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蛋白激发子PeaT1的高密度发酵及生理功能检测 被引量:3
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作者 刘权 李广悦 +2 位作者 曾洪梅 杨秀芬 邱德文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第8期162-165,共4页
PeaT1是从极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)中提取出的一种植物蛋白激发子,具有促进植物生长,增强作物抗逆性的功能。由于该蛋白具有无残留、无毒副作用的优点,因此具有发展为生物农药的应用前景。在100L发酵罐中利用分批补料技术对... PeaT1是从极细链格孢菌(Alternaria tenuissima)中提取出的一种植物蛋白激发子,具有促进植物生长,增强作物抗逆性的功能。由于该蛋白具有无残留、无毒副作用的优点,因此具有发展为生物农药的应用前景。在100L发酵罐中利用分批补料技术对PeaT1工程菌进行高密度发酵,通过AKTA蛋白纯化仪对发酵产物进行了亲和纯化,并检测了纯化所得蛋白对水稻在15℃低温下生长的影响。发酵最终菌体密度达80g/L,每升菌液纯化得到蛋白90mg,纯化所得蛋白能够促进水稻低温下的生长,具有激发子活性。 展开更多
关键词 蛋白激发子 peat1 高密度发酵 低温
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极细链格孢菌蛋白激发子Peat1在酵母双杂交系统中转录激活活性检测 被引量:4
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作者 刘延锋 邱德文 +1 位作者 曾洪梅 杨秀芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8500-8501,共2页
以PCR法从pGEX-6p-1-peaT1中扩增出peaT1基因片段,电泳回收后将peaT1基因定向克隆到plexA载体中。将诱饵载体plexA-peaT1经酶切和测序鉴定后,用PEG/LiAC法转化酵母EGY48[p8op-lacZ],并进行诱饵载体转录激活活性检测。结果表明,重组质粒... 以PCR法从pGEX-6p-1-peaT1中扩增出peaT1基因片段,电泳回收后将peaT1基因定向克隆到plexA载体中。将诱饵载体plexA-peaT1经酶切和测序鉴定后,用PEG/LiAC法转化酵母EGY48[p8op-lacZ],并进行诱饵载体转录激活活性检测。结果表明,重组质粒经EcoR I和XhoⅠ双酶切后,琼脂糖凝胶电泳检测可见2条与预期相符的条带,表明诱饵载体构建成功。β-半乳糖苷酶活性分析表明,诱饵载体plexA-peat1无转录激活活性,对酵母菌株也无毒害作用。该诱饵载体可用于酵母双杂交系统中,为下一步筛选cDNA文库奠定了基础。 展开更多
关键词 peat1 酵母双杂交 转录激活活性
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蛋白激发子基因peaT1植物表达载体的构建及其转化棉花的研究 被引量:1
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作者 唐宏琨 曾洪梅 +2 位作者 杨秀芬 袁京京 邱德文 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期43-47,共5页
[目的]构建蛋白激发子基因peaT1的植物表达载体并转化棉花品种‘CCRI24’。[方法]设计含有PstⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,以质粒pET28a-peaT1为模板扩增得到peaT1序列,将其通过中间载体pG4AS-cup克隆到植物表达载体pCAMBIA2300上,通过农... [目的]构建蛋白激发子基因peaT1的植物表达载体并转化棉花品种‘CCRI24’。[方法]设计含有PstⅠ和XhoⅠ酶切位点的引物,以质粒pET28a-peaT1为模板扩增得到peaT1序列,将其通过中间载体pG4AS-cup克隆到植物表达载体pCAMBIA2300上,通过农杆菌介导法转化棉花品种‘CCRI24’,诱导并筛选抗性愈伤和胚性愈伤,通过PCRs、outhern杂交和RT-PCR检测筛选的棉株。[结果]构建了含有增强子和多联终止子的植物表达载体pCAMBIA2300-peaT1,获得了大量的胚状体和4棵再生苗并嫁接成活,验证了蛋白激发子基因peaT1已经整合到再生苗2和4基因组当中。[结论]本研究为进一步开展蛋白激发子基因peaT1转化棉花的研究提供了基础材料。 展开更多
关键词 蛋白激发子 peat1 农杆菌 转化 棉花
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蛋白激发子基因peaT1转基因棉花的获得及初步鉴定 被引量:1
4
作者 唐宏琨 曾洪梅 +4 位作者 杨秀芬 李国媛 盛德鹏 袁京京 邱德文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第1期60-64,共5页
将来源于极细链格孢菌的蛋白激发子基因peaT1克隆到植物表达载体pCAMBIA2300上,成功构建了含有增强子和多联终止子的植物表达载体pCAMBIA2300-G4AS-peaT1。通过花粉管通道法转化棉花,经卡那霉素抗性筛选、PCR和RT-PCR检测获得一株转基... 将来源于极细链格孢菌的蛋白激发子基因peaT1克隆到植物表达载体pCAMBIA2300上,成功构建了含有增强子和多联终止子的植物表达载体pCAMBIA2300-G4AS-peaT1。通过花粉管通道法转化棉花,经卡那霉素抗性筛选、PCR和RT-PCR检测获得一株转基因棉花植株,其植株茎粗和成铃数均高于非转基因对照株。 展开更多
关键词 蛋白激发子 peat1 花粉管通道 棉花
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激发子基因peaT1转化三生烟及其对TMV抗性的提高
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作者 唐宏琨 曾洪梅 +1 位作者 杨秀芬 邱德文 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期116-119,134,共5页
通过根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)介导转化法,将含有激发子基因peaT1的植物表达载体pCAM-BIA2300-G4AS-peaT1转化三生烟,获得了转基因烟草植株。用PCR检测确认了阳性转化株,用Southern杂交、RT-PCR和Western杂交进一步证实了pe... 通过根癌农杆菌(Agrobactrium tumefaciens)介导转化法,将含有激发子基因peaT1的植物表达载体pCAM-BIA2300-G4AS-peaT1转化三生烟,获得了转基因烟草植株。用PCR检测确认了阳性转化株,用Southern杂交、RT-PCR和Western杂交进一步证实了peaT1基因的整合、转录和表达。对T1代转基因阳性株进行TMV接种试验,结果显示,与非转基因对照相比,表达peaT1的烟草叶片枯斑数量减少,表明蛋白激发子基因peaT1的表达提高了转基因烟草对TMV的抗性。 展开更多
关键词 激发子 peat1基因 烟草 转化TMV
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Peat1蛋白及其3个缺失突变体的表达与热稳定性分析
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作者 李明勇 邱德文 +1 位作者 曾洪梅 杨秀芬 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2008年第20期8482-8483,8534,共3页
[目的]为揭示Peat1蛋白序列(含1个NAC结构域和1个UBA结构域)各片段在该蛋白热稳定性上的作用。[方法]构建了Peat1蛋白及其3个缺失突变体的融合表达载体,经IPTG诱导表达的目标蛋白,对所得蛋白经AKTA亲和纯化和热稳定性分析。[结果]与Peat... [目的]为揭示Peat1蛋白序列(含1个NAC结构域和1个UBA结构域)各片段在该蛋白热稳定性上的作用。[方法]构建了Peat1蛋白及其3个缺失突变体的融合表达载体,经IPTG诱导表达的目标蛋白,对所得蛋白经AKTA亲和纯化和热稳定性分析。[结果]与Peat1一样,3个缺失突变体蛋白(Peat1、Peat1-△CD99、Peat1-△ND49和Peat1-△ND108)都具有良好的热稳定性。[结论]说明NAC或UBA结构域对Peat1蛋白的热稳定性不是同时必需的,可能它们都有单独赋予蛋白某种特殊稳定结构的作用。 展开更多
关键词 peat1 缺失突变 热稳定性
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