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人β_2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化
被引量：
3
1
作者
朴文花
张恒辉
+4 位作者
何豫
朴桂花
许文燮
李在琉
王贵强
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期99-101,共3页
目的 :构建人 β2-microglobulin( β2- M)基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中高效表达 β2 -M蛋白质并进行纯化 ,为构建MHC 肽四聚体奠定基础。方法 :从人外周血单核细胞中提取总RNA ,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的 β2-M基因 ...
目的 :构建人 β2-microglobulin( β2- M)基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中高效表达 β2 -M蛋白质并进行纯化 ,为构建MHC 肽四聚体奠定基础。方法 :从人外周血单核细胞中提取总RNA ,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的 β2-M基因 ,克隆入pET-2 2b( + )表达载体进行诱导表达。采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化 ,用ELISA和West ernblot法进行免疫学鉴定。结果 :成功地构建了表达载体pET-2 2b( + )- β2-M ,对表达产物进行了纯化 ,并对表达产物进行了鉴定。结论 :获得 β2- M蛋白的高效表达 。
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关键词
Β2-M
pet-
22
b
(+)载体
表达
纯化
四聚体
在线阅读
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职称材料
人BMP4基因的克隆及其原核表达载体的构建
2
作者
刘秋英
陈伟
+4 位作者
毛国梁
熊盛
钱垂文
利奕成
王一飞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期90-92,共3页
以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒。酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子。重...
以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒。酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子。重组质粒转化至感受态的Rosseta宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,从胎盘组织中成功地克隆到人BMP4基因,与NCBI中公布的序列100%相符合,原核表达载体pET22b-BMP4转化至Rosseta构建表达菌体,经IPTG诱导后电泳分析可见重组蛋白表达的条带。
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关键词
骨形成蛋白4
基因克隆
原核表达
pMD18-T载体
pet-
22
b
载体
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职称材料
牛疱疹病毒I型gB基因的原核表达
3
作者
李艳莉
陶洁
+2 位作者
张信军
王银
朱国强
《中国动物传染病学报》
CAS
2013年第5期34-39,共6页
根据GenBank中BHV-1 Colorado 1毒株的全基因组序列,针对gB基因的主要B细胞免疫区域设计一对引物。提取BHV-1 Colorado 1毒株的基因组DNA,PCR扩增大小为585 bp的gB片段,将其克隆至pET-22b(+)原核表达载体并测序分析,同时用Nde I和Not I...
根据GenBank中BHV-1 Colorado 1毒株的全基因组序列,针对gB基因的主要B细胞免疫区域设计一对引物。提取BHV-1 Colorado 1毒株的基因组DNA,PCR扩增大小为585 bp的gB片段,将其克隆至pET-22b(+)原核表达载体并测序分析,同时用Nde I和Not I酶切鉴定。SDS-PAGE和Western blot试验结果证明,获得的可溶性gB重组蛋白能与牛传染性鼻气管炎病毒标准阳性WEI血清发生特异性反应,为ELISA等免疫诊断方法的建立奠定了物质基础。
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关键词
牛疱疹病毒
G
b
基因
pet-
22
b
(+)
包涵体
蛋白免疫印迹
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职称材料
题名
人β_2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化
被引量：
3
1
作者
朴文花
张恒辉
何豫
朴桂花
许文燮
李在琉
王贵强
机构
吉林省延边大学医学部
北京大学第一医院感染科
延边社会精神病院
出处
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005年第2期99-101,共3页
基金
卫生部临床学科重点项目基金
北京大学 985青年基金及美国CMB项目资助
文摘
目的 :构建人 β2-microglobulin( β2- M)基因的原核表达载体 ,在大肠杆菌中高效表达 β2 -M蛋白质并进行纯化 ,为构建MHC 肽四聚体奠定基础。方法 :从人外周血单核细胞中提取总RNA ,采用RT-PCR技术扩增出去除信号肽部分的 β2-M基因 ,克隆入pET-2 2b( + )表达载体进行诱导表达。采用离子交换层析和凝胶过滤方法对表达产物进行纯化 ,用ELISA和West ernblot法进行免疫学鉴定。结果 :成功地构建了表达载体pET-2 2b( + )- β2-M ,对表达产物进行了纯化 ,并对表达产物进行了鉴定。结论 :获得 β2- M蛋白的高效表达 。
关键词
Β2-M
pet-
22
b
(+)载体
表达
纯化
四聚体
Keywords
M gene
pet-
22
b
(+)
vector
Expression
Purification
Tetramer
分类号
R392.11 [医药卫生—免疫学]
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职称材料
题名
人BMP4基因的克隆及其原核表达载体的构建
2
作者
刘秋英
陈伟
毛国梁
熊盛
钱垂文
利奕成
王一飞
机构
暨南大学生命科学技术学院生物医药研究开基地
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期90-92,共3页
基金
广东省教育部产学研结合项目(2009B090200070)
文摘
以成熟人胎盘组织为材料来源,克隆人BMP-4基因的全长cDNA,经过PCR扩增后与pMD18-T载体连接,构建pMD18-T-BMP4克隆质粒。酶切后回收小片段与表达载体pET-22b的多克隆酶切位点连接,构建原核表达载体pET22b-BMP4,酶切及测序鉴定重组子。重组质粒转化至感受态的Rosseta宿主菌,经IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测蛋白表达情况。结果显示,从胎盘组织中成功地克隆到人BMP4基因,与NCBI中公布的序列100%相符合,原核表达载体pET22b-BMP4转化至Rosseta构建表达菌体,经IPTG诱导后电泳分析可见重组蛋白表达的条带。
关键词
骨形成蛋白4
基因克隆
原核表达
pMD18-T载体
pet-
22
b
载体
Keywords
b
one morphogenetic protein 4 Gene clone Prokaryotic expression pMD18-T
vector
pet-
22
b
vector
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
牛疱疹病毒I型gB基因的原核表达
3
作者
李艳莉
陶洁
张信军
王银
朱国强
机构
扬州大学兽医学院
出处
《中国动物传染病学报》
CAS
2013年第5期34-39,共6页
基金
江苏高校优势学科建设工程资助项目
教育部创新团队
+2 种基金
江苏中美国际科技合作项目(BZ2005032)
江苏省农业支撑项目(BE2008363)
国家农业部948计划(2011-G24)
文摘
根据GenBank中BHV-1 Colorado 1毒株的全基因组序列,针对gB基因的主要B细胞免疫区域设计一对引物。提取BHV-1 Colorado 1毒株的基因组DNA,PCR扩增大小为585 bp的gB片段,将其克隆至pET-22b(+)原核表达载体并测序分析,同时用Nde I和Not I酶切鉴定。SDS-PAGE和Western blot试验结果证明,获得的可溶性gB重组蛋白能与牛传染性鼻气管炎病毒标准阳性WEI血清发生特异性反应,为ELISA等免疫诊断方法的建立奠定了物质基础。
关键词
牛疱疹病毒
G
b
基因
pet-
22
b
(+)
包涵体
蛋白免疫印迹
Keywords
b
ovine herpesvirus
g
b
gene
pet-
22
b
（＋）
inclusion
b
ody
Western
b
lot
分类号
S852.659.1 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人β_2-微球蛋白在pET-22b(+)表达载体中的克隆、表达与纯化
朴文花
张恒辉
何豫
朴桂花
许文燮
李在琉
王贵强
《中国免疫学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2005
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
人BMP4基因的克隆及其原核表达载体的构建
刘秋英
陈伟
毛国梁
熊盛
钱垂文
利奕成
王一飞
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
牛疱疹病毒I型gB基因的原核表达
李艳莉
陶洁
张信军
王银
朱国强
《中国动物传染病学报》
CAS
2013
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
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