期刊文献+
共找到15,732篇文章
< 1 2 250 >
每页显示 20 50 100
用T7噬菌体展示技术筛选乙型肝炎病毒PreS1相互作用蛋白 被引量:9
1
作者 黄英 张君 +2 位作者 何茂锐 陈维贤 黄爱龙 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2007年第4期340-343,共4页
目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白。方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜... 目的:用T7噬菌体筛选系统筛选乙型肝炎病毒PreS1的相互作用蛋白。方法:应用T7噬菌体展示技术,以通过原核表达的方式得到的乙型肝炎病毒PreS1作为靶分子,对噬菌体人肝细胞cDNA文库进行生物筛选,对筛选到的克隆进行DNA序列分析及同源性搜索。结果:经鉴定得到1个阳性克隆,确定了能与乙型肝炎病毒PreS1相互作用的蛋白可能为:细胞色素C氧化酶1(Cytochrome c Oxidase Subunit I,COX1)。结论:T7噬菌体展示筛选系统是筛选相互作用蛋白的一种简单、快速和有效的手段,筛选到的相互作用蛋白为进一步探讨PreS1的致病机制提供重要依据。 展开更多
关键词 T7噬菌体展示技术 乙型肝炎病毒pres1 相互作用蛋白
在线阅读 下载PDF
乙型肝炎病毒preS2蛋白在转基因小鼠肝脏中的表达 被引量:2
2
作者 金艳花 訾晓渊 +8 位作者 姚玉成 熊俊 李建秀 苏小平 王新民 倪文君 丛文铭 杨康鹃 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期175-178,共4页
目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′... 目的 :分析乙型肝炎病毒 pre S2蛋白在 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠肝脏中的分布及其病理学作用。方法 :采用原核显微注射法将质粒 pc DNA3.1- pre S/ St注射入小鼠受精卵雄原核 ,制备转基因小鼠。PCR法在基因组水平筛选 3′末端缺失的 pre S/ S基因转基因小鼠首建者 (founder)及后代 ;免疫组织化学法在蛋白水平检测 pre S2蛋白在这些小鼠中的表达 ;H- E染色分析转基因小鼠肝组织的病理学变化。结果 :经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后 ,共出生 15只新生小鼠 ,其中存活 7只 ,经 PCR检测后获得 2只 founder转基因小鼠 ,命名为 C5 7- Tg N (pre S/ St) SMMU。免疫组织化学检测发现转基因小鼠肝细胞质中有 pre S 2蛋白表达 ,H- E染色发现转基因小鼠肝组织中央静脉周围有淋巴细胞聚集。将这 2只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配 ,进行传代培育 ,PCR法筛选阳性转基因小鼠 ,目前已传至 F2 代。 结论 :本研究成功建立了稳定遗传 3′末端缺失的 pre S/ S基因并表达 pre S2蛋白的转基因小鼠 C5 7- Tg N((pre S/ St) SMMU,它将是体内研究 3′末端缺失的 pre S/ 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2蛋白 转基因小鼠 pres/S基因
在线阅读 下载PDF
慢性HBV感染患者bcp/pc区点突变模式、pres区缺失及其临床意义 被引量:5
3
作者 张鑫 武彦宁 +4 位作者 张大可 董培玲 范春蕾 李磊 丁惠国 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2011年第3期324-330,共7页
目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HB... 目的阐明HBV(hepatitis B virus,HBV)感染患者不同临床阶段bcp/pc(basic core promoter,BCP/precore,PC)点突变模式及pres区缺失突变规律,并探讨其临床意义。方法慢性HBV感染患者180例,其中,无症状HBV携带者13例,慢性乙型肝炎者75例,HBV相关肝硬化及肝癌分别为62、30例。Qiagen法提取血清HBV-DNA,常规PCR扩增目的基因,纯化PCR产物ABI377DNA自动测序仪直接双向测序。直接测序失败者,回收目的 DNA与PMD-18T载体连接,克隆质粒双向测序。DNAStar软件包的SeqMan软件进行生物信息分析。结果 Bcp/pc区点突变包括nt1753、nt1762、nt1764、nt1776、nt1803、nt1846、nt1896。HBV携带者、慢性乙型肝炎、HBV相关肝硬化及肝癌患者nt 1762(nt 1764)点突变率分别为7.7%、68.0%、72.7%(68.0%)及90.9%(81.8%),肝癌患者G1896A突变频率占54.6%。A1762T+G1764A联合突变占36%;A1762T、G1764A、G1896A联合突变占11%;T1753A/C、A1762T、G1764A、G1896A发生率为7%。克隆测序显示,肝硬化及肝癌患者bcp区起始点A1727G点突变率分别为72%、63%。HBeAg阴性患者存在更多的基因变异(P=0.022),G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素(P<0.05)。Bcp区点突变与HBeAg阴性无明显关系。肝硬化和肝癌患者pres基因缺失突变频率最高,肝癌及肝硬化患者pres1、pres2及pres1+s2缺失频率分别为7.1%、71.4%、7.1%及41.2%、58.8%、29.4%(P<0.05)。结论 A1727G、A1762T、G1764A及A1762T/G1764A联合突变、pres缺失在HBV相关肝硬化及肝癌患者多见,可能是肝脏疾病进展的危险因素,G1776A和G1896A突变是HBeAg阴性的独立预测因素。Bcp/pc点突变及pres区缺失可能为肝癌发生的早期预测因素,值得进一步研究。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 bcp/pc区变异 联合突变 pres缺失
在线阅读 下载PDF
乙型肝炎病毒PreS1抗原、丙氨酸氨基转移酶和HBV-DNA相关性分析 被引量:5
4
作者 方伟祯 蔡振华 +2 位作者 陈梅 叶宇聪 丁鹤林 《实用医学杂志》 CAS 北大核心 2012年第8期1357-1359,共3页
目的:探讨PreS1抗原、丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别与HBV-DNA定量表达的相互关系。方法:选取住院和门诊受检者4439例血清标本,分别用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,ELISA法检测PreS1抗原,速率法检测ALT;从其中选取HBV-DNA阳性186例作为定量检... 目的:探讨PreS1抗原、丙氨酸氨基转移酶(ALT)分别与HBV-DNA定量表达的相互关系。方法:选取住院和门诊受检者4439例血清标本,分别用荧光定量PCR法检测HBV-DNA,ELISA法检测PreS1抗原,速率法检测ALT;从其中选取HBV-DNA阳性186例作为定量检测对象,并计算PreS1抗原相对滴度值和HBV-DNA常用对数值。结果:4439例标本中PreS1抗原阳性率为21.27%,ALT异常率为21.36%,与HBV-DNA的阳性率(21.76%)都无显著差异(P>0.05);186例HBV-DNA阳性标本中PreS1相对滴度(17.53±14.17)、ALT(64.96±175.89)与HBV-DNA定量对数值(6.27±1.14)均不相关。结论:检测PreS1抗原可以作为HBV病毒感染和复制的较好的新指标,但不能说明复制量情况;联合检测ALT对HBV感染患者的诊断、治疗有重要的价值。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 HBV-DNA pres1抗原 ALT
在线阅读 下载PDF
HBV preS2S-rhGM-CSF融合基因表达质粒的构建和表达 被引量:3
5
作者 郭晓兰 邓健康 +1 位作者 朱道银 唐恩洁 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期548-551,共4页
目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1... 目的 :研究GM CSF和preS2对乙肝DNA疫苗的免疫增强作用。方法 :采用PCR方法 ,扩增HBVpreS2 +S基因约 84 6bp的片段和rhGM CSF(包括甘氨酸接头 )基因 4 5 0bp的片段。通过T A克隆技术和基因定向克隆 ,构建融合基因的真核表达质粒pcDNA3.1 S2S rhGM CSF ,并在HepG2细胞中表达。结果 :经酶切、PCR及DNA测序鉴定 ,融合基因表达质粒HB VpreS2S rhGM CSF成功地构建。将其转染HepG2细胞后 ,目的基因的转录通过RT PCR得到证实 ,而且表达的融合蛋白能与抗 HBs、抗 preS2和抗 GM CSF单克隆抗体 (mAb)均产生特异性反应。结论 :融合基因表达载体pcDNA3.1 S2S rhGM CSF的成功构建并表达 。 展开更多
关键词 HBV pres2 GM-CSF 融合基因
在线阅读 下载PDF
乙型肝炎病毒 preS 抗原在大肠杆菌中的高效表达与鉴定 被引量:1
6
作者 陈章国 马大龙 +4 位作者 张颖妹 李建远 狄春辉 宋泉声 万艳平 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期142-145,共4页
利用PCR和基因重组技术构建了乙型肝炎病毒(HBV)完整preS抗原高效表达克隆(pMIP),该克隆在大肠杆菌中表达一分子量约31kD的融合蛋白(MS2-preS),由MS2、白细胞介素3(IL-3)N端14个氨基酸... 利用PCR和基因重组技术构建了乙型肝炎病毒(HBV)完整preS抗原高效表达克隆(pMIP),该克隆在大肠杆菌中表达一分子量约31kD的融合蛋白(MS2-preS),由MS2、白细胞介素3(IL-3)N端14个氨基酸(aa)接头和preS抗原组成,在IL-3N端与MS2连接处有凝血酶识别位点,可被该酶切开。MS2-preS和带IL-3N端14个aa的preS均具有preS1和preS2抗原表位以及多聚人血清白蛋白(PHSA)受体活性,均能诱导动物产生抗preS抗体。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres抗原 大肠杆菌 表达 融合蛋白
在线阅读 下载PDF
重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhⅡ/CP/PreC基因标准参照序列的初步建立 被引量:1
7
作者 许红梅 任红 +2 位作者 凌宁 彭明利 卿玉玲 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期39-42,共4页
目的:建立重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列,为HBV变异的研究奠定基础。方法:测定15例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列,应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型/血清型,并拟定标准参照序列。结... 目的:建立重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhII/CP/PreC基因标准参照序列,为HBV变异的研究奠定基础。方法:测定15例无症状携带者HBV的PreS/S、EnhII/CP/PreC序列,应用同源性分析和对齐比较等方法确定基因型/血清型,并拟定标准参照序列。结果:9株基因型B/血清型;adw2、3株基因型B/M清型ayw1、3株基因型C/血清型adrq+;建立的重庆地区HBV流行株(基因型B/血清型adw2)PreS/S、EnhII/CP/PreC标准参照序列与华东华南地区同亚型的标准参照序列比较分别有6个、1个核苷酸差异。结论:初步建立了重庆地区HBV流行株PreS/S、EnhIICP/PreC基因标准参照序列。 展开更多
关键词 重庆 HBV 流行株 pres/S EnhII/CP/preC 基因 乙型肝炎病毒
在线阅读 下载PDF
乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立 被引量:4
8
作者 苏小平 姚玉成 +8 位作者 訾晓渊 赵书民 熊俊 李建秀 王新民 丁佳 许燕 余宏宇 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期168-171,共4页
目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder... 目的 :建立可表达乙型肝炎病毒 (adr亚型 )包膜中蛋白的转基因小鼠品系。 方法 :通过原核显微注射法制备带有乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因的转基因小鼠。应用 PCR方法筛选乙型肝炎病毒 pre S2 - S基因转基因首建者 (founder)小鼠 ,再以免疫组织化学法分析乙型肝炎病毒蛋白在这些小鼠中的表达特性 ,PCR和免疫组化均阳性的转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配用于传代培育 ,并用 PCR法检测其子代小鼠。结果 :共注射受精卵 6 9枚。选取存活受精卵 5 8枚分别植入 4只假孕小鼠 ,产仔并存活 2 3只。经尾组织 DNA PCR筛选得到 5只整合 pre S2 - S基因的 founder小鼠 ,免疫组织化学法发现其中3只小鼠的肝脏中表达 HBs Ag,进而对其中表达较强的阳性鼠进行保种。结论 :所建立的乙型肝炎病毒 (adr亚型 ) pre S2 - S基因转基因小鼠品系具有表达乙肝病毒中蛋白的生物学特性 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 MHBS 转基因小鼠 pres2-S基因
在线阅读 下载PDF
PreS1抗原与HBeAg联合检测用于预测HBV-DNA的水平 被引量:5
9
作者 李珉珉 洪丹妮 +1 位作者 朱勤爱 朱穗兰 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期637-640,共4页
目的:联合检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者的血清前S1(PreS1)抗原和乙肝e抗原(HBeAg)两项指标,判断其与HBV-DNA定量的相互关系。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法(两步法)检测PreS1抗原,双抗体夹心ELISA法(一步法)检测HBe... 目的:联合检测慢性乙型肝炎病毒(HBV)携带者的血清前S1(PreS1)抗原和乙肝e抗原(HBeAg)两项指标,判断其与HBV-DNA定量的相互关系。方法:采用双抗体夹心酶联免疫吸附分析(ELISA)法(两步法)检测PreS1抗原,双抗体夹心ELISA法(一步法)检测HBeAg,实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测HBV-DNA。结果:在335例慢性HBV携带者患者中,PreS1抗原阳性率为42.7%,HBeAg阳性率为36.4%,HBV-DNA阳性率为53.4%。在179例HBV-DNA阳性患者中,HBeAg阳性109例(60.9%);156例HBV-DNA阴性患者中,HBeAg阴性143例(91.7%)。在179例HBV-DNA阳性患者中,PreS1抗原阳性89例(49.7%);在156例HBV-DNA阴性患者中,PreS1抗原阴性102例(65.4%)。PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV-DNA阳性率为93.8%(45/48);在PreS1和HBeAg双阴性的感染者中,HBV-DNA阳性率仅为22.0%(26/118)。结论:HBeAg与HBV-DNA的相关性比PreS1抗原与HBV-DNA的相关性高。PreS1和HBeAg双阳性的感染者HBV的复制程度高,而双阴性的感染者复制程度较低。因此,PreS1抗原与HBeAg联合检测可用于预测HBV-DNA的水平。 展开更多
关键词 慢性HBV携带者 pres1抗原 乙肝病毒DNA 乙肝E抗原
在线阅读 下载PDF
可捕获HBV的preS1单克隆抗体的制备及性质初探 被引量:3
10
作者 顾颖 朱子恒 +2 位作者 李少伟 张军 夏宁邵 《厦门大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期222-226,共5页
用天然乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(Dane颗粒和管状颗粒)和HBV前S1(preS1)区基因工程重组蛋白GST-preS1联合免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备了7株单克隆抗体(mAb),采用ELISA、免疫捕获PCR等方式鉴定其有关特性.各株mAb分别为IgG1... 用天然乙型肝炎病毒(HBV)颗粒(Dane颗粒和管状颗粒)和HBV前S1(preS1)区基因工程重组蛋白GST-preS1联合免疫Balb/c小鼠,经杂交瘤技术制备了7株单克隆抗体(mAb),采用ELISA、免疫捕获PCR等方式鉴定其有关特性.各株mAb分别为IgG1和IgG2a,轻链均为κ型.腹水mAb的滴度为1×10^7-1×10^9.用间接法ELISA显示,所有7株preS1 mAb均可以识别HBV天然抗原,其中mAb 4D11与HBV天然抗原的结合能力最强.通过竞争抑制法ELISA检测推断preS1(21-47)上至少含有两个B细胞表位,mAb 4D11、1G5、7B6和7H11具有共同的B细胞抗原识别位点;mAb 3H5、6F1和2A6识别另外一个位点.本研究获得的可与HBV天然抗原结合的preS1单抗为HBV preS1检测试剂的研制提供了重要工具,对HBV preS1具有中和免疫活性抗原的设计及相关研究有重要帮助. 展开更多
关键词 单克隆抗体 HBV pres1 B细胞抗原识别位点
在线阅读 下载PDF
酵母双杂交系统筛选HBV PreS1相互作用蛋白 被引量:2
11
作者 叶峰 张曦 +6 位作者 邸莹 王小清 刘小静 孔颖 赵英仁 陈天艳 刘敏 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期407-412,共6页
目的利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制。方法以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSo... 目的利用Sos招募系统(SRS),构建含HBV PreS1基因的酵母双杂交诱饵载体,筛选人肝细胞与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,进一步探讨HBV侵入肝细胞的机制。方法以HBV ayw亚型全长质粒PCP10为模板,PCR扩增HBV PreS1基因,克隆到酵母表达载体pSos中,构建诱饵质粒pSos-PreS1,将其转化cdc25酵母感受态细胞,提取酵母蛋白质进行Western blot分析,证实其在酵母细胞中的表达;将pSos-PreS1分别与pMyr Lamin C、pMyr SB共转化酵母,证实诱饵蛋白无自激活作用。将pSos-PreS1与人肝cDNA文库共转化cdc25酵母感受态细胞,通过营养及温度选择性培养筛选阳性菌落,扩增阳性菌落目的基因并测序。结果成功构建了HBV PreS1基因酵母双杂交诱饵载体pSos-PreS1,筛选得到5个准阳性克隆,序列分析表明其分别与人类钾通道调制因子1(KCMF1)、细胞色素C、VitD结合蛋白、人源去唾液酸糖蛋白受体(ASGPR)和人白蛋白具有高度同源性。结论利用SRS筛选出5个可能与HBV PreS1蛋白相互作用的蛋白,为进一步了解HBV侵入肝细胞的机制奠定了基础。 展开更多
关键词 酵母双杂交系统 pres1蛋白 Sos招募系统 诱饵载体 蛋白相互作用
在线阅读 下载PDF
HBV preS1基因酵母表达载体的构建及表达 被引量:1
12
作者 张曦 蔺淑梅 +4 位作者 吴列秀 陈天艳 叶峰 赵英仁 张树林 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期265-268,共4页
目的构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能。方法以HBVayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS... 目的构建HBV preS1基因的酵母表达载体,探讨HBV preS1蛋白的功能。方法以HBVayw亚型全长质粒PCP10为模板,聚合酶链反应(polymerase chain reaction,PCR)扩增HBV preS1基因,克隆到pGEM-T载体中命名为T-preS1,以NcoⅠ和MluⅠ双酶切T-preS1后回收与酵母表达载体pSos连接,对重组质粒进行序列测定后命名为pSos-preS1,经醋酸锂法将其转化酵母菌cdc25(a),提取酵母蛋白质进行Western免疫印迹分析。结果成功构建了HBV preS1基因的酵母表达载体,Western免疫印迹分析显示HBV preS1基因在酵母细胞中正确表达。结论pSos-preS1的构建为通过SOS招募系统(sos-recruit ment system,SRS)筛选与HBV preS1蛋白相互作用的蛋白和进一步探讨HBV preS1蛋白在HBV致病中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 乙肝病毒 pres1蛋白 酵母表达载体
在线阅读 下载PDF
HBVpreS2-S基因诱发的体液免疫引起乙肝转基因小鼠肝组织损伤 被引量:1
13
作者 刘红 姚玉成 +4 位作者 葛军辉 李建秀 苏娟 张钦宪 胡以平 《第二军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第2期159-163,共5页
目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小... 目的 :探讨乙型肝炎病毒 (HBV) pre S2 - S基因诱发的体液免疫在乙型肝炎发病机制中的作用。 方法 :用含 HBVpre S2 - S基因的质粒 pc DNA3- S2 - S经胫骨前肌肌肉注射免疫正常 BAL B/ c小鼠获得抗血清 ,将抗血清经尾静脉注射到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)体内 ,不同时间点静脉采血检测小鼠血清 HBs Ag、抗 HBs抗体、前 S2抗原、前 S2抗体、转氨酶、尿素氮和肌酐的变化 ,并处死动物检查肝、脾、肾、肠、肺和肌肉组织的病理学改变。 结果 :DNA免疫正常小鼠后 8~14周 ,抗 HBs抗体的浓度维持在 130~ 14 0 m IU/ ml;免疫后小鼠抗血清转移到转基因小鼠 BAL B/ c- Tg N(pre S2 - S/ ayw)后 2、4、7和 14 d,小鼠血清中未检测到 HBs Ag和前 S2抗原 ,抗 HBs抗体持续阳性 ,前 S2抗体 14 d时转阴 ;AL T2、4 d升高 ,7d恢复到正常 ;AST14 d内始终高于正常值 ,4 d时达高峰 ;尿素氮异常 ,γ- GT与肌酐正常。转基因小鼠肝脏出现急性乙型肝炎的改变 ,初期 (2 d、4 d)血窦内和汇管区有淋巴细胞浸润 ,4 d肝细胞开始肿胀 ;中期 (7d)全小叶出现肝细胞气球样变 ,肝小叶内出现肝细胞点灶性坏死伴单个核细胞浸润 ,汇管区轻度单个核细胞的浸润 ;后期 (14 d)时肝细胞肿胀明显减轻 。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres2-S基因 体液免疫 转基因小鼠 乙型肝炎
在线阅读 下载PDF
ASGPR与HBV preS1蛋白之间相互作用的验证 被引量:2
14
作者 张曦 刘小静 +4 位作者 陈云茹 孔颖 杨雪亮 叶峰 蔺淑梅 《西安交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期292-297,共6页
目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共... 目的验证去唾液酸糖蛋白受体(asialoglycoprotein receptor,ASGPR)与乙肝病毒前S1蛋白(HBV preS1蛋白)之间的相互作用,确认ASGPR作为乙肝病毒肝细胞膜受体在介导乙肝病毒感染的分子机制中的作用。方法分别用哺乳动物双杂交及体外免疫共沉淀技术验证ASGPR与HBV preS1蛋白之间的相互作用,操作方法参照试剂盒说明书进行。结果哺乳动物双杂交实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在细胞环境中具有相互作用;免疫共沉淀实验结果提示,ASGPR与HBV preS1蛋白在非细胞环境中具有相互作用。结论 ASGPR可能是介导HBV入侵的肝细胞膜受体之一。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 pres1蛋白 ASGPR 蛋白质-蛋白质相互作用 哺乳动物双杂交 免疫共沉淀
在线阅读 下载PDF
用部分补平法克隆乙型肝炎病毒preS/S基因 被引量:2
15
作者 刘定燮 李德祥 骆抗先 《第一军医大学学报》 CSCD 北大核心 2001年第1期60-61,共2页
目的探讨利用Klenow大片段对DNA末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 BamHI、XbalI消解载体 pcDNA3,用 BglH、Hind Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 HBVpreS/... 目的探讨利用Klenow大片段对DNA末端作部分补平而使非匹配粘端形成匹配粘端的可行性。方法用 BamHI、XbalI消解载体 pcDNA3,用 BglH、Hind Ⅲ从含乙型肝炎病毒全基因组质粒中切取 HBVpreS/S基因片段。 pcDNA3的 XbalI及 preS/S基因的 Hind Ⅲ切口端经 Klenow大片段作部分补平后形成二碱基的互补粘端。连接修饰 后的preS/S基因片段与pcDNA3并转化后筛选阳性克隆。结果限制性内切酶分析显示preS/S基因被定向克隆于载 体pcDNA3的预定位点。结论部分补平法是连接非匹配DNA粘性末端的较好选择。 展开更多
关键词 基因重组 Klenow大片段 乙型肝炎病毒 部分补平法 克隆 pres/S基因
在线阅读 下载PDF
乙型肝炎病毒PreS1蛋白与初期多肽相关复合体α亚单位特异性结合的研究 被引量:1
16
作者 李丹 丁健 +1 位作者 林纳 王小众 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第23期2315-2318,共4页
目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合... 目的探讨乙型肝炎病毒(HBV)PreS1蛋白与人类初期多肽相关复合体α亚单位(nascent-polypeptide-asso-ciated complex alpha polypeptide,NACA)之间的结合作用。方法采用交合实验验证PreS1蛋白和NACA在酵母细胞内的结合作用,利用离体结合实验证实二者在体外的结合作用,免疫共沉淀实验证实二者在哺乳动物细胞中的特异性结合。结果携带NACA基因的酵母同携带preS1基因的酵母交合后发生反应,LacZ活性检测菌落呈现蓝色,离体结合实验Western印迹中出现特异性结合活性反应条带,提示PreS1蛋白和NACA在体外存在直接相互作用,免疫共沉淀实验在13×103处出现蛋白条带,提示在哺乳动物细胞水平仍能检测到PreS1蛋白和NACA的特异结合。结论NACA与PreS1蛋白在酵母细胞和哺乳动物细胞中均存在特异性结合,推测NACA可能通过与PreS1蛋白的结合影响病毒黏附及反式激活等过程。 展开更多
关键词 肝炎病毒 乙型 pres1蛋白 初期多肽相关复合体α亚单位 离体结合实验 免疫共沉淀实验
在线阅读 下载PDF
HBV3′末端缺失preS/S基因的克隆及其在真核细胞中的表达
17
作者 王忠华 姚玉成 +3 位作者 苏娟 陈海英 王新民 胡以平 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 2001年第4期274-276,共3页
目的 :克隆HBV 3′末端缺失 preS/S基因 ,构建真核表达载体 ,转染真核细胞 ,为进一步进行功能研究奠定基础。方法 :采用PCR方法从乙型肝炎病毒全基因组中克隆preS/S基因 ,构建真核表达载体pcDNA3 preS/S ,用限制性酶切和DNA测序进行鉴... 目的 :克隆HBV 3′末端缺失 preS/S基因 ,构建真核表达载体 ,转染真核细胞 ,为进一步进行功能研究奠定基础。方法 :采用PCR方法从乙型肝炎病毒全基因组中克隆preS/S基因 ,构建真核表达载体pcDNA3 preS/S ,用限制性酶切和DNA测序进行鉴定 ,通过脂质体转染Hela细胞系进行表达研究。结果 :1)克隆了 3′末端缺失的 preS/S基因 ;2 )构建 preS/S真核表达载体 ;3)转染细胞及G418筛选后得到preS/S基因稳定表达的细胞株。结论 :3′末端缺失的preS/S基因能够在胞内表达 ,此研究为基因的功能研究奠定了一定的基础。 展开更多
关键词 pres/S 基因克隆 真核表达 HBV3′末端缺失 乙型肝炎
在线阅读 下载PDF
PreS-Tat真核表达载体的构建及表达
18
作者 张祥 阚全程 +1 位作者 余祖江 王鹏 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2011年第5期706-709,共4页
目的:构建pEGFP-PreS-Tat嵌合载体并在真核细胞中表达。方法:提取人乙型肝炎病毒并用PCR法扩增出PreS片段,定向克隆入pEGFP-C3载体,在PreS下游连接合成的Tat序列,构建成功的pEGFP-PreS-Tat质粒经脂质体转染Hela细胞,Westernblot鉴定目... 目的:构建pEGFP-PreS-Tat嵌合载体并在真核细胞中表达。方法:提取人乙型肝炎病毒并用PCR法扩增出PreS片段,定向克隆入pEGFP-C3载体,在PreS下游连接合成的Tat序列,构建成功的pEGFP-PreS-Tat质粒经脂质体转染Hela细胞,Westernblot鉴定目的蛋白的表达。结果:酶切和测序结果表明成功地构建了pEGFP-PreS-Tat嵌合载体,WesternBlot结果表明该载体能在Hela细胞中表达pEGFP-PreS-Tat融合蛋白。结论:成功构建pEG-FP-PreS-Tat载体并表达出相应的融合蛋白,为研究该融合蛋白的功能奠定了基础。 展开更多
关键词 pres TAT 乙型肝炎病毒 蛋白转导区
在线阅读 下载PDF
100例HBV血清标志物、HBV-DNA、HBVpreS_1-Ag对比监测与临床分析 被引量:36
19
作者 刘恩权 王咏梅 李可军 《临床肝胆病杂志》 CAS 北大核心 2002年第4期219-221,共3页
探讨临床监测HBVpreS1-Ag对乙肝患者诊断和预后的意义。对 10 0例乙型病毒性肝炎患者HBV血清标志物、HBV -DNA及preS1-Ag进行定量、定性跟踪监测并加以临床分析。 10 0例患者中HBsAg阳性者 91例 ,preS1-Ag阳性者 5 7例 ,HBeAg阳性者 4 3... 探讨临床监测HBVpreS1-Ag对乙肝患者诊断和预后的意义。对 10 0例乙型病毒性肝炎患者HBV血清标志物、HBV -DNA及preS1-Ag进行定量、定性跟踪监测并加以临床分析。 10 0例患者中HBsAg阳性者 91例 ,preS1-Ag阳性者 5 7例 ,HBeAg阳性者 4 3例 ,HBV -DNA阳性者 5 6例 ,preS1-Ag阳性率与HBV -DNA相似且略高于HBeAg。preS1-Ag比HBeAg更为精确地反映了HBV在人体内感染和复制的情况 ,动态监测 展开更多
关键词 血清标志物 HBV-DNA HBVpres1-Ag 临床分析 诊断 预后 乙型肝炎病毒
在线阅读 下载PDF
rAd-preS1基因治疗载体的构建及对肝细胞嗜向性检测
20
作者 张丽 张明满 +1 位作者 朱晓梅 贺小张 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1414-1418,共5页
目的:制备携带PreS1基因的重组腺病毒基因治疗载体,研究其对肝细胞的嗜向性。方法:设计合成含PreS1的腺病毒纤毛Fiber基因片段,置换野生型骨架质粒Fiber片段,同源重组法构建重组体rAd-PreS1,酶切鉴定后HEK293包装生成腺病毒,抽提蛋白Wes... 目的:制备携带PreS1基因的重组腺病毒基因治疗载体,研究其对肝细胞的嗜向性。方法:设计合成含PreS1的腺病毒纤毛Fiber基因片段,置换野生型骨架质粒Fiber片段,同源重组法构建重组体rAd-PreS1,酶切鉴定后HEK293包装生成腺病毒,抽提蛋白Western blot检测目的蛋白PreS1表达。重组腺病毒rAd-preS1分别转染人正常肝细胞L02、人肺癌细胞A549、人喉癌细胞Hep2、人卵巢癌细胞SKOV3,同时野生腺病毒rAd作为阴性对照,荧光显微镜下观察各细胞内绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)表达程度,用细胞的病毒滴度值表示,检测其对肝细胞的嗜向性。结果:经酶切鉴定成功构建rAd-preS1载体,Western blot示蛋白分子量大小均约为63 kD目的条带。rAd-preS1感染L02细胞组GFP表达程度明显强于A549、Hep2及SKOV3细胞组(P均是0.000),而A549、Hep2及SKOV3各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P>0.05);对照组各细胞组间GFP表达差异无统计学意义(P>0.05)。结论:含PreS1的重组腺病毒rAd-preS1显示出对人肝细胞具有较强嗜向性,而对非肝细胞无明显效果,这为进一步研究肝脏疾病靶向基因治疗奠定了基础。 展开更多
关键词 重组腺病毒 pres1基因 肝细胞嗜向性 基因治疗
在线阅读 下载PDF
上一页 1 2 250 下一页 到第
使用帮助 返回顶部