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黄条[鱼师]otx2和eya1基因克隆及其在早期发育阶段的表达特性
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作者 姜燕 刘欣 +5 位作者 徐永江 崔爱君 王滨 刘新富 柳学周 薛致勇 《渔业科学进展》 北大核心 2025年第3期27-39,共13页
为了研究黄条[鱼师](Seriola aureovittata)视觉和听觉等器官关键调控基因在早期发育过程的表达特性,本研究克隆了黄条[鱼师]otx2和eya1的开放阅读框(ORF)序列,解析了其序列及系统进化的特性和时空表达特征。结果显示,otx2的ORF长度为87... 为了研究黄条[鱼师](Seriola aureovittata)视觉和听觉等器官关键调控基因在早期发育过程的表达特性,本研究克隆了黄条[鱼师]otx2和eya1的开放阅读框(ORF)序列,解析了其序列及系统进化的特性和时空表达特征。结果显示,otx2的ORF长度为876 bp,编码291个氨基酸;eya1的ORF长度为1962 bp,编码653个氨基酸。otx2和eya1均具有广泛的组织分布特性,其中,otx2在眼组织中表达量最高,脑次之,均显著高于其余组织(P<0.05);eya1在垂体中表达量最高,其次为卵巢,均显著高于其余组织(P<0.05)。在胚胎发育过程中均可检测到otx2和eya1的表达,且均在胚胎发育后期表达上调;其中,otx2在孵化期达到峰值,eya1在胚体包卵黄4/5期达峰值。在仔稚幼鱼时期均可追踪到otx2和eya1的表达,且在前期相对表达量较高;其中,otx2的表达呈先上调后下调的趋势,在20 dph(days post-hatching)时最高(P<0.05),eya1的表达量呈下调趋势,在1 dph时表达量最高(P<0.05)。本研究为认识otx2和eya1在黄条[鱼师]感知器官发育过程中可能的生理功能和研究感知器官的发育调控机制提供了分子认知基础。 展开更多
关键词 黄条[鱼师] otx2 eya1 组织表达 胚胎发育 仔稚幼鱼
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OTX2基因表达下调对MC3T3-E1细胞增殖分化和自噬的影响 被引量:2
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作者 田玉楼 于默 +1 位作者 史娅婕 张薇 《中国医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1015-1020,共6页
目的研究OTX2基因对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖分化及自噬水平的影响。方法应用OTX2基因小干扰RNA(siRNA)转染MC3T3-E1细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平,化学比色法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,... 目的研究OTX2基因对小鼠成骨细胞系MC3T3-E1增殖分化及自噬水平的影响。方法应用OTX2基因小干扰RNA(siRNA)转染MC3T3-E1细胞,采用MTT法测定细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡水平,化学比色法检测细胞碱性磷酸酶(ALP)合成情况,单丹磺酰尸胺(MDC)荧光染色观察各组自噬体表达情况。结果与对照组比较,实验组细胞增殖抑制率明显升高(P <0.05),S期细胞百分比减少,S期细胞比例以及细胞的增殖指数显著降低(P <0.05),凋亡率无统计学差异(P>0.05);ALP活性明显低于对照组(P <0.05);实验组可见少量MDC点状荧光,荧光细胞比例降低,阴性对照组点状荧光较多,实验组与阴性对照组荧光细胞比例有统计学差异(P <0.05)。结论 OTX2基因表达下调可以抑制MC3T3-E1细胞增殖,降低细胞分化水平,引起MC3T3-E1细胞自噬水平降低。 展开更多
关键词 otx2 SIRNA 转染 自噬
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外源视黄酸对小鼠早期胚胎形态及Otx2基因表达的影响 被引量:1
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作者 刘楚吾 Clotm.,F 《湖南师范大学自然科学学报》 CAS 1996年第3期47-53,共7页
以全反式视黄酸(alltrans-retinoicacid,RA)体外处理EB(earlyallantoicbud)期和LB(Lateallantoicacid)期的小鼠胚胎,然后用洋地黄毒苷(digoxigenin... 以全反式视黄酸(alltrans-retinoicacid,RA)体外处理EB(earlyallantoicbud)期和LB(Lateallantoicacid)期的小鼠胚胎,然后用洋地黄毒苷(digoxigenin)标记的Otx2反意义RNA探针对整体胚胎进行原位杂交.0.5×10-6mol~2×10-6mol的RA处理EB和LB期胚胎12h后对其形态学和Otx2表达都没有影响;以4×10-6mol的RA处理,抑制或减少了胚胎的前肠形成,经处理的胚胎的头褶没有对照的那样明显向腹面突出,其神经沟也不整齐;以4×10-6mol的RA处理EB期的胚胎,其OtX2表达范围剧烈地向前退缩或只有很微弱的表达;但以同样浓度处理LB期胚胎时,与对照胚胎相比,OtX2的表达除了在极少数胚胎中变得弱一些外,在绝大多数胚胎中其表达模式没有变化. 展开更多
关键词 胚胎 视黄酸 小鼠 原位杂交 otx2基因 形态学
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七彩神仙鱼OTX2基因克隆及其表达分析 被引量:4
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作者 魏域玲 温彬 +1 位作者 高建忠 陈再忠 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2021年第3期13-19,共7页
为探讨otx2基因在七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)亲代抚育过程中的作用,本试验采用RT-PCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,otx2基因的cDNA序列的CDS区序列长度为873 bp,共编码290个氨基酸,预测分子质量为31771.55 Da,理论等电点为9.4... 为探讨otx2基因在七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi)亲代抚育过程中的作用,本试验采用RT-PCR法克隆得到了七彩神仙鱼otx2基因,otx2基因的cDNA序列的CDS区序列长度为873 bp,共编码290个氨基酸,预测分子质量为31771.55 Da,理论等电点为9.40。运用SMART、Swiss-model和MEGA软件对基因的结构及物种进化关系进行分析。氨基酸序列预测显示,该基因具有otx保守结构域,在进化关系上与尼罗罗非鱼和白边锯鳞鱼亲缘关系相近,同源性分析发现,其氨基酸序列与尼罗罗非鱼、长、西瓜刨、牙鲆和白边锯鳞鱼的同源性都在75%以上。荧光定量PCR分析显示,otx2基因在雌性七彩神仙鱼的脑、心脏、肝脏、肾脏等组织中都有表达,并且在脑组织中显著高表达。荧光原位杂交结果显示,otx2基因在七彩神仙鱼脑组织中的小球周灰质带、纵枕、顶盖室等区域均有表达。 展开更多
关键词 七彩神仙鱼(Symphysodon haraldi) otx2 基因克隆 荧光原位杂交
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OTX2和CRX调控视网膜光感受器细胞发育分化的研究进展 被引量:2
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作者 邱莹 彭广华 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2015年第3期287-289,共3页
视网膜感受器细胞可以将光信号转化为电信号,从而产生视觉。哺乳动物的光感受器细胞包括视锥细胞和视杆细胞。视锥细胞和视杆细胞的发育受多种调控因子的作用,其中,转录因子OTX2和CRX对视锥细胞和视杆细胞的发育分化和功能维持起着至关... 视网膜感受器细胞可以将光信号转化为电信号,从而产生视觉。哺乳动物的光感受器细胞包括视锥细胞和视杆细胞。视锥细胞和视杆细胞的发育受多种调控因子的作用,其中,转录因子OTX2和CRX对视锥细胞和视杆细胞的发育分化和功能维持起着至关重要的作用。本文综述OTX2和CRX在视网膜光感受器细胞发育分化中的关键机制,为研究视网膜疾病的发生机制和干预治疗提供理论基础。 展开更多
关键词 光感受器 otx2 CRX 发育 分化
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PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内Otx2和PV免疫反应阳性神经元的分布
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作者 赵娟娟 蒲川将 +4 位作者 西条寿夫 崛悦郎 上野照子 李瑞锡 彭裕文 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期587-596,共10页
目的:探讨血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)在上丘神经元的作用。方法:采用免疫细胞化学法和图像分析技术观察正常成年小鼠和PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内Otx2和小白蛋白(parvalbumin,PV... 目的:探讨血小板源性生长因子受体β(platelet-derived growth factor receptor-β,PDGFR-β)在上丘神经元的作用。方法:采用免疫细胞化学法和图像分析技术观察正常成年小鼠和PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内Otx2和小白蛋白(parvalbumin,PV)免疫反应阳性神经元的形态、数目、大小及分布。结果:PDGFR-β基因敲除小鼠上丘内Otx2和PV免疫反应阳性神经元的基本形态及分布特征与正常小鼠无明显差别,即Otx2免疫反应阳性神经元密集地分布于上丘的浅层,而PV免疫反应阳性神经元则分布于上丘的各层。但这两种神经元的数目在PDGFR-β基因敲除小鼠却明显减少,其平均直径也较正常小鼠者明显为小。结论:PDGFR-β可能通过Otx2和PV等神经化学物质,参与上丘的功能形成与发育。 展开更多
关键词 血小板源性生长因子受体 otx2 小白蛋白 免疫细胞化学 上丘 小鼠
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MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征及关键蛋白
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作者 盖鑫冉 徐佳爱 +3 位作者 车虹昱 王祥 杨春华 齐东来 《眼科新进展》 北大核心 2025年第3期190-195,共6页
目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WER... 目的 研究MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中的细胞特征,寻找在此过程中发挥重要作用的关键蛋白。方法 选择在体外培养1年和2年的T-MYCN细胞(分别为T-MYCN Y1细胞和T-MYCN Y2细胞),组成后续实验的T-MYCN Y1组和T-MYCN Y2组细胞。WERI-Rb-1细胞系从中国科学院上海细胞库获得,作为成熟RB对照组(WERI-Rb-1组);未经处理的人正常视网膜组织作为对照组。将细胞按照每孔1×10~4个细胞接种于24孔板,在显微镜下观察细胞形态并采集图像;在接种后第4、8、12天进行细胞计数。使用免疫荧光染色检测各组细胞增殖标记物Ki67和视锥细胞标记物L/M opsin的表达;采用qRT-PCR检测各组细胞中MYCN、CCNB1、CDK1、SYK和RXRγ的表达情况;通过蛋白质组学分析各组细胞间蛋白表达谱差异并筛选关键调控基因;采用慢病毒敲低OTX2表达后检测各组细胞的生长增殖能力。结果 生长曲线显示,在体外培养第12天,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞数量分别为(59.17±4.01)×10~4个、(85.14±4.54)×10~4个、(100.73±1.99)×10~4个(均为P<0.05)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组Ki67和L/M opsin阳性细胞率均增加(均为P<0.001)。与对照组相比,T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的MYCN mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.001),CCNB1和CDK1 mRNA相对表达量亦均升高(均为P<0.01)。与对照组相比,T-MYCN Y1组细胞的SYK mRNA相对表达量无明显变化(P>0.05),RXRγ mRNA相对表达量显著升高(P<0.05);T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞的SYK、RXRγ mRNA相对表达量均显著升高(均为P<0.05)。GO富集分析显示这些差异蛋白富集到蛋白质复合体组装和线粒体等通路;KEGG富集分析显示这些差异蛋白富集到碳代谢、代谢途径和脂肪酸降解等通路。蛋白质组学和Western blot分析结果均显示,OTX2在WERI-Rb-1组细胞中表达水平最高,其次为T-MYCN Y2组细胞,T-MYCN Y1组细胞最低。qRT-PCR结果显示,在T-MYCN Y1组、T-MYCN Y2组和WERI-Rb-1组细胞中,与空载对照组相比,OTX2敲低组的OTX2 mRNA相对表达量均下降(均为P<0.05);细胞生长曲线显示,在三组细胞中敲低OTX2后,细胞的生长增殖能力均下降,差异均有统计学意义(均为P<0.001)。结论 MYCN过表达诱导的视网膜肿瘤发展过程中,细胞逐渐呈现出与WERI-Rb-1细胞类似的视网膜母细胞瘤特征;OTX2在MYCN扩增或高表达RB的生长增殖中发挥重要作用,靶向OTX2可能成为治疗RB新的研究方向。 展开更多
关键词 视网膜母细胞瘤 MYCN WERI-Rb-1 蛋白质组学 otx2
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山羊DCT基因启动子活性区及其转录因子调控探究 被引量:5
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作者 刘春杨 张乐超 +3 位作者 王麒 周荣艳 李兰会 李祥龙 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期55-64,共10页
旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在... 旨在探究山羊DCT基因启动子活性区及相关转录因子对该基因的调控作用,为山羊DCT基因的表达调控提供理论依据。通过对山羊DCT基因5′侧翼区序列及第一外显子区序列进行生物信息学分析,并与人和小鼠DCT基因启动子序列进行比对,同时结合在线启动子预测结果,采用快速克隆的方法构建5个5′系列缺失序列的启动子报告基因载体,以此为基础构建3′缺失序列的6个报告基因载体,并构建SOX10、MITF和OTX2转录因子结合位点点突变的6个报告基因载体,以瞬时转染的方法转染A375细胞,双荧光素酶检测试剂盒检测缺失片段和点突变片段的启动子活性。结果表明,成功构建了山羊DCT基因11个不同长度的启动子报告基因载体,-990^+232bp的P3片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01),基于P3构建的3′系列缺失片段中-881^-154bp的P8片段荧光素酶活性极显著高于其他片段(P<0.01)。转录因子SOX10结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著降低(P<0.01),MITF和OTX2结合位点突变的载体荧光素酶活性极显著增强(P<0.01)。山羊DCT基因启动子核心调控区位于-881^-154bp区域,转录因子SOX10对山羊DCT基因发挥正调控作用,而转录因子MITF和OTX2对山羊DCT基因的调控作用尚需深入研究。 展开更多
关键词 山羊 DCT基因 启动子 SOX10 MITF otx2
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