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长足大竹象信息素结合蛋白CbuqPBP2互作蛋白的筛选与验证 被引量:1
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作者 杨桦 李祥乾 +2 位作者 王帆 方睿 杨伟 《西北农林科技大学学报(自然科学版)》 CSCD 北大核心 2024年第1期87-97,共11页
【目的】筛选长足大竹象(Cyrtotrachelus buqueti)信息素结合蛋白CbuqPBP2的互作蛋白,为实现利用信息物质对长足大竹象种群持续控制提供参考。【方法】利用GST pull-down联合质谱技术,对长足大竹象信息素结合蛋白CbuqPBP2的互作蛋白进... 【目的】筛选长足大竹象(Cyrtotrachelus buqueti)信息素结合蛋白CbuqPBP2的互作蛋白,为实现利用信息物质对长足大竹象种群持续控制提供参考。【方法】利用GST pull-down联合质谱技术,对长足大竹象信息素结合蛋白CbuqPBP2的互作蛋白进行筛选、鉴定和分析,并采用酵母双杂交试验验证了CbuqPBP2与信息素结合蛋白CbuqPBP1的特异性互作。【结果】GST pull-down共筛选出45个与长足大竹象信息素结合蛋白CbuqPBP2特异性结合的候选互作蛋白,包括CbuqPBP1、ND2、CYTB。这些互作蛋白主要参与细胞过程、定位、代谢过程、应激反应以及生物调控等多个生物学过程。使用酵母双杂交体系,构建了pGADT7-PBP1重组猎物质粒与pGBKT7-PBP2重组诱饵质粒,通过诱饵质粒毒性检测和自激活检测,表明重组诱饵质粒对Y2HGold酵母菌无毒性作用。共转化验证结果显示,诱饵质粒pGBKT7-PBP2共转化酵母菌株能够在TDO培养基上生长。【结论】CbuqPBP2和CbuqPBP1之间有相互作用,不同信息素结合蛋白间的互作对深入理解长足大竹象嗅觉感受机制提供了新的思路。 展开更多
关键词 长足大竹象 信息素结合蛋白 蛋白互作 酵母双杂交 GST pull-down
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家蚕蛹和成虫期GOBP/PBP亚家族基因簇基因定位与表达分析 被引量:8
2
作者 张升祥 张瑶 +4 位作者 徐世清 王更先 胡增娟 赵春晓 崔为正 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期1069-1076,共8页
昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding p... 昆虫的气味结合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)在昆虫与外界环境化学信息交流过程中起着重要作用,对昆虫觅食、求偶、繁殖具有重要意义。普通气味结合蛋白/性信息素结合蛋白(general odorant binding protein/pheromone binding protein,GOBP/PBP)是鳞翅目昆虫OBP家族的一个重要单系群。为进一步明确家蚕Bombyx moriGOBP/PBP基因的结构、表达及功能,本研究利用染色体定位及半定量表达分析方法对其进行了分析。染色体定位分析显示,这些基因以基因簇的形式存在于第19染色体的nscaf3052上,基因结构相似,转录方向一致,表明这些基因可能由同源基因复制产生,并具有类似功能。对家蚕蛹和成虫不同发育阶段的雌、雄虫多种组织中进行表达分析发现,这些基因的表达在不同发育时期和不同组织间差异明显(P<0.05),相对表达量均以触角中为最高,其他非嗅觉组织中也多有表达,性别间差异不大,说明了该基因簇基因除了具有嗅觉相关的功能外,很可能具有其他尚未被发现的功能。 展开更多
关键词 家蚕 气味结合蛋白 pbp1-GOBP2亚家族 基因簇 表达分析 染色体定位
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DnaJ类分子伴侣PBP基因的原核表达及兔抗PBP抗体的制备 被引量:2
3
作者 刘成刚 朱美财 +4 位作者 李文 石樱 占志 王荫静 向培德 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期456-458,共3页
目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因,并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性。方法:应用RTPCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBPcDNA。测序后将其克隆到表达载体pET28a中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。表达产物... 目的:在原核系统中表达DnaJ类分子伴侣感光受体外周蛋白结合蛋白(PBP)基因,并制备兔抗PBP的抗体鉴定其特性。方法:应用RTPCR从人胎脑组织总RNA中扩增PBPcDNA。测序后将其克隆到表达载体pET28a中,并在大肠杆菌中以IPTG诱导表达。表达产物经NiNTA亲和层析柱纯化后,用SDSPAGE进行鉴定。以所获纯化的PBP免疫新西兰白兔,制备兔抗PBP抗体。抗体的效价及特异性用Westernblot进行测定和分析。结果:扩增和克隆出了720bp的PBP基因。构建的重组质粒pET28aPBP在大肠杆菌中得到高表达,诱导表达的蛋白存在于包涵体和细菌裂解上清中,纯化的PBP经SDSPAGE鉴定呈单一条带。以纯化的PBP免疫兔,制备了兔抗PBP抗体。Westernblot鉴定证实,该抗体可与原核表达的PBP特异性结合,抗体效价为1∶1600。结论:在原核细胞中表达了具有生物学活性的PBP,并以其为免疫原制备了兔抗PBP的抗体,为进一步研究PBP的结构与生物学活性奠定了基础。 展开更多
关键词 pbp 热休克蛋白 基因表达 多克隆抗体
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布氏杆菌PBP_(39)蛋白抗原表达及免疫效果的研究 被引量:2
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作者 罗德炎 曾政 +4 位作者 李非 高永辉 李鹏 王希良 何凤田 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第9期817-820,共4页
目的 获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法 扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果 ... 目的 获得纯化的布氏杆菌PBP3 9重组蛋白抗原,观察PBP3 9重组蛋白的免疫原性。方法 扩增不同种布氏杆菌PBP3 9基因,测序、连接表达载体PET3 2a ,诱导表达,柱纯化PBP3 9重组蛋白抗原,免疫BALB/c小鼠,ELISA检测抗体及抗体亚型。结果 我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9基因与国外已报道的PBP3 9编码基因不完全相同。在蛋白N端5 8位碱基后多一G ,造成移码突变。故在85、86、87位编码终止子TCA。而在13 4、13 5、13 6位的ATG又编码了新的起始密码。布氏杆菌PBP3 9蛋白在大肠杆菌高效表达,表达量达40 % ,纯化重组蛋白抗原免疫BALB/c小鼠,产生了较高水平的特异性抗体免疫应答,抗体亚型主要是IgG1。结论 我国牛、羊、猪布氏杆菌PBP3 9编码抗原蛋白同国外已报道的不完全相同,纯化的PBP3 9重组蛋白抗原可诱导高水平的抗体反应,为筛选布氏杆菌病新型疫苗保护性抗原分子奠定了基础。 展开更多
关键词 布氏杆菌pbp39 重组蛋白抗原 免疫原性
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浙江地区青霉素耐药肺炎链球菌PBPs基因及氨基酸序列研究 被引量:3
5
作者 林峰 郑敏巧 +3 位作者 曾爱平 丁玎 文思远 王升启 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期965-971,共7页
为阐明浙江地区青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)的青霉素结合蛋白(PBPs)的基因和氨基酸序列的变异特点,对温州医学院自2000年11月~2004年1月收集的26份肺炎链球菌进行分离、鉴定及青霉素药敏实验,并对每株链球菌的PBP1A、PBP2B、PBP2X基因... 为阐明浙江地区青霉素耐药肺炎链球菌(PRSP)的青霉素结合蛋白(PBPs)的基因和氨基酸序列的变异特点,对温州医学院自2000年11月~2004年1月收集的26份肺炎链球菌进行分离、鉴定及青霉素药敏实验,并对每株链球菌的PBP1A、PBP2B、PBP2X基因进行PCR扩增和直接测序,通过序列比对与生物信息学分析.结果表明,研究中的PBP1A的主要突变位点是保守基序KTG之后的4个连续氨基酸替换Thr574Ala、Ser575Thr、Gln576Gly、Phe577Tyr和保守序列STMK内的氨基酸替换Thr371Ser;PBP2B的主要突变位点是保守序列SSN之后的氨基酸替换Thr451Ala;PBP2X的主要突变位点是保守基序STMK内的氨基酸替换Thr338Ala.以上突变类型以及菌株的青霉素耐药水平与文献报道相符.研究检测的PRSP的PBPs基因中暂未发现本地区特有的(新的)基因突变,也未检测出文献报道的某些与青霉素抗性相关的氨基酸替换. 展开更多
关键词 肺炎链球菌(SP) 青霉素耐药的肺炎链球菌(PRSP) 青霉素结合蛋白(pbps)
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PBP对土壤硝化作用的影响及对小白菜增产效应的研究 被引量:1
6
作者 牛治宇 何鹏 吴敏 《农业环境科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期228-230,共3页
采用盆栽试验方法研究了香蕉假茎汁液提取物—PBP对土壤硝化作用及对小白菜产量的影响。结果表明,PBP系列物质能抑制铵态氮在土壤中的转化,减缓土壤铵态氮的转化速率和土壤硝态氮的生成量、生成速率。同时,PBP系列物质对盆栽小白菜有显... 采用盆栽试验方法研究了香蕉假茎汁液提取物—PBP对土壤硝化作用及对小白菜产量的影响。结果表明,PBP系列物质能抑制铵态氮在土壤中的转化,减缓土壤铵态氮的转化速率和土壤硝态氮的生成量、生成速率。同时,PBP系列物质对盆栽小白菜有显著或极显著的增产效果。 展开更多
关键词 pbp 土壤 硝化作用 小白菜 增产效应 盆栽试验
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MRSA-PBP2a单克隆抗体乳胶凝集检测法的建立 被引量:3
7
作者 徐霞 陈思聪 唐晓华 《中山大学学报(医学科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期611-614,628,共5页
【目的】应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法。【方法】以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗... 【目的】应用抗PBP2a单克隆抗体,以化学交联法致敏羧化聚苯乙烯乳胶,建立快速检测MRSA-PBP2a的乳胶凝集法。【方法】以辛酸-硫酸铵法纯化PBP2a单克隆抗体,将纯化后单克隆抗体和羧化乳胶经碳化二亚胺(EDC)共价偶联,并对偶联条件(偶联抗体浓度、乳胶浓度、偶联时间和偶联缓冲液)进行探索和优化,建立检测PBP2a的乳胶凝集法。【结果】140mg/L的抗体浓度与15g/L的羧化聚苯乙烯乳胶,在pH 5.8缓冲液中偶联8h后有较好的凝集效果和偶联效率,所建立的乳胶凝集法敏感性和特异性良好。【结论】初步建立了检测PBP2a的胶乳凝集法,为研制MRSA快速鉴定试剂盒奠定了良好的基础。 展开更多
关键词 乳胶凝集法 单克隆抗体 检测法 pbp2A 辛酸-硫酸铵法 共价偶联 抗体浓度 聚苯乙烯
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肺炎链球菌中青霉素结合蛋白PBP3的功能与结构研究进展 被引量:2
8
作者 周宇 王长振 +2 位作者 侯粲 李爽跃 杨曙明 《安徽农业科学》 CAS 2013年第8期3319-3322,共4页
PBP3作为肺炎链球菌唯一的D,D羧肽酶,能够从肽聚糖五肽上移除最后一个末端D-Ala,导致转肽反应中供体不可用,因此控制了肽聚糖的网状交联水平,在细胞分裂和生长中起重要作用。文中对PBP3的功能与结构进行了综述,为今后PBP3的深入研究与... PBP3作为肺炎链球菌唯一的D,D羧肽酶,能够从肽聚糖五肽上移除最后一个末端D-Ala,导致转肽反应中供体不可用,因此控制了肽聚糖的网状交联水平,在细胞分裂和生长中起重要作用。文中对PBP3的功能与结构进行了综述,为今后PBP3的深入研究与应用提供了基础资料。 展开更多
关键词 青霉素结合蛋白pbp3 肺炎链球菌 结构与功能
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耐甲氧西林金葡球菌PBPs的研究方法 被引量:1
9
作者 李寨 李耘 李家泰 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1996年第4期281-284,共4页
描述了由我所在Sprat经典方法基础上加以改进的MRSAPBPs分离方法。包括:(1)细菌的培养;(2)膜蛋白的制备;(3)聚丙烯酰胺凝胶电泳;(4)放射自显影。
关键词 金葡萄球菌 MRSA 青霉素结合蛋白 pbps
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头孢拉啶、头孢噻肟对MRSA PBP_(2a)的诱导作用以及形态、耐药性的影响 被引量:9
10
作者 吴本权 唐英春 +3 位作者 张扣兴 张天托 朱家馨 谈淑卿 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期440-444,共5页
目的:探讨作用于不同PBPs靶位点的β-内酰胺抗生素联合用药对MRSA体外抗菌活性的影响及其分子机制和形态结构改变。方法:分别测定头孢拉啶和头孢噻肟单独或联合用药对MRSA、MSSA的MIC(FIC)值,SDS-PA... 目的:探讨作用于不同PBPs靶位点的β-内酰胺抗生素联合用药对MRSA体外抗菌活性的影响及其分子机制和形态结构改变。方法:分别测定头孢拉啶和头孢噻肟单独或联合用药对MRSA、MSSA的MIC(FIC)值,SDS-PAGE分离两药单用或联用诱导前后的细菌膜蛋白,分光光度扫描仪测定耐药蛋白PBP2a的相对含量,扫描电镜观察抗生素不同方式处理后的细菌形态改变。结果:头孢拉啶和头孢噻肟单用对20 株MRSA的MIC50、MIC90 分别为128、512m g/L和16、256m g/L;两药联用前者FIC50、FIC90为4、64m g/L,后者为2、32m g/L,FIC≤0.5,提示两药联用有良好的协同作用。两药单用时都能在一定范围诱导MRSA大量表达PBP2a,而联合用药却不会诱导PBP2a 的表达增多,其协同作用可能与其不诱导PBP2a的表达有关,由于两药作用的PBPs靶位点不同及PBP2a的保护作用造成MRSA和MSSA不同的形态改变。结论:作用于不同PBPs靶位点的头孢拉啶和头孢噻肟联合用药不诱导耐药蛋白PBP2a的表达,从而具有良好的协同作用并造成细菌形态的明显改变。 展开更多
关键词 头孢拉啶 头孢噻肟 MRSA 葡萄球菌 耐药蛋白
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PBP压电双晶片驱动器力学特性研究(英文)
11
作者 胡凯明 文立华 李双 《压电与声光》 CSCD 北大核心 2015年第3期393-397,401,共6页
为了获得后屈曲预压缩(PBP)驱动器的力学特性,该文通过解析模型、有限元模型及实验验证对其进行了研究,3种结果符合较好。结果表明,PBP驱动器可达到10°的输出转角峰-峰值,3倍于施加同样电压的普通压电双晶片,设计空间增大。其一截... 为了获得后屈曲预压缩(PBP)驱动器的力学特性,该文通过解析模型、有限元模型及实验验证对其进行了研究,3种结果符合较好。结果表明,PBP驱动器可达到10°的输出转角峰-峰值,3倍于施加同样电压的普通压电双晶片,设计空间增大。其一截频率达到178Hz,远高于普通微小型电动伺服舵机。该文可为PBP舵机驱动器原理样机的研制提供理论基础和实验方法。 展开更多
关键词 后屈曲预压缩(pbp) 压电双晶片 伺服驱动器 增大转角
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PBP治疗低血压综合症的研究
12
作者 蔡荣湘 黄利权 +2 位作者 梁兰芬 施明华 杨弘 《浙江农业大学学报》 CSCD 1996年第2期213-216,共4页
PBP是利用动物的内脏加工产物与中药配制而成,不含有毒化学药品或添加剂、防腐剂、色素等物质。经测定,PBP中的各种氨基酸及微量元素含量较高而且具有提高机体免疫功能的作用,为安全有效之保健药品。经门诊试验表明,低血压综... PBP是利用动物的内脏加工产物与中药配制而成,不含有毒化学药品或添加剂、防腐剂、色素等物质。经测定,PBP中的各种氨基酸及微量元素含量较高而且具有提高机体免疫功能的作用,为安全有效之保健药品。经门诊试验表明,低血压综合症患者经几个疗程治疗后,其血压可以逐渐上升并持续稳定,而且患者的食欲、睡眠均转正常,其有效率达96.77%。 展开更多
关键词 低血压综合症 动物内脏 激素 pbp
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DnaJ类分子伴侣PBP的基因克隆及亚细胞定位研究 被引量:6
13
作者 刘缨 朱美财 +2 位作者 王荫静 占志 刘成刚 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第6期531-534,共4页
目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,... 目的:从人骨骼肌cDNA文库中,分离、鉴定视网膜感光受体外周蛋白的结合蛋白(PBP)-DnaJ(HSP40)类分子伴侣,并初步分析其在转染的哺乳动物细胞中的表达及分布。方法:以33p-dCTP标记探针杂交筛选人骨骼肌cDNA文库,对阳性克隆进行序列分析,并以脂质体介导转染哺乳动物细胞,用免疫印迹及间接免疫荧光染色法检测目的蛋白的表达。结果:筛选出全长pbp基因,经与GenBank中的序列比较分析证实,与DnaJ家族的1个成员-mrj(1.5 kb)的序列相同,且含140 bp左右富含GC的非编码区上游序列。在COS-7细胞 中瞬时表达的PBP,大多呈典型的胞浆分布,而J-domain缺失的pbp片段多为胞核分布。而在CHO细胞中稳定表达的PBP,在处于不同细胞周期时相的细胞中的分布不同。结论:DnaJ除与HSP70(DnaK)协同发挥重要功能外,其本身作为分子伴侣也可能发挥着重要作用,且与细胞周期可能存在某种密切联系。 展开更多
关键词 DnaJ分子伴侣蛋白 基因 转染细胞 外周蛋白结合蛋白
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耐甲氧西林金黄色葡萄球菌PBP2a相互作用蛋白的筛选 被引量:6
14
作者 原薇薇 杨杰 +7 位作者 王冬梅 胡珍 朱军民 陈志瑾 张俊磊 王嘉丽 刘佳 饶贤才 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期749-753,共5页
目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamH... 目的通过建立细菌双杂交技术,筛选MRSA中与PBP2a相互作用的蛋白。方法利用PCR扩增,获得PBP2a蛋白转肽酶活性区(TPase)的编码基因,插入pRBR构建成诱饵质粒pBR-PBP2a。提取MRSA N315株基因组DNA,经Sau3AⅠ部分酶切后连接到pRAC质粒的BamHⅠ位点,获得基因组DNA表达文库;将文库质粒转化入含诱饵质粒pBR-PBP2a的报告菌株KS1,利用细菌双杂交技术进行筛选,获得与诱饵质粒编码的融合蛋白相互作用的猎物,对猎物中编码序列进行DNA测序和生物信息学分析,确定与PBP2a发生相互作用的蛋白质或多肽。结果成功构建了pBR-PBP2a诱饵质粒,可表达PBP2a TPase与大肠埃希菌RNA聚合酶α亚单位N端序列的融合蛋白。所构建的MRSA N315株基因组文库覆盖率达9倍,满足文库筛选的需要。将文库转化含诱饵质粒和报告基因的KS1宿主菌,利用细菌双杂交技术经3次筛选,共获得9个猎物克隆,其报告基因的活性均升高2倍以上,对9个猎物质粒进行了测序,信息学分析表明它们均来自于MRSA N315株基因组,插入片段最长者648 bp,最短者334 bp,9个插入片段中含14个编码基因,其中10个功能未知,1个编码二氢吡啶二羧酸合酶、1个编码二氢吡啶二羧酸还原酶,2个编码染色体解离稳定(SMC)蛋白。9个克隆中介导与PBP2a相互作用的多肽由14~46个氨基酸组成。结论利用细菌双杂交技术从MRSA基因组文库中成功筛选到与PBP2a相互作用的多肽。 展开更多
关键词 基因组DNA文库 pbp2a蛋白 细菌双杂交系统 蛋白质间相互作用
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桃蛀螟性信息素结合蛋白Cpun-PBP1的cDNA克隆、表达谱及其与配体化合物的结合特性分析 被引量:13
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作者 贾小俭 郝少东 +5 位作者 杜艳丽 张民照 覃晓春 王进忠 王海香 冀卫荣 《昆虫学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第11期1167-1176,共10页
【目的】为了更好地了解性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)在桃蛀螟Conogethes punctiferalis(Guenée)嗅觉识别过程中的作用,明确其与配体化合物的结合特性。【方法】本研究利用RT-PCR结合RACE方法克隆了桃蛀螟... 【目的】为了更好地了解性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)在桃蛀螟Conogethes punctiferalis(Guenée)嗅觉识别过程中的作用,明确其与配体化合物的结合特性。【方法】本研究利用RT-PCR结合RACE方法克隆了桃蛀螟一个性信息素结合蛋白基因;采用Real-time PCR方法分析了该蛋白在桃蛀螟不同发育阶段及雌雄蛾间的表达差异;利用荧光竞争结合实验对Cpun-PBP1蛋白与16种配基化合物的结合特性进行了分析。【结果】克隆了一个桃蛀螟性信息素结合蛋白基因,命名为Cpun-PBP1(Gen Bank登录号:KP027486)。Cpun-PBP1开放阅读框全长510 bp,编码169个氨基酸,预测分子量为19.12 k Da,等电点为5.09,N-末端包括由起始位置开始的30个氨基酸组成的信号肽。蛋白特征分析显示,该氨基酸序列具有昆虫气味结合蛋白的典型特征,即含有6个保守的半胱氨酸残基。Cpun-PBP1在桃蛀螟成虫阶段表达量最高,且几乎全部在触角中表达,卵期微量表达,幼虫期和蛹期均不表达。通过构建Cpun-PBP1原核表达载体,诱导并获得Cpun-PBP1重组蛋白。荧光竞争结合实验对2种性信息素组分和14种寄主植物挥发物的结合力发现,Cpun-PBP1不但能有效地与桃蛀螟性信息素组分(顺-10-十六碳烯醛和十六醛)结合,结合常数分别为7.32和9.39μmol/L;还能与8种寄主植物挥发物有效结合;其中,与莰烯的结合能力最强,结合常数为3.76μmol/L。【结论】根据这些结果,我们推测Cpun-PBP1在桃蛀螟感受性信息素和寄主植物挥发物的过程中发挥着双重作用。 展开更多
关键词 桃蛀螟 性信息素结合蛋白 基因克隆 表达谱分析 原核表达 荧光竞争结合
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高表达GFP-PBP1b融合蛋白的猪链球菌菌株的构建及PBP1b蛋白细胞定位的研究 被引量:1
16
作者 武柳君 卫东 +3 位作者 高广娟 陈平 刘思国 张跃灵 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第11期1101-1107,共7页
为鉴定猪链球菌(Streptococcus suis)A型青霉素结合蛋白PBP1b在S.suis中的细胞定位,本研究经PCR扩增S.suis pbp1b基因融合位点上下游序列UP和DN、强启动子Peno基因片段及绿色荧光蛋白(GFP)gfp基因片段,再通过重叠延伸PCR扩增构建融合片... 为鉴定猪链球菌(Streptococcus suis)A型青霉素结合蛋白PBP1b在S.suis中的细胞定位,本研究经PCR扩增S.suis pbp1b基因融合位点上下游序列UP和DN、强启动子Peno基因片段及绿色荧光蛋白(GFP)gfp基因片段,再通过重叠延伸PCR扩增构建融合片段UP-Peno-GFP-DN。利用同源重组的方法将UP-Peno-GFP-DN转化含反向筛选标记的PSS-pbp1b中间菌株,经含7%蔗糖的TSAS平板筛选,挑单菌落进行PCR及测序鉴定。PCR及测序鉴定结果显示,获得的重组菌株中Peno-gfp片段替换了PSS-pbp1b中的PSS片段,表明融合强启动子Peno、GFP及PBP1b(GFP-PBP1b)的重组菌株P-GFP-pbp1b正确构建。以S.suis 05ZYH33株和本实验室前期构建的GFP-pbp1b为对照,培养P-GFP-pbp1b菌株并测定OD600nm值,绘制各菌株的生长曲线;采用western blot检测P-GFP-pbp1b菌株中GFP-PBP1b融合蛋白的表达水平,并与GFP-pbp1b菌株进行比较;利用Alexa Fluor 633-WGA染色,经超高分辨显微镜观察GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株形态及GFP-PBP1b融合蛋白在S.suis细胞中的定位。生长曲线结果显示,S.suis融合菌株GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b均正常生长;western blot结果显示,GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株均能够表达GFP-PBP1b融合蛋白,但强启动子驱动的P-GFP-pbp1b菌株中GFP-PBP1b蛋白表达量较GFP-pbp1b菌株提高了6倍(P<0.01);超高分辨显微镜观察结果显示,GFP-pbp1b和P-GFP-pbp1b菌株形态均正常,GFP-pbp1b菌株中GFP荧光较弱,难以定位GFP-PBP1b,而P-GFP-pbp1b菌株中GFP荧光较强,能够明显观察到融合蛋白GFP-PBP1b定位在S.suis的细胞横隔和两极。本研究通过构建高表达GFP-PBP1b融合蛋白的P-GFP-pbp1b菌株首次观察到PBP1b在S.suis中的细胞定位,为进一步研究PBP1b在S.suis细胞壁肽聚糖合成中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 猪链球菌 荧光蛋白融合菌株 A型青霉素结合蛋白 pbp1b 细胞壁肽聚糖合成
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斜纹夜蛾3种SlitPBPs的组织表达模式分析 被引量:1
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作者 汪超 杨云惠 申建梅 《环境昆虫学报》 CSCD 北大核心 2019年第2期367-372,共6页
性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)能够与性信息素分子结合,从而启动昆虫的寻偶及交配行为。本研究采用半定量RT-PCR技术分别对斜纹夜蛾3种性信息素结合蛋白SlitPBP1、SlitPBP2和SlitPBP3基因在雌、雄虫不同组织的基... 性信息素结合蛋白(pheromone binding proteins,PBPs)能够与性信息素分子结合,从而启动昆虫的寻偶及交配行为。本研究采用半定量RT-PCR技术分别对斜纹夜蛾3种性信息素结合蛋白SlitPBP1、SlitPBP2和SlitPBP3基因在雌、雄虫不同组织的基因表达模式进行了比较分析。组织表达模式结果表明,SlitPBP1基因只在雌、雄虫触角和雌虫前足中表达而在其他组织中无表达;SlitPBP2基因在雌虫的触角、喙、前足、中足、后足、翅膀和雄虫的触角、喙、前足、翅膀中均有表达,且在同一部位,SlitPBP2基因在雌虫的表达量均高于雄虫相应部位的表达量;除雌、雄虫的胸部外,SlitPBP3在雌、雄虫的触角、喙、前足、中足、后足、腹部和翅膀中均有较高水平的表达。可见,SlitPBP1、SlitPBP2和SlitPBP3基因在斜纹夜蛾不同组织的表达模式各不相同。本研究结果可为深入研究不同SlitPBPs蛋白在斜纹夜蛾生长发育过程中的不同生理功能提供科学参考。 展开更多
关键词 斜纹夜蛾 性信息素结合蛋白 表达模式
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钝顶螺旋藻(Sp.-D)藻胆蛋白的提取 被引量:29
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作者 彭卫民 商树田 +2 位作者 刘国琴 傅友兰 吴庆余 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 1999年第6期48-49,共2页
钝顶螺旋藻(Sp.-D)藻胆蛋白的粗提比较方便,用0.001mol/L磷酸盐缓冲液浸提,经反复冻融(三次)处理,可以获得纯度(AλAmax/A280)为0.54的藻胆蛋白粗提液;对粗提液用硫酸铵盐析,可使其纯度略有提高,达到0.59左右,但粗... 钝顶螺旋藻(Sp.-D)藻胆蛋白的粗提比较方便,用0.001mol/L磷酸盐缓冲液浸提,经反复冻融(三次)处理,可以获得纯度(AλAmax/A280)为0.54的藻胆蛋白粗提液;对粗提液用硫酸铵盐析,可使其纯度略有提高,达到0.59左右,但粗提液中藻蓝蛋白(PC)和别藻蓝蛋白(APC)仍未分离开:进一步通过连续两次羟基磷灰石(HA)柱层析纯化之后,藻蓝蛋白(PC)的纯度可达到4.1,别藻蓝蛋白(APC)的纯度可达到3.5。 展开更多
关键词 螺旋藻 提取 钝顶螺旋藻 藻胆蛋白
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藻胆蛋白的分离纯化研究进展 被引量:9
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作者 郑蔚然 丁玉庭 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2008年第4期70-73,共4页
藻胆蛋白(phycobiliprotein,PBP)的生物活性使其具有广泛的应用前景,藻胆蛋白的分离纯化一直是国内外的研究热点。综述了近年来国内外藻胆蛋白的分离纯化进展,主要包括提取原料、细胞破碎法和分离纯化3个方面。
关键词 藻胆蛋白 提取原料 细胞破碎法 分离纯化
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金龟子嗅感器及嗅觉机理的研究进展 被引量:7
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作者 孙凡 王广利 赵奎军 《东北农业大学学报》 CAS CSCD 2007年第3期411-415,共5页
昆虫利用触角上的嗅觉感受器来识别化学信号。金龟子触角的嗅觉感受器为板形感器和锥形感器。与鳞翅目昆虫一样,金龟子嗅感器对化学气味具有选择性,并且雌雄两性间常常存在嗅觉差异。目前金龟子嗅觉信号转导的分子生物学研究也开展起来... 昆虫利用触角上的嗅觉感受器来识别化学信号。金龟子触角的嗅觉感受器为板形感器和锥形感器。与鳞翅目昆虫一样,金龟子嗅感器对化学气味具有选择性,并且雌雄两性间常常存在嗅觉差异。目前金龟子嗅觉信号转导的分子生物学研究也开展起来,已鉴定了多种金龟子的气味结合蛋白(OBP)和信息素结合蛋白(PBP),同一类群金龟子的PBPs相互之间同源性很高。 展开更多
关键词 金龟子 嗅感器 OBP pbp 气味降解酶
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