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重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达
1
作者
李文秀
周凤云
+4 位作者
毛伟平
潘杨滨
何志娟
徐翀
刘宣宣
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2011年第2期45-47,共3页
构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外...
构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。
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关键词
ICOS
JURKAT细胞
pet-28a质粒
重叠延伸PCR
原核表达
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职称材料
题名
重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达
1
作者
李文秀
周凤云
毛伟平
潘杨滨
何志娟
徐翀
刘宣宣
机构
南京师范大学生命科学学院/江苏省分子医学重点实验室
出处
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2011年第2期45-47,共3页
基金
江苏省教育厅自然科学基金(编号:08KJD350002)
文摘
构建重组人ICOS胞外区原核表达载体,并进行初步表达。根据GenBank基因库中ICOS胞外区基因序列设计引物,用RT-PCR法从人T淋巴瘤细胞Jurkat的总mRNA中扩增出ICOS胞外区基因并运用重叠延伸PCR技术扩增出ICOS胞外区同源二聚体,并将ICOS胞外区同源二聚体插入到原核表达载体PET-28a中,并对重组质粒进行鉴定。转化E.coliBL21,IPTG诱导表达目的蛋白。结果获得ICOS胞外区同源二聚体基因大小为757 bp,构建的重组表达载体中目的基因序列完全正确。IPTG诱导表达后,SDS-PAGE分析表明目的蛋白在E.coliBL21(DE3)中高效表达,相对分子质量约为31 ku。这说明成功地构建人重组ICOS胞外区同源二聚体的原核表达载体,并实现在大肠杆菌中大量表达。为下一步蛋白纯化及制备抗ICOS单克隆抗体奠定了基础。
关键词
ICOS
JURKAT细胞
pet-28a质粒
重叠延伸PCR
原核表达
分类号
Q785 [生物学—分子生物学]
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题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
重组人ICOS胞外区原核表达载体的构建及表达
李文秀
周凤云
毛伟平
潘杨滨
何志娟
徐翀
刘宣宣
《江苏农业科学》
CSCD
北大核心
2011
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