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UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
被引量：
1
1
作者
王春生
李晶
+4 位作者
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1202-1205,1235,共5页
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;...
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。
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关键词
蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体
超高硫角蛋白启动子
真核表达载体
小鼠成纤维细胞
转基因
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职称材料
拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
孟凡华
房君
+3 位作者
王海涛
邢燕平
齐昱
周欢敏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期134-138,共5页
利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPT...
利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPTG诱导重组质粒pGEX-S在大肠杆菌感受态细胞BL21中表达,并利用GST标签亲和纯化重组蛋白,获得的S-GST蛋白与佐剂混合后,采用多点皮下免疫注射8只健康的CDⅠ小白鼠,免疫期结束后收集抗血清进行ELISA检测。序列分析后,确定原核表达载体pGEX-S编码正确;诱导表达后,Western blot检测显示在41 kD处有重组蛋白条带出现,与我们预期的结果相符;抗血清Elisa检测显示有2只小鼠A和F抗血清效价较高。采用原核表达生产的拟蜘蛛牵丝蛋白成功制备了多克隆抗体。
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关键词
拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(
s
)
原核表达
多克隆抗体
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职称材料
题名
UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
被引量：
1
1
作者
王春生
李晶
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
机构
东北林业大学生命科学学院
东北农业大学动物科技学院
出处
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011年第6期1202-1205,1235,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30771538
31000990)
国家转基因生物新品种培育科技重大专项(2009ZX08008-004B)
文摘
为了获得转拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S的阳性小鼠成纤维细胞,本研究将前期工作中人工合成的拟蜘蛛拖丝蛋白基因2S和克隆获得的小鼠超高硫角蛋白启动子(UHS),与带有IRES序列和GFP报告基因的表达载体连接,构建真核表达载体UHS-2S-pIRES2-EGFP;将UHS-2S-pIRES2-EGFP线性化后,采用脂质体法转染小鼠皮肤成纤维细胞,通过G418筛选获得neo基因抗性阳性细胞。结果表明:(1)成功构建UHS-2S-pIRES2-EGFP;(2)转基因细胞的最佳G418筛选浓度为400μg/mL;(3)筛选获得呈梭形的转基因细胞,对其进行传代培养时,细胞增殖缓慢,细胞未呈现正常细胞的"S"型的生长曲线;(4)PCR检测结果显示,UHS-2S-pIRES2-EGFP载体已经整合到G418抗性细胞的基因组中。
关键词
蜘蛛拖丝蛋白基因二聚体
超高硫角蛋白启动子
真核表达载体
小鼠成纤维细胞
转基因
Keywords
polymerized spider dragline silk protein gene（2s）
ultra-high
s
ulfur keratin（UH
s）
promoter
mou
s
e fibrobla
s
t
eukaryotic expre
s
s
ion vector
tran
s
gene
分类号
Q781 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备
被引量：
1
2
作者
孟凡华
房君
王海涛
邢燕平
齐昱
周欢敏
机构
内蒙古农业大学生命科学学院
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013年第3期134-138,共5页
基金
国家转基因生物新品种培育重大专项(2009ZX08008-008)
文摘
利用原核表达获得的拟蜘蛛牵丝蛋白制备多克隆抗体,将为我们在真核水平检测其表达情况奠定基础。以质粒pGEX-2T为骨架载体,在其多克隆位点处连接人工合成的拟蛛丝蛋白基因单体(S),构建含有GST标签的融合蛋白原核表达载体pGEX-S;利用IPTG诱导重组质粒pGEX-S在大肠杆菌感受态细胞BL21中表达,并利用GST标签亲和纯化重组蛋白,获得的S-GST蛋白与佐剂混合后,采用多点皮下免疫注射8只健康的CDⅠ小白鼠,免疫期结束后收集抗血清进行ELISA检测。序列分析后,确定原核表达载体pGEX-S编码正确;诱导表达后,Western blot检测显示在41 kD处有重组蛋白条带出现,与我们预期的结果相符;抗血清Elisa检测显示有2只小鼠A和F抗血清效价较高。采用原核表达生产的拟蜘蛛牵丝蛋白成功制备了多克隆抗体。
关键词
拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(
s
)
原核表达
多克隆抗体
Keywords
Intended
spider
dragline
silk
protein
gene
monomer （
s
） Prokaryotic expre
s
s
ion
Polyclonal antibody
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
UHS-拟蜘蛛拖丝蛋白基因转染小鼠成纤维细胞及其鉴定
王春生
李晶
宁方勇
张秋婷
梁洋
朴善花
安铁洙
《江西农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2011
1
在线阅读
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职称材料
2
拟蜘蛛牵丝蛋白基因单体(S)原核表达及多克隆抗体制备
孟凡华
房君
王海涛
邢燕平
齐昱
周欢敏
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2013
1
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