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应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白
被引量：
5
1
作者
刘铁军
李昆珊
+4 位作者
刘健
仇永乐
吴景景
安欣
许彦枝
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期793-796,共4页
目的:应用双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓(OLP)患者唾液有关的差异蛋白。方法:收集3例OLP患者及3例健康人唾液,提取唾液总蛋白采用2-D DIGE技术分离蛋白质,寻找差异蛋白质点应用液相色谱一质谱联用...
目的:应用双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓(OLP)患者唾液有关的差异蛋白。方法:收集3例OLP患者及3例健康人唾液,提取唾液总蛋白采用2-D DIGE技术分离蛋白质,寻找差异蛋白质点应用液相色谱一质谱联用技术(LC-MS)对差异蛋白质点进行质谱鉴定。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示各样品条带清晰,无明显蛋白质丢失,经2-D DIGE分离蛋白质后,蛋白质点重复性较好。OLP患者组和健康对照组唾液差异蛋白质点数平均为(317±71)个,用质谱技术鉴定了重复性较好的4个差异蛋白质点(分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白)在OLP患者唾液中表达量均上调。结论:分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白在OLP患者唾液中高表达可能参与了OLP的发生、发展。
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关键词
口腔扁平苔藓(OLP)
唾液
蛋白质组学
双向荧光差异凝胶电泳(
2
-
d
d
IGE)
液相色谱-质谱技术(
lc
-MS)
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职称材料
凝胶过滤/离子交换全二维液相色谱系统的构建与评价
被引量：
2
2
作者
张政
唐涛
+3 位作者
杨三东
孙元社
李彤
张维冰
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期526-532,共7页
基于蛋白质的尺寸及带电性质,将凝胶过滤色谱(GFC)与离子交换色谱(IEC)两种分离模式结合,采用双捕集柱接口构建了GFC/2×IEC二维液相色谱(2-D LC)分离系统,同时考虑离子交换色谱分离蛋白质对等电点范围的限制,进一步结合中心切割平...
基于蛋白质的尺寸及带电性质,将凝胶过滤色谱(GFC)与离子交换色谱(IEC)两种分离模式结合,采用双捕集柱接口构建了GFC/2×IEC二维液相色谱(2-D LC)分离系统,同时考虑离子交换色谱分离蛋白质对等电点范围的限制,进一步结合中心切割平行柱的方法实现对蛋白质的全二维分离。为与后续蛋白质在线酶解、多肽分离及质谱鉴定匹配,系统中采用常规柱以保证蛋白质质谱鉴定对样品量的要求,3种常规分离柱分别选用凝胶过滤色谱柱TSK-GEL G3000SW_(XL)(300 mm×7.8 mm,5μm)、强阴离子交换色谱柱Hypersil SAX(100 mm×4.6 mm,10μm)和强阳离子交换色谱柱Hypersil SCX(100 mm×4.6 mm,10μm)。最终以酵母细胞蛋白质提取液为样品,对构建的二维系统加以评价,在总蛋白质浓度13.5 mg/mL、上样体积100μL的条件下,将第一维分离等时间切割17次,并将切割馏分全部导入第二维继续分离,二维系统在148 min内获得的总峰容量达到884。说明所构建的系统可以用于蛋白质的在线全二维分离。
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关键词
全二维液相色谱
凝胶过滤色谱
离子交换色谱
强阴离子交换
强阳离子交换
蛋白质
酵母
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职称材料
基于超高效液相色谱-八端口转子阀的微升级预分级系统的建立
被引量：
1
3
作者
燕蒙
赵洋
+2 位作者
张养军
应万涛
钱小红
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期477-483,共7页
复杂生物系统蛋白质组的深度覆盖鉴定得益于近年来快速发展的高效色谱分离和串联质谱分析技术。二维高效液相色谱(2-D HPLC)是实现复杂肽混合物正交分离的有效手段,但其缺点是运行时间长,通常要求肽上样量在毫克级别,且收集时的组分体积...
复杂生物系统蛋白质组的深度覆盖鉴定得益于近年来快速发展的高效色谱分离和串联质谱分析技术。二维高效液相色谱(2-D HPLC)是实现复杂肽混合物正交分离的有效手段,但其缺点是运行时间长,通常要求肽上样量在毫克级别,且收集时的组分体积大,后续合并流程复杂,而有望替代其的StageTip技术,则由于有限的色谱分离梯度,难以达到充分的正交分离。该文探索了超高效液相色谱(UPLC)和八端口转子阀联用,作为高效、便捷肽段预分离和收集系统的可行性。研究结果显示,将UPLC的高pH反相色谱分馏与在线LC-MS/MS相结合,可以实现高pH和低pH条件下基于肽段不同色谱保留行为的正交互补分离,在蛋白质鉴定方面表现出优越的性能。应用该方法对人肝癌细胞系HepG2进行3次技术重复试验,重复试验间具有非常高的定量重现性(决定系数R^2>0.95)。与传统StageTip方法相比,肽段鉴定数提高了23.52%。该分级方法灵活、稳定,能够针对较少的样品开展蛋白质组深度覆盖分析。
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关键词
二维液相色谱
超高效液相色谱
八端口转子阀
蛋白质组学
分馏
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职称材料
题名
应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白
被引量：
5
1
作者
刘铁军
李昆珊
刘健
仇永乐
吴景景
安欣
许彦枝
机构
河北医科大学第四医院口腔科
出处
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第6期793-796,共4页
基金
国家自然科学基金(编号:81273813)
河北省科技厅(编号:12276104D-41)
+2 种基金
河北省中医药管理局(编号:2011013)
河北省卫生厅(编号:20100125
20120126)
文摘
目的:应用双向荧光差异凝胶电泳(2-D DIGE)和质谱技术筛选、鉴定与口腔扁平苔藓(OLP)患者唾液有关的差异蛋白。方法:收集3例OLP患者及3例健康人唾液,提取唾液总蛋白采用2-D DIGE技术分离蛋白质,寻找差异蛋白质点应用液相色谱一质谱联用技术(LC-MS)对差异蛋白质点进行质谱鉴定。结果:SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)显示各样品条带清晰,无明显蛋白质丢失,经2-D DIGE分离蛋白质后,蛋白质点重复性较好。OLP患者组和健康对照组唾液差异蛋白质点数平均为(317±71)个,用质谱技术鉴定了重复性较好的4个差异蛋白质点(分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白)在OLP患者唾液中表达量均上调。结论:分泌型IgAl、锌α-2-糖蛋白、唾液淀粉酶、血清白蛋白在OLP患者唾液中高表达可能参与了OLP的发生、发展。
关键词
口腔扁平苔藓(OLP)
唾液
蛋白质组学
双向荧光差异凝胶电泳(
2
-
d
d
IGE)
液相色谱-质谱技术(
lc
-MS)
Keywords
Oral lichen planus（OLP）
Saliva
Proteomics
2
-
d
d
IGE
liquid
chromatography
-mass spectrometry（
lc
-MS）
分类号
R781.5 [医药卫生—口腔医学]
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职称材料
题名
凝胶过滤/离子交换全二维液相色谱系统的构建与评价
被引量：
2
2
作者
张政
唐涛
杨三东
孙元社
李彤
张维冰
机构
齐齐哈尔大学化学与化学工程学院
大连依利特分析仪器有限公司
华东理工大学上海市功能性材料化学重点实验室
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第5期526-532,共7页
基金
国家重大科学仪器设备开发专项(2012YQ12004406)~~
文摘
基于蛋白质的尺寸及带电性质,将凝胶过滤色谱(GFC)与离子交换色谱(IEC)两种分离模式结合,采用双捕集柱接口构建了GFC/2×IEC二维液相色谱(2-D LC)分离系统,同时考虑离子交换色谱分离蛋白质对等电点范围的限制,进一步结合中心切割平行柱的方法实现对蛋白质的全二维分离。为与后续蛋白质在线酶解、多肽分离及质谱鉴定匹配,系统中采用常规柱以保证蛋白质质谱鉴定对样品量的要求,3种常规分离柱分别选用凝胶过滤色谱柱TSK-GEL G3000SW_(XL)(300 mm×7.8 mm,5μm)、强阴离子交换色谱柱Hypersil SAX(100 mm×4.6 mm,10μm)和强阳离子交换色谱柱Hypersil SCX(100 mm×4.6 mm,10μm)。最终以酵母细胞蛋白质提取液为样品,对构建的二维系统加以评价,在总蛋白质浓度13.5 mg/mL、上样体积100μL的条件下,将第一维分离等时间切割17次,并将切割馏分全部导入第二维继续分离,二维系统在148 min内获得的总峰容量达到884。说明所构建的系统可以用于蛋白质的在线全二维分离。
关键词
全二维液相色谱
凝胶过滤色谱
离子交换色谱
强阴离子交换
强阳离子交换
蛋白质
酵母
Keywords
comprehensive
two-dimensional
liquid
chromatography
（2
-
d
lc）
gel filtration
chromatography
（GFC）
ion exchange
chromatography
（IEC）
strong anion exchange （SAX）
strong cation exchange （SCX）
protein
yeast
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
基于超高效液相色谱-八端口转子阀的微升级预分级系统的建立
被引量：
1
3
作者
燕蒙
赵洋
张养军
应万涛
钱小红
机构
广东药科大学药学院
军事科学院军事医学研究院生命组学研究所蛋白质组学国家重点实验室北京蛋白质组研究中心国家蛋白质科学中心-北京
出处
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2019年第5期477-483,共7页
基金
国家重点研发计划(2017YFC0906600
2016YFA0501300)
+1 种基金
国家自然基金重点项目(81530021)
军事医学创新工程专项(16CXZ027)~~
文摘
复杂生物系统蛋白质组的深度覆盖鉴定得益于近年来快速发展的高效色谱分离和串联质谱分析技术。二维高效液相色谱(2-D HPLC)是实现复杂肽混合物正交分离的有效手段,但其缺点是运行时间长,通常要求肽上样量在毫克级别,且收集时的组分体积大,后续合并流程复杂,而有望替代其的StageTip技术,则由于有限的色谱分离梯度,难以达到充分的正交分离。该文探索了超高效液相色谱(UPLC)和八端口转子阀联用,作为高效、便捷肽段预分离和收集系统的可行性。研究结果显示,将UPLC的高pH反相色谱分馏与在线LC-MS/MS相结合,可以实现高pH和低pH条件下基于肽段不同色谱保留行为的正交互补分离,在蛋白质鉴定方面表现出优越的性能。应用该方法对人肝癌细胞系HepG2进行3次技术重复试验,重复试验间具有非常高的定量重现性(决定系数R^2>0.95)。与传统StageTip方法相比,肽段鉴定数提高了23.52%。该分级方法灵活、稳定,能够针对较少的样品开展蛋白质组深度覆盖分析。
关键词
二维液相色谱
超高效液相色谱
八端口转子阀
蛋白质组学
分馏
Keywords
two-dimensional
liquid
chromatography
(2-
d
lc
)
ultra performance
liquid
chromatography
(UP
lc
)
the eight-port rotor valve
proteomics
fractionation
分类号
O658 [理学—分析化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
应用双向荧光差异凝胶电泳和质谱技术筛选口腔扁平苔藓唾液差异蛋白
刘铁军
李昆珊
刘健
仇永乐
吴景景
安欣
许彦枝
《实用口腔医学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2015
5
在线阅读
下载PDF
职称材料
2
凝胶过滤/离子交换全二维液相色谱系统的构建与评价
张政
唐涛
杨三东
孙元社
李彤
张维冰
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
基于超高效液相色谱-八端口转子阀的微升级预分级系统的建立
燕蒙
赵洋
张养军
应万涛
钱小红
《色谱》
CAS
CSCD
北大核心
2019
1
在线阅读
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职称材料
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