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核因子NF-κB p65亚基TAD的克隆及表达 被引量：2
1
作者 侯春丽 应大君 魏勇 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第1期21-23,共3页
目的获得NF-κB p65亚基转录激活区域(transcription activation dom ain,TAD),构建真核表达载体并在内皮细胞中检测其表达。方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,经RT-PCR得到p65 TAD基因片段,测序正确后插入带有绿色荧光蛋白的真核表... 目的获得NF-κB p65亚基转录激活区域(transcription activation dom ain,TAD),构建真核表达载体并在内皮细胞中检测其表达。方法培养人脐静脉内皮细胞,提取总RNA,经RT-PCR得到p65 TAD基因片段,测序正确后插入带有绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1,构建表达载体pEGFP-N1-p65 TAD,然后转染内皮细胞,荧光显微镜下观察表达情况,同时用W estern b lot分析蛋白的表达。结果有效地扩增了p65 TAD 783 bp的目的基因片段。酶切结果表明所构建的含p65 TAD基因的质粒与设计相同。p65 TAD在脐静脉内皮细胞中得到了高效的表达。结论成功地构建了p65 TAD的真核表达载体并实现了在内皮细胞中的高效表达。 展开更多
关键词 核转录因子NF-ΚB p65亚基转录激活区域 克隆 表达
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HIF-1α和RelA基因在急进高原正常人外周血单个核细胞中的表达及其与急性高原反应的关联性 被引量：2
2
作者 方盼盼 宫璀璀 +5 位作者 仓宝成 李正民 李宗杰 李文莉 朱传杰 王迎涛 《吉林大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2013年第4期781-785,共5页
目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入... 目的:观察急进高原前后正常人单个核细胞中缺氧诱导因子1α(HIF-1α)和核转录因子NF-κB p65亚基(RelA)表达水平的变化,探讨HIF-1α和RelA在急性高原反应(AMS)发生中的作用及机制。方法:对某部赴玉树抗震的士兵分别于进入高原前和进入高原后48h采集外周血,提取单个核细胞中的mRNA和蛋白,采用RT-PCR方法检测RelA和HIF-1αmRNA表达水平,Western blotting法检测HIF-1α蛋白表达水平。Spearman相关分析法分析RelA和HIF-1α基因表达与AMS发生的相关性。结果:与急进高原前比较,进入高原后HIF-1α和RelA mRNA及HIF-1α蛋白表达水平均显著增高(P<0.01);HIF-1αmRNA和RelA mRNA表达呈正相关关系(r=0.806,P<0.01);HIF-1α蛋白表达与AMS的发生率呈正相关关系(r=0.875,P<0.01);HIF-1α和RelA表达不同性别之间比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:HIF-1α蛋白表达水平可作为预测和干预AMS的监测指标。急进高原后HIF-1α和RelA mRNA表达水平显著增加且呈显著正相关关系,提示在其信号传导通路之间存在cross-talk现象。 展开更多
关键词 急性高原反应 缺氧诱导因子1α 核转录因子KAppAB p65亚基 缺氧 CROSS-TALK
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青蒿素联合氯喹治疗通过阻断NF-κB通路抑制胶原蛋白诱导性关节炎小鼠的炎症反应
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作者 吕昌伟 张静涛 +2 位作者 郗海涛 强毅 张乾 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第7期632-639,共8页
目的 探究青蒿素联合氯喹对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠前爪厚度、促炎酶含量、巨噬细胞浸润和分化的影响以及作用机制。方法 小鼠注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型,随机分为CIA组、青蒿素(33.3 mg/kg)组、氯喹(33.3 mg/kg)组和联合治... 目的 探究青蒿素联合氯喹对胶原蛋白诱导性关节炎(CIA)小鼠前爪厚度、促炎酶含量、巨噬细胞浸润和分化的影响以及作用机制。方法 小鼠注射牛Ⅱ型胶原蛋白建立CIA模型,随机分为CIA组、青蒿素(33.3 mg/kg)组、氯喹(33.3 mg/kg)组和联合治疗组(各16.7 mg/kg),健康小鼠作为对照组,每组8只。治疗组灌胃给药,CIA模型组和对照组给予相同剂量的生理盐水,连续灌胃18 d。记录各组小鼠前爪厚度和关节炎评分的变化,ELISA检测小鼠血清中的免疫球蛋白含量和炎症因子含量。实时定量PCR检测小鼠前爪组织以及巨噬细胞环加氧酶2(COX2)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)、 CD86、 CD80、 CD163、精氨酸酶1(Arg1)、 CC趋化因子受体2(CCR2)、 CCR3、 CCR4、 CCR5、白细胞介素6(IL-6)的mRNA表达;Western blot法检测小鼠前爪组织和RAW264.7巨噬细胞COX2、 iNOS、信号转导子和转录激活子3(STAT3)、磷酸化的STAT3(p-STAT3)和核因子κB p65(NF-κB p65)蛋白表达。脂多糖(LPS)刺激RAW264.7细胞诱发炎症,将细胞随机分为LPS组、青蒿素(20μmol/L)组、氯喹(20μmol/L)组和联合治疗组(青蒿素5μmol/L,氯喹10μmol/L)组,未处理细胞为对照组,CCK-8法检测细胞活力。结果 与对照组相比,CIA组小鼠显著增加关节炎评分和前爪厚度,上调M1分化蛋白CD86和CD80 mRNA水平,但下调M2分化蛋白CD163和Arg1/iNOS mRNA水平以及酶COX2和iNOS mRNA和蛋白水平;药物单独以及联合治疗均降低炎症评分和前爪厚度,下调CD86和CD80 mRNA水平,但上调CD163和Arg1/iNOS mRNA水平和COX2和iNOS的mRNA和蛋白水平;LPS诱导的巨噬细胞细胞活力增加,药物处理后细胞活力降低。CIA小鼠前爪组织或LPS诱导的巨噬细胞的IL-6 mRNA水平、 p-STAT3和NF-κB p65的蛋白表达量均上调,治疗则均可逆转上述作用。结论 青蒿素联合氯喹的治疗效果优于药物单药治疗的效果;青蒿素联合氯喹通过阻断NF-κB通路缓解CIA小鼠关节炎。 展开更多
关键词 青蒿素 氯喹 胶原蛋白诱导性关节炎 信号转导子和转录激活子3(STAT3) 核因子κB p65(NF-κB p65)
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