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pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达被引量：5: 1; 作者刘军肖颂华 +2 位作者陶恩祥邢诒刚梁秀龄《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期255-257,I001,共4页; 目的将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴... 展开更多; 关键词 pCDNA3-AADC真核表达载体构建原代培养骨骼肌细胞芳香族氨基酸脱羧酶免疫印记帕金森病; 在线阅读下载PDF 职称材料

HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达: 2; 作者杨军刘妮 +5 位作者卫阳靳耀锋王军宁康安静苏宝山李宗芳《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第11期845-848,共4页; 目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PC... 展开更多; 关键词肝炎病毒乙型肝炎e抗原乙型 PCDNA3 1(+)真核表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达被引量：1: 3; 作者李淑萍孙世琪 +2 位作者莫亚霞胡永浩郭慧琛《动物医学进展》北大核心 2019年第1期1-6,共6页; 为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3... 展开更多; 关键词口蹄疫病毒重组真核表达载体 pVAX-VP0VP1VP3构建和表达病毒样颗粒; 在线阅读下载PDF 职称材料

转人抑癌基因p53鸡的研究: 4; 作者李鹏姗雷雪芹 +7 位作者徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第7期54-61,共8页; 【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电... 展开更多; 关键词重组真核表达载体 HEP3B 转基因鸡 P53基因转染率世代遗传率; 在线阅读下载PDF 职称材料

细胞自身分化抗原-1启动子区域的克隆及其特性分析被引量：1: 5; 作者韩淑华陈丽萍迟宝荣《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期420-424,共5页; 目的:克隆不同长度的细胞自身分化抗原-1(CDA1)启动子区域并测定它们的活性,为进一步研究不同长度细胞自身分化抗原-1启动子(CDA1P)区域的功能打下基础。方法:以小鼠肝脏的全基因序列为模板,用PCR方法获得不同长度的目的片段,连接到pGL3... 展开更多; 关键词细胞自身分化抗原-1 启动子 pgl3-basic真核表达载体; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达被引量：5: 1; 作者刘军肖颂华陶恩祥邢诒刚梁秀龄; 机构中山大学孙逸仙纪念医院神经科中山大学附属第一医院神经科; 出处《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期255-257,I001,共4页; 基金广东省自然科学基金资助项目(编号:970072) 中山医科大学"211工程"重点学科资助项目(编号:199903); 文摘目的将人类神经元性芳香族氨基酸脱羧酶（AADC）基因构建于含CMV启动子的真核表达载体pCD-NA3上,并检测其在原代培养骨骼肌细胞中的表达。方法采用分子克隆技术将经测序证实的人神经元性AADC基因片段同真核表达载体pCDNA3连接,酶切鉴定并筛选出正向连接重组体,并采用脂质体转染法将其导入原代培养的骨骼肌细胞,免疫印记检测该基因的表达。结果酶切证实基因片断正向连接于pCDNA3上,并在原代骨骼肌细胞中获得表达。结论含人类神经元AADC基因的真核表达重组体可在原代培养的骨骼肌细胞中有效的表达。; 关键词 pCDNA3-AADC真核表达载体构建原代培养骨骼肌细胞芳香族氨基酸脱羧酶免疫印记帕金森病; Keywords Aromatic L-amino acid decarboxylase pCDNA3-AADC expression vector Western blot Skeletal muscle cells; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达: 2; 作者杨军刘妮卫阳靳耀锋王军宁康安静苏宝山李宗芳; 机构西安交通大学医学院第二附属医院病理科西安交通大学医学院第二附属医院科研实验中心西安交通大学医学院第二附属医院外科; 出处《临床肝胆病杂志》 CAS 2012年第11期845-848,共4页; 基金陕西省科技统筹创新工程计划项目(2011KTCL03-14) 教育部新教师基金(编号:2007-0698106) 教育部新世纪优秀人才计划(编号:NCET-10-0647); 文摘目的克隆HBeAg基因,构建重组HBeAg真核表达载体,并在中国仓鼠卵巢细胞(CHO细胞)中进行表达。方法采用PCR法从HBeAg阳性乙型肝炎患者血清HBV DNA中扩增HBeAg基因,克隆入pcDNA3.1(+)真核表达载体中,构建重组pcDNA-HBeAg真核表达载体,经PCR、双酶切、测序鉴定后,将其转染入CHO细胞,G418筛选,用PCR、免疫斑点、Western Blot、免疫细胞化学方法检测HBeAg在CHO细胞中的表达。结果成功克隆到HBeAg基因,并构建了重组pcDNA-HBeAg真核表达载体;基因测序证实克隆的HBeAg基因中共有12个位点发生单碱基置换突变(C1819G,A2007T,C2046T,C2061G,G2106A,C2109A,C2146T,T2172C,C2203T,A2235G,G2253A,C2298T),1个位点发生缺失突变(2346 del T);成熟HBeAg蛋白中149位缬氨酸(valine,V)突变为苯丙氨酸(phenylalanine,F)(V149F),在HBeAg蛋白羧基端融合有一段长11个氨基酸的多肽(RLESRGPVZTR)。PCR、免疫斑点、Western Blot和免疫细胞化学方法证实重组pcDNA-HBeAg真核表达载体可在CHO细胞中表达分泌型HBeAg蛋白。结论重组HBeAg真核表达载体的构建和表达为HBeAg的临床诊断和深入研究提供了条件。; 关键词肝炎病毒乙型肝炎e抗原乙型 PCDNA3 1(+)真核表达载体; Keywords hepatitis B virus hepatitis B e antigen pcDNA3.1（＋） eukaryotic expression vector; 分类号 R512.62 [医药卫生—内科学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达被引量：1: 3; 作者李淑萍孙世琪莫亚霞胡永浩郭慧琛; 机构甘肃农业大学动物医学院中国农业科学院兰州兽医研究所家畜疾病病原生物学国家重点实验室OIE/国家口蹄疫参考实验室; 出处《动物医学进展》北大核心 2019年第1期1-6,共6页; 基金动物重大疫病新概念防控产品研发项目(2017YFD0501100) 牛羊重要疫病免疫防控新技术研究项目(2017YFD0500900); 文摘为了构建O型口蹄疫病毒(FMDV)病毒样颗粒编码基因的真核表达载体,将FMDV结构蛋白VP0、VP1、VP3的基因分别克隆到真核表达载体pVAX1中,再分别通过带有BsmBⅠ、EcoRⅠ和SalⅠ酶切位点的引物,分别对重组质粒pVAX-VP0、pVAX-VP1和pVAX-VP3扩增后进行酶切,用T4连接酶连接得到重组的真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3。对重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3进行PCR鉴定并测序。用脂质体将重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3转染BHK-21细胞,用间接免疫荧光试验(IFA)及Western blot检测重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3在细胞中的表达情况。结果表明,成功构建了重组真核表达载体pVAX-VP0VP1VP3,并在BHK-21细胞中得到表达。; 关键词口蹄疫病毒重组真核表达载体 pVAX-VP0VP1VP3构建和表达病毒样颗粒; Keywords Foot-and-mouth disease virus recombinant eukaryotic expression vector construction and expression of pVAX-VP0VP1VP3 virus-like particle; 分类号 S852.659.6 [农业科学—基础兽医学] Q789 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名转人抑癌基因p53鸡的研究: 4; 作者李鹏姗雷雪芹徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂; 机构河南科技大学动物科技学院河南科技大学第一附属医院洛阳师范学院生命科学学院河南科技学院动物科技学院全军肛肠外科研究所; 出处《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2019年第7期54-61,共8页; 基金河南省基础与前沿技术研究计划项目(072300430010) 洛阳市重点科技攻关计划项目(1101033A); 文摘【目的】探索MAR调控序列对外源人抑癌基因p53在转基因鸡体内整合稳定性的影响,为转基因禽类输卵管生物反应器的建立奠定基础。【方法】利用脂质体包埋法,将pEGFP-N1-p53/MAR重组真核表达载体转染人肝癌细胞(Hep3B),荧光显微镜和透射电镜检测转染含人野生型p53基因的Hep3B细胞形态及超微观结构的变化情况;显微注射法将脂质体介导的重组载体注入鸡X期胚盘的明区和暗区,制备G0代转基因鸡。以EGFP为报告基因,人工授精法制备G1代转基因鸡,对G0代和G1代鸡体外源基因p53进行PCR检测,并对G1代转基因鸡进行小动物活体成像检测。【结果】转染含人p53基因重组载体的Hep3B细胞明显皱缩变圆;微观结构层面,粗面内质网不明显,线粒体肿胀,细胞核中异染色质边集明显,并出现凋亡小体。G0代转基因鸡暗区组孵化率(45%)显著高于明区组孵化率(0)(P<0.05),但均显著低于对照组孵化率(82.5%)(P<0.05);获得4只基因组中含有外源p53基因的G0代转基因鸡,外源基因转染率为22.2%(4/18);获得2只G1代转基因鸡,转基因世代遗传率为3.08%(2/65)。【结论】重组真核表达载体pEGFP-N1-p53/MAR可以促进人肝癌细胞Hep3B的凋亡;脂质体介导的含MAR序列调控元件的pEGFP-N1-p53/MAR质粒,可以提高p53在转基因鸡基因组中的整合稳定性,并可遗传给后代。; 关键词重组真核表达载体 HEP3B 转基因鸡 P53基因转染率世代遗传率; Keywords recombinant eukaryotic expression vector Hep3B transgenic chicken p53 gene transfection rate heritability of generation; 分类号 S831.2 [农业科学—畜牧学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

题名细胞自身分化抗原-1启动子区域的克隆及其特性分析被引量：1: 5; 作者韩淑华陈丽萍迟宝荣; 机构东南大学中大医院呼吸内科吉林大学第一医院电诊科; 出处《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期420-424,共5页; 基金中国-澳大利亚政府互换项目奖学金资助课题(留金出号22822062); 文摘目的:克隆不同长度的细胞自身分化抗原-1(CDA1)启动子区域并测定它们的活性,为进一步研究不同长度细胞自身分化抗原-1启动子(CDA1P)区域的功能打下基础。方法:以小鼠肝脏的全基因序列为模板,用PCR方法获得不同长度的目的片段,连接到pGL3-basic真核表达载体(pGL3-basic-mCDA1P),纯化pGL3-basic mCDA1P质粒后,瞬时转染到Leuwis肺癌细胞和单核巨噬细胞(RAW264.7),48 h后收集转染细胞,测定萤光素酶活性,明确不同长度的CDA1P的活性。结果:①通过PCR法成功获得不同长度的CDA1PDNA片段,并用酶切法证实;②成功构建携带有CDA1P的pGL3-basic真核表达载体,并通过酶切法及测序证实;③转染Leuwis肺癌细胞和单核巨噬细胞后测定萤光素酶活性发现不同长度的CDA1P活性不同,相同长度的CDA1P在Leuwis肺癌细胞和单核巨噬细胞中活性亦不相同。结论:CDA1P在不同细胞中活性可能存在差异。; 关键词细胞自身分化抗原-1 启动子 pgl3-basic真核表达载体; Keywords cell division autoantigen-1 promoter pgl3-basic plasmid; 分类号 Q78 [生物学—分子生物学]; 在线阅读下载PDF 职称材料

	题名	作者	出处	发文年	被引量	操作
1	pCDNA3-AADC真核表达载体的构建及其在原代培养骨骼肌细胞中的表达	刘军肖颂华陶恩祥邢诒刚梁秀龄	《中国神经精神疾病杂志》 CAS CSCD 北大核心	2002	5	在线阅读下载PDF 职称材料
2	HBeAg真核表达载体的构建及其在中国仓鼠卵巢细胞中的表达	杨军刘妮卫阳靳耀锋王军宁康安静苏宝山李宗芳	《临床肝胆病杂志》 CAS	2012	0	在线阅读下载PDF 职称材料
3	O型口蹄疫病毒样颗粒编码基因的真核表达载体构建及表达	李淑萍孙世琪莫亚霞胡永浩郭慧琛	《动物医学进展》北大核心	2019	1	在线阅读下载PDF 职称材料
4	转人抑癌基因p53鸡的研究	李鹏姗雷雪芹徐廷生王攀林宋祯李振红史明艳韦光辉张广平李俊堂	《西北农林科技大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心	2019	0	在线阅读下载PDF 职称材料
5	细胞自身分化抗原-1启动子区域的克隆及其特性分析	韩淑华陈丽萍迟宝荣	《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心	2008	1	在线阅读下载PDF 职称材料