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利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究
被引量：
7
1
作者
张玉兰
柯晓静
+4 位作者
郭红敏
谷新晰
田洪涛
郭兴华
罗云波
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期71-76,共6页
为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养...
为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。
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关键词
乳酸乳球菌ML23
组成型
表达
载体
质粒
pmg
36
e
电转化
电转化效率
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职称材料
SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达
被引量：
2
2
作者
潘伟芹
于建宁
+3 位作者
王公金
徐小波
于峰祥
李燕
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2012年第1期131-134,共4页
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连...
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到。因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。
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关键词
SQR
pmg
36
e
乳酸菌
重组
载体
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职称材料
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
被引量：
17
3
作者
格日勒图
王艳霞
+2 位作者
包秋华
代兄
张和平
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009年第2期9-13,共5页
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长...
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。
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关键词
干酪乳杆菌
电转化
外源性质粒
pmg
36
e
(
表达
载体
红霉素抗性)
pmg
36
c(克隆
载体
氯霉素抗性)
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职称材料
题名
利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究
被引量：
7
1
作者
张玉兰
柯晓静
郭红敏
谷新晰
田洪涛
郭兴华
罗云波
机构
河北农业大学食品科技学院
河北农业大学研究生学院
中国科学院微生物研究所
中国农业大学食品科技与营养工程学院
出处
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第4期71-76,共6页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)项目(2006AA10Z317)
文摘
为了探明乳酸菌电转化的最适条件,提高电转化效率,本试验以大肠杆菌-乳酸菌穿梭型质粒pMG36e为载体,以乳酸乳球菌ML23为受体,利用电转化方法研究了受体菌株的生长状态与细胞壁处理方式、质粒浓度、电场强度、复苏培养基组成与复苏培养时间、受体菌株的限制修饰作用对电转化效率的影响。结果表明:含2%甘氨酸和0.5 mol/L蔗糖的MRS培养基培养至对数生长中期的细胞,在电场强度11.0 kV/cm、电阻200Ω、电容25μF下电击转化,转化后细胞在SMRS培养基中培养2 h,获得了较高的电转化效率。采用受体菌株修饰的质粒进行电转化,转化效率又提高了15倍以上,达1.05×105CFU/μg DNA。
关键词
乳酸乳球菌ML23
组成型
表达
载体
质粒
pmg
36
e
电转化
电转化效率
Keywords
Lactococcus lactis ML23
constitutiv
e
e
xpr
e
ssion v
e
ctor
plasmid
pmg
36
e
e
l
e
ctroporation
e
l
e
ctroporation
e
ffici
e
ncy
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达
被引量：
2
2
作者
潘伟芹
于建宁
王公金
徐小波
于峰祥
李燕
机构
南京师范大学医学分子生物学重点实验室
江苏省农业科学院畜牧研究所
出处
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2012年第1期131-134,共4页
基金
江苏省农业科技自主创新基金项目[CX(10)421]
农业部转基因生物新品种培育重大专项(2011ZX08006-004)
文摘
为了研究硫化物-醌氧化还原酶(SQR)基因的乳酸菌表达载体pMG36e-SQR-Myc的构建及其在大肠杆菌DH5a和乳酸菌MG1363中的表达,通过限制性内切酶酶切大肠杆菌-乳酸菌穿梭表达载体pMG36e与目的片段SQR-Myc,回收纯化并用T4连接酶进行连接,连接产物通过KCM法转化到大肠杆菌DH5a中,提取所得到阳性大肠杆菌菌株质粒pMG36e-SQR-Myc进行双酶切鉴定与普通PCR鉴定;并通过电转化将重组质粒导入乳酸菌MG1363中,采用SDS-PAGE电泳和Western-blotting检测SQR蛋白质在其中的表达情况。结果显示,SQR乳酸菌重组表达载体pMG36e-SQR-Myc被成功构建,目的蛋白质SQR在大肠杆菌和乳酸菌MG1363中被成功检测到。因此,乳酸菌MG1363可以用来表达硫化物-醌氧化还原酶(SQR)。
关键词
SQR
pmg
36
e
乳酸菌
重组
载体
Keywords
SQR
pmg
36
e
lactic acid bact
e
rium
r
e
combinant v
e
ctor
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
被引量：
17
3
作者
格日勒图
王艳霞
包秋华
代兄
张和平
机构
内蒙古农业大学乳品生物技术与工程教育部重点实验室
出处
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009年第2期9-13,共5页
基金
内蒙古农业大学"中国博士后流动站"项目(No.57545)
国家高技术研究发展计划(863计划
+1 种基金
N0.2006AA10Z345
2007AA10Z353)
文摘
以pMG36e,pMG36c和已消除内源性质粒的干酪乳杆菌(L.casei Zhang)为材料,在不同参数下进行电转化实验并建立最佳实验条件。结果表明:最佳电转化电压为1.5 kV,时间为2.0 ms。pMG36c转化不同对数生长期L.casei Zhang时,发现转化对数生长中期菌体获得的转化子数最高,而转化效率不是最高;转化生长初期获得的转化子数为4.04×106 mL-1,电转化效率为89.78%;后期则为1.6×107 mL-1和4.0%。磷酸钠作电击缓冲液获得的转化子数高于体积分数为10%甘油获得的转化子数。复苏培养基甘氨酸质量分数为0.5%时得到的转化子数最高,转化效率为35.56%;当甘氨酸质量分数增加到1%时得到的转化子数和转化效率分别下降到5.6×106 mL-1和6.22%,甘氨酸质量分数为2%时得到的转化子数和转化效率更低;不同质粒转化L.casei Zhang时,pMG36c转化获得的转化子数高于pMG36e转化子数。选择pMG36e转化L.casei Zhang的转化子为模板,通过PCR反应已证实转化试验的可靠性。本研究为外源基因电转化干酪乳酸菌提供了可靠的参考依据。
关键词
干酪乳杆菌
电转化
外源性质粒
pmg
36
e
(
表达
载体
红霉素抗性)
pmg
36
c(克隆
载体
氯霉素抗性)
Keywords
Lactobacillus cas
e
i,
e
l
e
ctroporation,
e
xog
e
n
e
ous Plasmid,
pmg
36
c,
pmg
36
e
分类号
Q813 [生物学—生物工程]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
利用组成型表达载体pMG36e电转化乳酸乳球菌ML23的研究
张玉兰
柯晓静
郭红敏
谷新晰
田洪涛
郭兴华
罗云波
《河北农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
7
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
SQR基因在大肠杆菌和乳酸菌中的表达
潘伟芹
于建宁
王公金
徐小波
于峰祥
李燕
《江苏农业学报》
CSCD
北大核心
2012
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
电转化方法将外源性质粒导入干酪乳杆菌的研究
格日勒图
王艳霞
包秋华
代兄
张和平
《中国乳品工业》
CAS
北大核心
2009
17
在线阅读
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职称材料
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