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乙脑病毒PrM/E基因在杆状病毒表达系统中的表达
被引量：
3
1
作者
刘金华
郭玉璞
+3 位作者
陈永福
史为民
杨汉春
高福
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第6期546-552,共7页
本试验将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）的ＰｒＭ／Ｅ基因的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段（２．１ｋｂ）插入到杆状病毒载体ｐＡｃＵＷ３１的ＢａｍＨＩ位点，使外源基因置于多角体蛋白启动子下游，构建成转移载体ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ。以Ｌｉｐｏ...
本试验将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）的ＰｒＭ／Ｅ基因的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段（２．１ｋｂ）插入到杆状病毒载体ｐＡｃＵＷ３１的ＢａｍＨＩ位点，使外源基因置于多角体蛋白启动子下游，构建成转移载体ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ作为共转染试剂，将纯化的ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ与Ｂｓｕ３６Ⅰ线性化的杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ·ＬａｃＺＤＮＡ共转染昆虫细胞ｓｆ９，经病毒蚀斑纯化技术和Ｘ－ｇａｌ与中性红双重染色技术，随机挑取了５个白斑并进一步纯化，用间接荧光抗体技术对挑取的５个白斑感染的ｓｆ９细胞染色，３个克隆在细胞核和细胞浆内呈现特异荧光，２个无特异性荧光。用地高辛标记ＰｒＭ／ＥｃＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段，制备了核酸探针，用该探针通过斑点杂交技术对５个白斑进行检测。结果发现，３个为重组的阳性克隆，２个为假阳性，该结果与荧光抗体染色的结果相一致。间接荧光抗体染色的结果也说明ｓｆ９细胞表达了所期望的产物，进而也说明了基因片段的正确性。ｐＡｃＵＷＪＥ转移载体的构建，为ｐＡｃＵＷＪＥ－ＰＰＶ的构建奠定了基础，为ＪＥＶ和ＰＰＶ二价重组苗的研究提供了保障。
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关键词
乙型脑炎病毒
杆状病毒
prm/e基因
猪病
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职称材料
乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序和SA14、SA14-14-2的序列比较
2
作者
汤德元
徐健
+3 位作者
曾智勇
黄涛
李春燕
李佳蔚
《猪业科学》
2008年第12期71-75,共5页
该研究通过RT-PCR扩增乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序后,将测序结果与GenBanK发表的JEV SA14基因序列和SA14-14-2进行比较分析,结果发现分离株与JEV SA14强毒株的同源性为98.1%,与SA1-14-2株的同源性为97.1%;在477-2477长为2000nt决定...
该研究通过RT-PCR扩增乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序后,将测序结果与GenBanK发表的JEV SA14基因序列和SA14-14-2进行比较分析,结果发现分离株与JEV SA14强毒株的同源性为98.1%,与SA1-14-2株的同源性为97.1%;在477-2477长为2000nt决定JEV抗源性的PrM/E区中,分离株与SA14株仅有40个碱基不同,其中12个碱基为错义突变,导致E基因2个氨基酸序列(E135和E232)与SA14的E区两个氨基酸的不同;而分离株与SA14-14-2株有48个碱基不同,导致E基因12个氨基酸序列与SA14-14-2不同。由于确定JEV毒性的10个关键性基酸的位置均在E蛋白上,分离株与SA14强毒株这10个氨基酸的位置完全一致,因此序列的比较结果表明;乙脑病毒分离株为强毒株。由此可以看出基因分析对于病毒毒力的判断具有重要参考意义。
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关键词
日本乙型脑炎病毒
prm/e基因
克隆
核酸序列
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职称材料
题名
乙脑病毒PrM/E基因在杆状病毒表达系统中的表达
被引量：
3
1
作者
刘金华
郭玉璞
陈永福
史为民
杨汉春
高福
机构
中国农业大学动物医学院
出处
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998年第6期546-552,共7页
基金
国家自然科学基金
文摘
本试验将乙型脑炎病毒（ＪＥＶ）的ＰｒＭ／Ｅ基因的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段（２．１ｋｂ）插入到杆状病毒载体ｐＡｃＵＷ３１的ＢａｍＨＩ位点，使外源基因置于多角体蛋白启动子下游，构建成转移载体ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ。以Ｌｉｐｏｆｅｃｔｉｎ作为共转染试剂，将纯化的ｐＡｃＵＷ３１ＪＥ与Ｂｓｕ３６Ⅰ线性化的杆状病毒ＡｃＭＮＰＶ·ＬａｃＺＤＮＡ共转染昆虫细胞ｓｆ９，经病毒蚀斑纯化技术和Ｘ－ｇａｌ与中性红双重染色技术，随机挑取了５个白斑并进一步纯化，用间接荧光抗体技术对挑取的５个白斑感染的ｓｆ９细胞染色，３个克隆在细胞核和细胞浆内呈现特异荧光，２个无特异性荧光。用地高辛标记ＰｒＭ／ＥｃＤＮＡ的ＨｉｎｄⅢ－ＢｇｌⅡ片段，制备了核酸探针，用该探针通过斑点杂交技术对５个白斑进行检测。结果发现，３个为重组的阳性克隆，２个为假阳性，该结果与荧光抗体染色的结果相一致。间接荧光抗体染色的结果也说明ｓｆ９细胞表达了所期望的产物，进而也说明了基因片段的正确性。ｐＡｃＵＷＪＥ转移载体的构建，为ｐＡｃＵＷＪＥ－ＰＰＶ的构建奠定了基础，为ＪＥＶ和ＰＰＶ二价重组苗的研究提供了保障。
关键词
乙型脑炎病毒
杆状病毒
prm/e基因
猪病
Keywords
Japan
e
s
e
e
nc
e
phalitis virus,Baculovirus
e
xpr
e
ssion syst
e
m,Immunog
e
n,Vaccin
e
分类号
S858.285.3 [农业科学—临床兽医学]
S858.282.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序和SA14、SA14-14-2的序列比较
2
作者
汤德元
徐健
曾智勇
黄涛
李春燕
李佳蔚
机构
贵州大学动物科学学院
出处
《猪业科学》
2008年第12期71-75,共5页
基金
2006年贵州省高层次人才科研条件特助经费项目资助
编号:TZJF-2006年01号。
文摘
该研究通过RT-PCR扩增乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序后,将测序结果与GenBanK发表的JEV SA14基因序列和SA14-14-2进行比较分析,结果发现分离株与JEV SA14强毒株的同源性为98.1%,与SA1-14-2株的同源性为97.1%;在477-2477长为2000nt决定JEV抗源性的PrM/E区中,分离株与SA14株仅有40个碱基不同,其中12个碱基为错义突变,导致E基因2个氨基酸序列(E135和E232)与SA14的E区两个氨基酸的不同;而分离株与SA14-14-2株有48个碱基不同,导致E基因12个氨基酸序列与SA14-14-2不同。由于确定JEV毒性的10个关键性基酸的位置均在E蛋白上,分离株与SA14强毒株这10个氨基酸的位置完全一致,因此序列的比较结果表明;乙脑病毒分离株为强毒株。由此可以看出基因分析对于病毒毒力的判断具有重要参考意义。
关键词
日本乙型脑炎病毒
prm/e基因
克隆
核酸序列
分类号
S852.65 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
乙脑病毒PrM/E基因在杆状病毒表达系统中的表达
刘金华
郭玉璞
陈永福
史为民
杨汉春
高福
《畜牧兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
1998
3
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职称材料
2
乙型脑炎病毒分离株PrM/E基因测序和SA14、SA14-14-2的序列比较
汤德元
徐健
曾智勇
黄涛
李春燕
李佳蔚
《猪业科学》
2008
0
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