目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,...目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因展开更多
文摘目的 :克隆小鼠分泌型内皮抑素 (s Endostatin) c DNA,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,检测重组质粒在 B1 6细胞中的表达。方法 :用 RT-PCR方法从鼠肝脏中扩增出内皮抑素 c DNA,经测序证实后 ,连入信号肽 ,构建 p CMV-分泌型内皮抑素和 p Egr-分泌型内皮抑素重组质粒 ,以脂质体转染小鼠 B1 6细胞 ,用 Western blot方法检测 B1 6细胞上清中内皮抑素的表达。结果 :测序表明扩增的分泌型内皮抑素序列与报道完全一致 ,Egr-1启动子和分泌型内皮抑素 c DNA正确插入表达载体 pc DNA3 .1 ,Western blot证实转染 B1 6细胞上清中有目的蛋白表达。结论 :小鼠内皮抑素基因成功地被克隆和表达 ,为今后检测 p Egr-分泌型内皮抑素的辐射诱导表达和恶性肿瘤的基因
