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利用不同方法检测RNAi抑制人pescadillo基因的表达
被引量：
3
1
作者
李杰萍
张浩
+5 位作者
杨树兴
丁丽华
王晓辉
杨智洪
王朝云
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期1064-1065,共2页
目的:构建人pescadillo(PES1)基因siRNA的真核表达载体,观察其对PES1表达的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成了2条针对PES1基因的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上。分别用以下3种方法检测RNAi的抑制效果...
目的:构建人pescadillo(PES1)基因siRNA的真核表达载体,观察其对PES1表达的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成了2条针对PES1基因的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上。分别用以下3种方法检测RNAi的抑制效果:(1)将RNAi重组质粒和带FLAG标签的PES1共转染293T人胚肾细胞,用FLAG抗体进行Western blot;(2)将RNAi重组质粒和带GFP标签的PES1共转染293T细胞,用荧光显微镜观察GFP的亮度;(3)在293T细胞中仅转染小干扰RNA(siRNA)重组质粒,用PES1抗体进行Western blot分析。结果:测序证明,成功构建了PES1siRNA真核表达载体。通过Western blot实验证明,构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性PES1基因表达;荧光显微镜检查发现siRNA能明显减弱细胞中荧光强度,抑制PES1的表达。结论:成功地构建了PES1siRNA的真核表达载体,利用3种不同方法均证明该siRNA能有效地抑制PES1基因的表达。
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关键词
pescadillo
RNAI
基因表达
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职称材料
制备单克隆抗体检测PES1的表达
被引量：
1
2
作者
李杰萍
庄庆仁
+3 位作者
兰小鹏
曾国彬
罗小锋
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期174-176,180,共4页
目的:制备PES1单克隆抗体(mAb)并用所制备的抗体检测PES1在多种肿瘤细胞中的表达及其在成年大鼠不同组织中的表达分布。方法:纯化GST-PES1(1-322aa)融合蛋白后注入小鼠进行免疫,经过细胞融合、筛选以及用Western blot进行特异性鉴定后获...
目的:制备PES1单克隆抗体(mAb)并用所制备的抗体检测PES1在多种肿瘤细胞中的表达及其在成年大鼠不同组织中的表达分布。方法:纯化GST-PES1(1-322aa)融合蛋白后注入小鼠进行免疫,经过细胞融合、筛选以及用Western blot进行特异性鉴定后获得mAb。再用制备的mAb检测PES1在不同的人肿瘤细胞和大鼠不同组织中的表达。结果:所制备的PES1 mAb能特异地识别PES1。用所制备的mAb检测发现,在所检测的人乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及肺癌等细胞中均有不同程度的表达;PES1类似物pescadillo在大鼠的乳腺和卵巢组织中表达,但在其他组织中没有被检测到。结论:成功地制备了PES1的mAb。PES1可能与肿瘤的发生发展有一定的关系;由于PES1明显表达于雌激素重要的靶器官,所以可能参与雌激素信号通路。
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关键词
PES1
单克隆抗体
基因表达
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职称材料
题名
利用不同方法检测RNAi抑制人pescadillo基因的表达
被引量：
3
1
作者
李杰萍
张浩
杨树兴
丁丽华
王晓辉
杨智洪
王朝云
叶棋浓
机构
军事医学科学院生物工程研究所
承德市双桥区卫生局
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第11期1064-1065,共2页
基金
国家杰出青年科学基金资助项目(30625035)
国家自然科学基金资助项目(30530320
30500191)
文摘
目的:构建人pescadillo(PES1)基因siRNA的真核表达载体,观察其对PES1表达的影响。方法:利用RNA干扰(RNAi)技术,设计并合成了2条针对PES1基因的siRNA,将其克隆到siRNA表达载体pSliencer2.1-U6neo上。分别用以下3种方法检测RNAi的抑制效果:(1)将RNAi重组质粒和带FLAG标签的PES1共转染293T人胚肾细胞,用FLAG抗体进行Western blot;(2)将RNAi重组质粒和带GFP标签的PES1共转染293T细胞,用荧光显微镜观察GFP的亮度;(3)在293T细胞中仅转染小干扰RNA(siRNA)重组质粒,用PES1抗体进行Western blot分析。结果:测序证明,成功构建了PES1siRNA真核表达载体。通过Western blot实验证明,构建的siRNA能有效抑制外源性及内源性PES1基因表达;荧光显微镜检查发现siRNA能明显减弱细胞中荧光强度,抑制PES1的表达。结论:成功地构建了PES1siRNA的真核表达载体,利用3种不同方法均证明该siRNA能有效地抑制PES1基因的表达。
关键词
pescadillo
RNAI
基因表达
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
制备单克隆抗体检测PES1的表达
被引量：
1
2
作者
李杰萍
庄庆仁
兰小鹏
曾国彬
罗小锋
叶棋浓
机构
武警福建总队医院检验科
南京军区福州总医院检验医学研究所
出处
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期174-176,180,共4页
基金
福建省社会发展重点项目(2010Y0048)
福建省自然科学基金资助项目(2010J05082)
文摘
目的:制备PES1单克隆抗体(mAb)并用所制备的抗体检测PES1在多种肿瘤细胞中的表达及其在成年大鼠不同组织中的表达分布。方法:纯化GST-PES1(1-322aa)融合蛋白后注入小鼠进行免疫,经过细胞融合、筛选以及用Western blot进行特异性鉴定后获得mAb。再用制备的mAb检测PES1在不同的人肿瘤细胞和大鼠不同组织中的表达。结果:所制备的PES1 mAb能特异地识别PES1。用所制备的mAb检测发现,在所检测的人乳腺癌、卵巢癌、肝癌以及肺癌等细胞中均有不同程度的表达;PES1类似物pescadillo在大鼠的乳腺和卵巢组织中表达,但在其他组织中没有被检测到。结论:成功地制备了PES1的mAb。PES1可能与肿瘤的发生发展有一定的关系;由于PES1明显表达于雌激素重要的靶器官,所以可能参与雌激素信号通路。
关键词
PES1
单克隆抗体
基因表达
Keywords
pescadillo
monoclonal antibody
gene expression
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用不同方法检测RNAi抑制人pescadillo基因的表达
李杰萍
张浩
杨树兴
丁丽华
王晓辉
杨智洪
王朝云
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2007
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
制备单克隆抗体检测PES1的表达
李杰萍
庄庆仁
兰小鹏
曾国彬
罗小锋
叶棋浓
《细胞与分子免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2012
1
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