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重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达
被引量：
1
1
作者
谢秋玲
刘兰
+3 位作者
刘秀贵
张玲
徐丽慧
洪岸
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期743-748,共6页
【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFas...
【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒。将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性。【结果】重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符。通过ProteinA亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c3T3细胞增殖的能力。【结论】具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达。
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关键词
血小板源性生长因子受体
杆状病毒表达载体系统
昆虫细胞
重组蛋白
MTT法
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职称材料
PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用
2
作者
付水
山松
+5 位作者
刘孝荣
李志斌
吕建新
鲁先平
宁志强
王小宁
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期688-691,共4页
目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β...
目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β真核表达载体pcDNA3.1-PDGFR-β,将其转染至NIH 3T3细胞,获得稳定转染的细胞克隆,并对其进行功能学鉴定及应用;应用瞬时转染PDGFR-β的HeLa细胞,建立PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果在无血清培养条件下,稳定转染人PDGFR-β的NIH 3T3细胞获得了PDGF依赖性的细胞增殖特征;HeLa细胞经瞬时转染PDG-FR-β后,可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷酸化。通过应用已知PDGFR-β抑制剂及自行合成化合物,确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论所构建并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性,适用于较高通量的PDGFR-β和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。
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关键词
酪氨酸激酶受体
血小板衍生生长因子
血小板衍生生长因子受体
NIH
3T3细胞
HeLa细胞
药物筛选模型
酪氨酸激酶受体抑制剂
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职称材料
题名
重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达
被引量：
1
1
作者
谢秋玲
刘兰
刘秀贵
张玲
徐丽慧
洪岸
机构
暨南大学生物工程研究所
广东省生物工程药物重点实验室
出处
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第7期743-748,共6页
基金
广东省科技计划项目(2008B030301349)
文摘
【目的】利用昆虫细胞Bac-to-Bac杆状病毒表达系统表达血小板源性生长因子受体β(PDGFRβ)链膜外区与人IgGFc片段的可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc,并检测重组蛋白的特异性和生物活性。【方法】采用Bac-to-Bac系统,构建重组转移质粒pFastbac-sPDGFRβ/Fc,转化到含穿梭载体Bacmid的感受态细胞DH10Bac中,使目的基因与杆状病毒基因组DNA发生位点特异性重组,获得重组病毒DNA,将其通过脂质体转染昆虫细胞Sf9获得重组病毒。将该重组病毒感染Sf9无血清细胞系,在Sf9细胞中表达sPDGFRβ/Fc,对表达产物进行Western blotting检测和Protein A亲合层析纯化,并进一步通过MTT法检测获得的重组蛋白生物学活性。【结果】重组病毒感染Sf9细胞后,经Western blotting分析,能检测到一条分子量约为97kDa的特异性条带,与目的蛋白大小相符。通过ProteinA亲和层析,获得了纯度达75%以上,表达量为1μg/mL细胞培养上清的重组融合蛋白,MTT结果显示该重组融合蛋白sPDGFRβ/Fc具有抑制PDGF刺激的Balb/c3T3细胞增殖的能力。【结论】具有生物活性的重组可溶性受体融合蛋白sPDGFRβ/Fc可在昆虫细胞中成功地得到表达。
关键词
血小板源性生长因子受体
杆状病毒表达载体系统
昆虫细胞
重组蛋白
MTT法
Keywords
platelet-derived
growth
factor
receptor
（
pdgfr
）
baculovirns expression vector system （BEVS）
insect
cell
recombinant protein
MTT assay
分类号
Q965 [生物学—昆虫学]
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职称材料
题名
PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用
2
作者
付水
山松
刘孝荣
李志斌
吕建新
鲁先平
宁志强
王小宁
机构
温州医学院检验医学院
深圳微芯生物科技有限公司
出处
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第5期688-691,共4页
基金
粤港关键领域重点突破资助项目(NoYG2005059)
文摘
目的建立针对以血小板衍生生长因子受体-β(plate-let-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)为靶标的特异及灵敏的细胞模型体系,用于酪氨酸激酶受体(receptor tyro-sine kinase,RTK)抑制剂的筛选和研究。方法构建人的PDGFR-β真核表达载体pcDNA3.1-PDGFR-β,将其转染至NIH 3T3细胞,获得稳定转染的细胞克隆,并对其进行功能学鉴定及应用;应用瞬时转染PDGFR-β的HeLa细胞,建立PDGF依赖性的受体磷酸化细胞模型。结果在无血清培养条件下,稳定转染人PDGFR-β的NIH 3T3细胞获得了PDGF依赖性的细胞增殖特征;HeLa细胞经瞬时转染PDG-FR-β后,可以检测出明显的PDGF依赖性的受体酪氨酸磷酸化。通过应用已知PDGFR-β抑制剂及自行合成化合物,确证了以上细胞模型具有机制针对性特征。结论所构建并确证的细胞模型具有特异性和灵敏性,适用于较高通量的PDGFR-β和其它RTK抑制化合物的体外筛选与研究。
关键词
酪氨酸激酶受体
血小板衍生生长因子
血小板衍生生长因子受体
NIH
3T3细胞
HeLa细胞
药物筛选模型
酪氨酸激酶受体抑制剂
Keywords
receptor
tyrosine kinase （ RTK ）
platelet-derived
growth
factor
（PDGF）
platelet-derived
growth
factor
receptor
-β（
pdgfr
-β）
NIH 3T3
cell
HeLa
cell
drug screening models
RTK inhibitors.
分类号
R329.2 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
R329.24 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人可溶性PDGFRβ/Fc在昆虫细胞Sf9中的表达
谢秋玲
刘兰
刘秀贵
张玲
徐丽慧
洪岸
《昆虫学报》
CAS
CSCD
北大核心
2009
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
PDGFR-β抑制剂细胞筛选模型的构建及应用
付水
山松
刘孝荣
李志斌
吕建新
鲁先平
宁志强
王小宁
《中国药理学通报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
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