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GPR30激活后下调P53-PUMA信号抑制全脑缺血诱导的海马神经元线粒体凋亡途径 被引量:5
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作者 郭思含 孙立萍 +3 位作者 赵雨逢 韩东 王瑞敏 胡书群 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第6期568-574,共7页
目的采用GPR30特异激动剂、拮抗剂作为工具药,已证实GPR30激活具有抗神经炎症和抗凋亡作用。但具体机制尚不清楚。文章旨在研究揭示G蛋白耦联雌激素受体30(GPR30)激活对脑缺血后海马CA1区神经元凋亡的作用并进一步阐明其对P53-PUMA信号... 目的采用GPR30特异激动剂、拮抗剂作为工具药,已证实GPR30激活具有抗神经炎症和抗凋亡作用。但具体机制尚不清楚。文章旨在研究揭示G蛋白耦联雌激素受体30(GPR30)激活对脑缺血后海马CA1区神经元凋亡的作用并进一步阐明其对P53-PUMA信号的影响。方法采用大鼠四动脉结扎全脑缺血模型,选择性诱导海马CA1区神经元延迟性死亡。雌性SD大鼠随机分为:假手术(Sham)组,缺血/再灌注(Ischemia/Reperfusion,I/R)1d、3d、7d组,GPR30特异激动剂G1处理组(I/R 1d+G1,I/R 3d+G1),P53特异抑制剂Pifithrin-α(Pifi-α)处理组(Pifi-α,I/R 3d+Pifi-α,I/R 7d+Pifi-α),GPR30特异拮抗剂G36处理组(I/R 7d+Pifi-α+G36)。于大鼠切除双侧卵巢同时皮下埋置G1或G36微量释放泵,至实验结束;缺血前侧脑室注射P53抑制剂Pifi-α。Western Blot、免疫组化检测蛋白水平;TUNEL法检测海马CA1区神经元凋亡、NeuN染色观察神经元生存情况。结果激光扫描共聚焦显微镜下观察结果显示,I/R 7d组海马CA1区NeuN阳性染色细胞数量(7.500±2.320)较假手术组(61.000±2.671)减少(P<0.01),但TUNEL阳性细胞数量(73.667±5.296)增多较假手术组(3.667±1.174),差异有统计学意义(P<0.01)。与I/R 7d组相比,Pifi-α处理组海马CA1区NeuN阳性细胞数(58.143±4.783)增加(P<0.01),而TUNEL阳性细胞数(23.571±3.545)减少(P<0.01)。与I/R 7d+Pifi-α组相比,I/R 7d+Pifi-α+G36组NeuN阳性细胞数量(46.143±4.426)减少(P<0.01),而TUNEL阳性细胞数(46.143±3.985)增加(P<0.01)。Western blot结果显示,与假手术组相比,GCI后1d、3d海马CA1区P53磷酸化水平均升高(P<0.05)。与缺血/再灌注相应时间点相比,用G1激活GPR30受体降低了缺血/再灌注诱导的P53磷酸化水平(P<0.01)。免疫组化结果显示,与假手术组相比,缺血再灌注3d组海马CA1区p-P53免疫荧光强度增强,且与DAPI荧光共定位;而G1处理组类似于假手术组,显示海马CA1区p-P53免疫荧光强度较I/R 3d组降低。Western blot分析结果显示,与假手术组相比较,I/R 3d组海马CA1区PUMA水平明显升高,Bcl2水平降低(P<0.01);与I/R 3d组比较,I/R 3d+Pifi-α组PUMA蛋白降低(P<0.01),而Bcl2水平升高(P<0.01)。结论激活GPR30具有显著的神经保护作用,其作用机制与下调P53-PUMA信号通路、抑制线粒体凋亡密切相关。 展开更多
关键词 G蛋白耦联雌激素受体30 p53 p53上调调节因子 全脑缺血
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PUMA介导大蒜素诱导人卵巢癌耐顺铂SKOV-3/DDP细胞凋亡 被引量:5
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作者 吴金兰 万慧芳 +3 位作者 涂硕 朱伟锋 余乐涵 万福生 《中成药》 CAS CSCD 北大核心 2014年第8期1573-1579,共7页
目的探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5... 目的探讨p53上调凋亡调控因子(PUMA)在大蒜素诱导人上皮性卵巢癌耐顺铂细胞株(SKOV-3/DDP)细胞凋亡中的作用。方法将SKOV-3/DDP细胞随机分为4组:正常对照组、大蒜素组(于培养基中加入终质量浓度为20μg/mL大蒜素作用细胞48 h)、顺铂组(5μg/mL)、大蒜素+顺铂组。MTT法检测细胞存活率,荧光显微镜和流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR和Western-blot检测PUMA、bax及bcl-2的基因表达。结果与对照组比较,大蒜素组SKOV-3/DDP细胞凋亡率有明显的增加(P<0.05),且作用呈剂量依赖性,PUMA,Bax mRNA和蛋白表达上调,Bcl-2 mRNA和蛋白表达下调(P<0.05);与大蒜素组比较,顺铂+大蒜素组的细胞生长抑制率及凋亡率均有显著增加(P<0.05),Bax表达上调及Bcl-2表达下调的程度大于单用组(P<0.05);用特异性SiRNA沉默PUMA后,大蒜素组细胞凋亡率呈显著性下降(P<0.05)。结论 PUMA在介导大蒜素诱导SKOV-3/DDP细胞凋亡中发挥了关键性作用。 展开更多
关键词 p53上调调控因子(puma) 大蒜素 SKOV-3/DDp细胞株 人卵巢癌
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PUMA基因对胰腺癌细胞BxPC-3的促凋亡作用及其可能机制 被引量:4
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作者 莫小恒 李军 +1 位作者 张克君 李德春 《中国肿瘤生物治疗杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期353-357,共5页
目的:研究P53正向凋亡调节因子基因(P53 up-regulate modulator of apoptosis,PUMA)对胰腺癌细胞株BxPC-3凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:以100 MOI的携PUMA基因重组腺病毒(Ad-PUMA)感染BxPC-3细胞0~96 h,流式细胞术检测BxPC-3细... 目的:研究P53正向凋亡调节因子基因(P53 up-regulate modulator of apoptosis,PUMA)对胰腺癌细胞株BxPC-3凋亡的影响及其可能的作用机制。方法:以100 MOI的携PUMA基因重组腺病毒(Ad-PUMA)感染BxPC-3细胞0~96 h,流式细胞术检测BxPC-3细胞凋亡率,Western blotting检测BxPC-3细胞中PUMA、Bcl-2、Bax、Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达,Western blotting检测BxPC-3细胞中细胞质和线粒体内Bax的表达及Bax寡聚体。结果:随着Ad-PUMA感染时间的延长,BxPC-3细胞凋亡率逐渐增加,48 h时最高。Ad-PUMA感染促进BxPC-3细胞中PUMA、Cytochrome C和Caspase-3蛋白的表达,抑制BxPC-3细胞中Bcl-2蛋白的表达。Ad-PUMA感染后BxPC-3细胞的凋亡率与BxPC-3细胞中PUMA蛋白的表达具有明显的相关性。Ad-PUMA感染不影响BxPC-3细胞中Bax蛋白的总表达量,但细胞质中的Bax几乎完全消失,而线粒体中的Bax表达明显增加;Ad-PUMA感染诱导BxPC-3细胞中Bax蛋白的寡聚化。结论:PUMA基因通过线粒体途径促进胰腺癌细胞凋亡。 展开更多
关键词 胰腺肿瘤 p53正向调节因子基因(puma) 线粒体
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加味脑泰方对去势脑缺血大鼠海马ATF4/CHOP/Puma通路的影响 被引量:3
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作者 秦莉花 刘林 +8 位作者 成绍武 李晟 王国佐 黄娟 刘洋 王珊珊 龚盛强 程诚 葛金文 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2019年第2期365-369,共5页
目的:研究加味脑泰方对去卵巢脑缺血大鼠海马活化转录因子4 (ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)/p53上调凋亡调控因子(Puma)通路的影响。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、加味脑泰方组和阳性对照组,除假手术组外,其它大鼠均行去卵巢... 目的:研究加味脑泰方对去卵巢脑缺血大鼠海马活化转录因子4 (ATF4)/C/EBP同源蛋白(CHOP)/p53上调凋亡调控因子(Puma)通路的影响。方法:将雌性大鼠随机分为假手术组、模型组、加味脑泰方组和阳性对照组,除假手术组外,其它大鼠均行去卵巢术;术后11 d,阳性对照组和加味脑泰方组给予相应药物灌胃,连续灌胃3 d后行脑缺血术。术后24 h进行行为学评价,取海马组织行RT-qPCR检测Bax、Bcl-2和caspase-3的mRNA表达,Western blot检测各组大鼠海马组织中Bax、Bcl-2、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma蛋白表达。结果:与假手术组比较,各组的海马神经功能评分明显增高;与模型组比较,加味脑泰方组与阳性对照组的神经功能评分明显降低(P <0.05)。与假手术组比较,模型组大鼠海马Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma的蛋白表达及Bax和caspase-3的mRNA表达明显升高,而Bcl-2的mRNA和蛋白表达明显降低(P <0.05);与模型组比较,加味脑泰方明显降低Bax、caspase-3、ATF4、CHOP和Puma表达,提高Bcl-2表达(P <0.05)。结论:加味脑泰方可能通过抑制ATF4/CHOP/Puma通路相关mRNA及蛋白的表达而减轻脑缺血损伤。 展开更多
关键词 加味脑泰方 脑缺血 活化转录因子4 C/EBp同源蛋白 p53上调调控因子
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丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注时NF-κB活化和PUMA表达的影响 被引量:2
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作者 潘炳德 宋彩霞 +4 位作者 杨堂斗 陈彦福 冯春声 刘波平 杨春燕 《临床麻醉学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期185-188,共4页
目的观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)时核因子(NF)-κB活化和P53正向凋亡调控因子(PUMA)、Bcl-2和Caspase-3基因表达的影响,并探讨其脑保护的机制。方法 90只雄性大鼠建立局灶性脑IR模型,随机分为IR组、丙泊酚组(P组)和假手术... 目的观察丙泊酚对大鼠局灶性脑缺血-再灌注(IR)时核因子(NF)-κB活化和P53正向凋亡调控因子(PUMA)、Bcl-2和Caspase-3基因表达的影响,并探讨其脑保护的机制。方法 90只雄性大鼠建立局灶性脑IR模型,随机分为IR组、丙泊酚组(P组)和假手术组(C组)。缺血前腹腔注射丙泊酚100mg/kg,各组再灌注时间为2、3、6、12、24、72h。蛋白质印迹法检测不同时间点的NF-κB、PUMA、Bcl-2和Caspase-3表达,凝胶电泳迁移率(EMSA)检测12、24h的NF-κB和PUMA活性;检测不同时间点Caspase-3活性;DNALader观察细胞凋亡。结果与C组比较,IR组缺血侧大脑皮层于再灌注2~24hNF-κB、PUMA表达逐渐升高,72h开始下降,Bcl-2在灌注6h内表达降低,以后逐渐升高,而Caspase-3在灌注2~24h内逐渐升高,72h开始下降。与IR组比较,P组在灌注后的各个时间点NF-κB、PUMA表达明显减少,而Bcl-2表达逐渐升高,Caspase-3逐渐降低。IR组Caspase-3的活性在24h最高,72h开始降低。在P组,Caspase-3蛋白活性升高不显著。DNALader发现,IR组6、12、24、72h见明显的DNA片段,而在P组未见明显的DNA片段。结论丙泊酚抑制NF-κB活化引起的PUMA上调,后者下调Caspase-3和上调Bcl-2,从而抑制神经组织细胞凋亡。 展开更多
关键词 丙泊酚 脑缺血再灌注损伤 因子-ΚB p53正向调控因子
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匹罗卡品致大鼠癫痫持续状态后海马组织中Puma和CytC的表达变化
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作者 王新林 耿直 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期193-198,共6页
目的研究匹罗卡品致癫痫持续状态(SE)的大鼠模型中,P53上调细胞凋亡调控因子(Puma)和细胞色素C(Cyt C)在大鼠海马组织中的表达情况。方法 10%的匹罗卡品(300 mg/kg)腹腔注射于成年雄性SD大鼠,诱发SE 60 min后终止发作。24 h后取大鼠海... 目的研究匹罗卡品致癫痫持续状态(SE)的大鼠模型中,P53上调细胞凋亡调控因子(Puma)和细胞色素C(Cyt C)在大鼠海马组织中的表达情况。方法 10%的匹罗卡品(300 mg/kg)腹腔注射于成年雄性SD大鼠,诱发SE 60 min后终止发作。24 h后取大鼠海马组织,苏木精-伊红(H-E)染色观察海马CA1区神经元的数量,TUNEL染色观察海马神经元的损伤情况。采用Western blotting方法测定海马组织中Puma的表达,免疫组织化学方法检测海马组织中Cyt C的含量。运用Pearson相关分析法分析Puma和Cyt C表达的相关性。结果 SE后24 h,大鼠海马CA1区H-E染色神经元数量显著减少,TUNEL阳性神经元含量明显增加。可见Puma的表达,并可见大量的Cyt C阳性神经元。且Puma和Cyt C的含量变化具有相关性(r=0.906,P=0.000)。结论大鼠SE后24 h海马神经元出现凋亡,Puma和Cyt C在SE大鼠海马组织神经元中的表达含量增加,两者的表达水平成正相关。 展开更多
关键词 癫痫持续状态 p53上调细胞调控因子 细胞色素C 大鼠
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