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基于PIPE现象的质粒克隆位点序列设计与功能评价
1
作者
陈凡
喻艳莉
李奕雅
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1166-1174,共9页
分子克隆是现代生物学研究的核心技术之一,是基因工程、蛋白质工程中的重要手段。为提高分子克隆实验的操作效率,本研究设计并合成基于聚合酶引物不完全延伸(polymerase incomplete primer extension,PIPE)现象的质粒克隆位点序列。并...
分子克隆是现代生物学研究的核心技术之一,是基因工程、蛋白质工程中的重要手段。为提高分子克隆实验的操作效率,本研究设计并合成基于聚合酶引物不完全延伸(polymerase incomplete primer extension,PIPE)现象的质粒克隆位点序列。并以此为基础统一相关引物的设计方案,避免传统酶切———连接法中需针对不同载体MCS序列设计不同引物的缺点。该方案利用13 bp定长接头序列,在同一体系中使用2对引物、2种线性化模板同时扩增载体和插入片段,通过20个循环,在1次PCR过程中即合成可供转化使用的带缺口质粒产物。在NEB Q5酶系统中,利用此法将3种荧光素酶序列插入pET-15b及pET-21b(+)载体,均获得成功。且利用商品化感受态细胞(转化效率>5×108 cfu/μg)转化后所获得转化子数量均在300个以上,其中含插入片段的阳性克隆比例可达85%以上。基于本方案的设计及作用原理,可将其应用于10 kb以内载体和插入片段的快速重组。且具有通用性强、耗时少、阳性克隆得率高和成本低等优点,是传统DNA重组方法的有益补充,可作为各实验室的常规分子克隆手段之一。
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关键词
聚合酶引物不完全延伸
聚合酶链式反应
分子克隆
克隆位点序列
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职称材料
题名
基于PIPE现象的质粒克隆位点序列设计与功能评价
1
作者
陈凡
喻艳莉
李奕雅
机构
闽南师范大学生物科学与技术学院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第10期1166-1174,共9页
基金
福建省自然科学基金项目(No.2018J01464)
漳州市科技计划项目(No.ZZ2018J18)
福建省中青年教师教育科研项目(No.JAT170353,JAT170354)资助~~
文摘
分子克隆是现代生物学研究的核心技术之一,是基因工程、蛋白质工程中的重要手段。为提高分子克隆实验的操作效率,本研究设计并合成基于聚合酶引物不完全延伸(polymerase incomplete primer extension,PIPE)现象的质粒克隆位点序列。并以此为基础统一相关引物的设计方案,避免传统酶切———连接法中需针对不同载体MCS序列设计不同引物的缺点。该方案利用13 bp定长接头序列,在同一体系中使用2对引物、2种线性化模板同时扩增载体和插入片段,通过20个循环,在1次PCR过程中即合成可供转化使用的带缺口质粒产物。在NEB Q5酶系统中,利用此法将3种荧光素酶序列插入pET-15b及pET-21b(+)载体,均获得成功。且利用商品化感受态细胞(转化效率>5×108 cfu/μg)转化后所获得转化子数量均在300个以上,其中含插入片段的阳性克隆比例可达85%以上。基于本方案的设计及作用原理,可将其应用于10 kb以内载体和插入片段的快速重组。且具有通用性强、耗时少、阳性克隆得率高和成本低等优点,是传统DNA重组方法的有益补充,可作为各实验室的常规分子克隆手段之一。
关键词
聚合酶引物不完全延伸
聚合酶链式反应
分子克隆
克隆位点序列
Keywords
polymerase
incomplete
primer
extension
(
pipe
)
polymerase
chain reaction(PCR)
molecular cloning
cloning site sequence
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
基于PIPE现象的质粒克隆位点序列设计与功能评价
陈凡
喻艳莉
李奕雅
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2019
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