疗药物等优秀应用案例。PE作为目前最灵活、最具发展前景的基因组精准编辑新手段,仍旧存在效率偏低、大片段操纵能力不足、系统组分设计复杂(如pegRNA)、安全性未全面评估等问题,仍需要深入研究。本文详细介绍了PE系统的技术原理及限制因素,全面总结了PE系统自开发以来的优化策略及在动植物系统、医疗领域的应用现状,并对PE的发展前景进行了展望。 展开更多
关键词 引导编辑系统 优化策略 农业应用 医疗应用
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心理实验系统教学效果的实证研究 被引量:5
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作者 李晶 吕庆燕 《实验技术与管理》 CAS 北大核心 2012年第4期176-179,182,共5页
伴随心理学研究计算机化趋势的出现,以及信息技术与学科教学整合的需要,当前实验心理学教学中主要使用了PES与E-Prime 2种心理实验系统。研究通过实验和问卷调查分析了2种心理实验系统在教学中的效果。结果表明:2种心理实验系统有效促... 伴随心理学研究计算机化趋势的出现,以及信息技术与学科教学整合的需要,当前实验心理学教学中主要使用了PES与E-Prime 2种心理实验系统。研究通过实验和问卷调查分析了2种心理实验系统在教学中的效果。结果表明:2种心理实验系统有效促进了学生专业知识综合与运用等能力的发展,激发了专业学习兴趣,但2个系统在教学中表现出各有利弊的特点,需教师将二者结合,以取得更好的教学效果。 展开更多
关键词 心理实验 心理学系统(peS) E-prime系统
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引导编辑:突破碱基编辑类型的新技术 被引量:6
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作者 刘尧 周先辉 +1 位作者 黄舒泓 王小龙 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期993-1008,共16页
引导编辑技术(prime editing)是一种基于CRISPR/Cas系统的新型基因编辑技术。引导编辑器(prime editor,PE)的效应蛋白是逆转录酶与具有单链切割活性的nCas9(H840A)的融合蛋白,被称为PE2;其向导RNA是通过在sgRNA的3′末端增加逆转录模板... 引导编辑技术(prime editing)是一种基于CRISPR/Cas系统的新型基因编辑技术。引导编辑器(prime editor,PE)的效应蛋白是逆转录酶与具有单链切割活性的nCas9(H840A)的融合蛋白,被称为PE2;其向导RNA是通过在sgRNA的3′末端增加逆转录模板和引物结合位点序列构成,被称为pegRNA。PE系统可以实现所有12种类型的碱基突变,还可以实现短的插入删除编辑,及多种编辑类型的组合。自2019年被开发以来,因其编辑类型多样化及高特异性等优势,PE已经被成功地应用在多种动植物及细菌中,同时在基因治疗和农业育种等领域也展现出良好的应用前景。本文对PE系统的开发过程、特点、优化、应用、安全风险等方面进行了系统介绍,并对其发展前景进行了展望,以期有助于相关领域研究人员对PE系统的了解与应用。 展开更多
关键词 引导编辑器 CRISPR/Cas9 优化 应用
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CRISPR/Cas9技术在农作物育种中的应用
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作者 侯应霞 韦文俊 +2 位作者 陈浩 顾艳 龚丝雨 《湖北农业科学》 2022年第S01期4-10,共7页
CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,规律间隔的成簇短回文重复序列)/Cas9(CRISPR-associated protein 9,CRISPR相关蛋白9)系统是一种强大的基因编辑工具,因其成本低、可操作性强、编辑效率高等优点,已... CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats,规律间隔的成簇短回文重复序列)/Cas9(CRISPR-associated protein 9,CRISPR相关蛋白9)系统是一种强大的基因编辑工具,因其成本低、可操作性强、编辑效率高等优点,已被大量应用于农作物改良中。文章综述了CRISPR基因编辑系统的发现、分类、作用机制以及CRISPR/Cas9在农作物改良上的应用,并展望其未来的发展前景。 展开更多
关键词 基因编辑 生物育种 碱基编辑器 引导编辑
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