期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到64篇文章
< 1 2 … 4 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
牛多杀性巴氏杆菌OmpA抗原间接ELISA方法的建立 被引量：1
1
作者 王润清 孙航 +4 位作者 孙雨 李歌 李琦 侯晓林 阚威 《中国动物检疫》 2025年第2期87-94,共8页
为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化... 为建立一种快速检测牛多杀性巴氏杆菌的方法,分析多杀性巴氏杆菌OmpA序列信号肽与跨膜疏水区序列,对选择的目的基因片段进行稀有密码子优化,将化学合成后的核苷酸序列连接至pET32a载体上,构建相应的重组质粒pET32a-OmpA;将重组质粒转化至大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞株中,经扩大培养成功诱导表达出了纯度较高的包涵体OmpA蛋白,将OmpA重组蛋白作为诊断抗原,经反应条件优化建立了间接ELISA抗体检测方法。经试验验证,该方法对其他相关的牛类病原无交叉反应,阳性血清稀释度为1:256时仍呈阳性,组内与组间变异系数均低于10%。结果表明,该方法特异性与敏感性较好,且具有良好的重复性与稳定性。本研究为进一步开发成熟的牛多杀性巴氏杆菌抗体检测试剂盒奠定基础。 展开更多
关键词 牛多杀性巴氏杆菌 ompa蛋白 原核表达 蛋白纯化 ELISA
在线阅读 下载PDF
溶血性曼氏杆菌OmpA的原核表达及间接ELISA抗体检测方法的建立
2
作者 尚珂 高远集 +9 位作者 刘畅 代静蕾 丁梦豪 聂孟川 王怡轩 陈松彪 贾艳艳 郭荣显 丁轲 余祖华 《中国预防兽医学报》 北大核心 2025年第4期376-383,共8页
为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司... 为建立一种快速、高效、准确的溶血性曼氏杆菌(MH)抗体的检测方法,本研究采用生物信息学软件对MH外膜蛋白A(OmpA)的理化性质和亲/疏水性、跨膜结构和信号肽进行分析后,利用PCR扩增MH OmpA基因,构建重组表达质粒pET-32a-OmpA,经生物公司测序及酶切鉴定正确后转化大肠杆菌Rosetta感受态细胞,经IPTG诱导重组OmpA蛋白(r OmpA)的表达,SDS-PAGE检测结果显示,在约57 ku处出现目的条带,且rOmpA主要以为包涵体形式表达。rOmpA表达产物经镍柱亲和层析法纯化后利用western blot鉴定,结果显示,在57.03 ku处出现特异性条带,表明r OmpA可与MH阳性血清产生良好的反应原性。以rOmpA作为包被抗原,采用方阵法通过对各反应条件的优化,初步建立MH抗体的间接ELISA检测方法。利用该方法检测多杀性巴氏杆菌、大肠杆菌、鼠伤寒沙门菌、MH-1、MH CVCC4091(A5型)以及MH-2(A1型)阳性血清,结果显示,除MH-1、CVCC4091以及MH-2检测为阳性外,其他细菌阳性血清均为阴性结果,特异性较强。利用该间接ELISA方法检测2倍倍比稀释的待检阳性血清(1:8000~1:512000),结果显示,阳性血清稀释至1:512000时仍为阳性,敏感性较高。将同一批次和不同批次纯化的r OmpA包被ELISA板,按照该ELISA方法检测5份MH阳性血清,分析该方法的重复性。结果显示,批内和批间重复性试验的变异系数均小于10%,表明该方法重复性好。采用建立的间接ELISA方法和间接血凝试验(IHA),对82份临床动物(羊、兔、鼠)血清样品检测,结果显示,间接ELISA检测方法的阳性率为47.6%,阴性率为52.4%;IHA检测方法的阳性率为45.1%,阴性率为54.9%。二者的阳性符合率为94.9%,阴性符合率为95.6%,总符合率为99.3%。另外,从鼠体内检出MH阳性率最高为75.0%,表明本研究建立的间接ELISA方法可以用于临床样品的检测。该检测方法的建立为临床MH抗体的检测提供可靠的技术手段,为MH的流行病学调查等奠定了基础。 展开更多
关键词 溶血性曼氏杆菌5型 外膜蛋白A 原核表达 小鼠 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
猪衣原体ompA基因的原核表达与纯化及其蛋白功能预测
3
作者 李宁倩 禹思宇 +6 位作者 李桐菲 李文超 魏颖 谭建锡 胡忆文 唐连飞 刘伟 《湖南畜牧兽医》 2025年第5期29-33,共5页
为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成... 为了将猪衣原体ompA基因作为目标抗原,为后续建立间接ELISA检测方法提供理论依据,开展了该基因的原核表达与纯化工作,并利用生物信息学方法对ompA蛋白的理化性质、亲疏水性、跨膜区域和抗原表位等进行了分析与预测。结果显示:该研究成功构建了重组质粒,并通过SDS-PAGE和Western blot确认该蛋白以包涵体形式表达,分子量约为27 kDa;该蛋白的预测分子质量为23.31921 kDa,理论等电点为4.37,不含跨膜区,属于亲水性蛋白,含有7个抗原决定簇,平均抗原倾向值为1.0316。结果表明:ompA蛋白具备良好的免疫反应性,是免疫反应中的关键成分,适合作为间接ELISA的包被抗原。该研究为深入理解猪衣原体的致病机制及开发相应的防控技术提供了理论基础。 展开更多
关键词 猪衣原体ompa基因 重组质粒 表达及纯化 Western blot验证 生物信息学预测 间接ELISA
在线阅读 下载PDF
鸭疫里默氏菌OmpA与鸭IL-2融合基因的克隆与原核表达 被引量：2
4
作者 高云航 刘佳丽 +3 位作者 王巍 李秋菊 张福君 马红霞 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2014年第8期42-46,共5页
以鸭疫里默氏菌吉林分离株JL-RA1OmpA基因(登录号HQ707077)和鸭DuIL-2成熟片段基因(登录号AY193713)为模板,分别设计带有linker的特异性引物,PCR扩增出序列大小为1182bp的OmpA-linker基因和序列大小为381bp的linkerDuIL-2成熟蛋白基因... 以鸭疫里默氏菌吉林分离株JL-RA1OmpA基因(登录号HQ707077)和鸭DuIL-2成熟片段基因(登录号AY193713)为模板,分别设计带有linker的特异性引物,PCR扩增出序列大小为1182bp的OmpA-linker基因和序列大小为381bp的linkerDuIL-2成熟蛋白基因。利用SOE-PCR技术,成功构建OmpA-DuIL-2融合基因,片段大小为1551bp。将其转入大肠杆菌表达载体pET-28a中,构建pET-OmpA-DuIL-2融合表达载体,转化至大肠杆菌Rosetta(DE3)中,IPTG诱导表达,经SDS-PAGE分析得到分子量大小约为61 kDa的融合蛋白,经Western-blot分析该融合基因同时具OmpA和DuIL-2的反应原性。 展开更多
关键词 鸭疫里默氏菌 ompa基因 DuIL-2基因 ompa-DuIL-2融合基因 原核表达
在线阅读 下载PDF
副溶血弧菌ompA基因缺失株的生物学特性及致病性分析 被引量：10
5
作者 白雪瑞 王权 +4 位作者 陈永军 万莹 凌娇 王亚磊 蒋蔚 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期902-910,共9页
[目的]外膜蛋白Omp A是一个多功能蛋白,在很多革兰氏阴性菌的环境适应性和致病性过程中发挥重要作用,而副溶血弧菌Omp A的功能尚未见报道。本试验旨在研究omp A基因(VPA1186)对副溶血弧菌生物学特性及致病性的影响。[方法]通过构建副溶... [目的]外膜蛋白Omp A是一个多功能蛋白,在很多革兰氏阴性菌的环境适应性和致病性过程中发挥重要作用,而副溶血弧菌Omp A的功能尚未见报道。本试验旨在研究omp A基因(VPA1186)对副溶血弧菌生物学特性及致病性的影响。[方法]通过构建副溶血弧菌SH112株的omp A基因缺失株和互补株,开展对该基因在细菌生长特性、生物被膜形成、运动性、血清杀菌、细胞黏附、细胞毒性,组织载量以及小鼠致病性等相关生物学特性和致病性的影响研究。[结果]omp A的缺失不影响副溶血弧菌的生长速度、生物被膜形成能力和运动性。野生株和Δomp A的黏附和抗血清试验结果无显著差异。但Δomp A对Caco-2细胞的毒性作用显著低于野生株。小鼠染毒验结果显示,与感染野生株的小鼠相比,感染Δomp A的小鼠症状明显减轻,存活率更高,Δomp A在小鼠血液和肝脏中的带菌量显著低于野生株,而互补株的毒力恢复至野生株水平,表明omp A缺失能显著降低副溶血弧菌的毒力。[结论]omp A与副溶血弧菌的致病性相关,为潜在的毒力因子。 展开更多
关键词 副溶血弧菌 ompa 缺失株 生物学特性 致病性
在线阅读 下载PDF
迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpA原核表达及其免疫原性研究 被引量：9
6
作者 张志强 杨楠 +5 位作者 李永慧 王洪彬 冯东青 吴同垒 史秋梅 朱国强 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期534-537,共4页
为研究迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpA免疫保护性,本研究利用PCR方法扩增迟缓爱德华菌ompA基因,构建重组载体pET-32a-ompA,将其转化大肠杆菌BL21后诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约58 ku;将纯化的重组蛋白... 为研究迟缓爱德华菌外膜蛋白OmpA免疫保护性,本研究利用PCR方法扩增迟缓爱德华菌ompA基因,构建重组载体pET-32a-ompA,将其转化大肠杆菌BL21后诱导表达,表达产物经SDS-PAGE和western blot分析显示,重组蛋白大小约58 ku;将纯化的重组蛋白免疫小鼠后,以迟缓爱德华菌强毒株ET-13攻毒,结果显示该重组蛋白对免疫组小鼠具有保护力,保护率为55%。本研究克隆了迟缓爱德华菌ompA基因并表达了相应重组蛋白,免疫小鼠后能够提供一定保护,为重组OmpA蛋白亚单位疫苗的研制奠定基础。 展开更多
关键词 迟缓爱德华菌 外膜蛋白 ompa 蛋白表达 免疫保护力
在线阅读 下载PDF
奶牛流产鹦鹉热衣原体ompA基因的克隆与原核表达 被引量：6
7
作者 宋竹青 邱昌庆 +6 位作者 周继章 曹小安 蔺国珍 郑福英 宫晓炜 王光华 魏彦明 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期140-143,共4页
目的表达奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因,探索其作为诊断抗原的可能性。方法采用套式PCR方法扩增出了奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因完整片段,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SD... 目的表达奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因,探索其作为诊断抗原的可能性。方法采用套式PCR方法扩增出了奶牛源鹦鹉热衣原体ompA基因完整片段,此扩增产物经过双酶切后克隆到表达载体pGEX-4T-1中,转化大肠杆菌BL21(DE3),经IPTG诱导表达后采用SDS-PAGE和Western-blot检测重组目的蛋白的表达结果。结果重组蛋白经奶牛衣原体阳性血清鉴定正确。结论ompA基因在原核表达系统中得到正确表达。 展开更多
关键词 鹦鹉热衣原体 ompa基因 克隆 原核表达 奶牛
在线阅读 下载PDF
赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22基因的克隆分析及蛋白表达 被引量：6
8
作者 朱海龙 鲍朗 +2 位作者 张会东 王晓樱 李岩 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第4期294-297,共4页
目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序... 目的分析赖型钩端螺旋体OmpA膜蛋白Loa22的结构特征,并对其进行克隆表达。方法分别以问号状赖型钩体017株、56601株及双曲状钩体PatocI株基因组为模板PCR扩增目的基因。构建Loa22基因与质粒pGEX-4T-1的重组原核表达质粒,克隆筛选并测序。利用Bioedit、Dnaman、PSIPRED、NCBI及SignaIP等对其结构进行分析。最后在大肠杆菌JM109中诱导表达目的蛋白。结果不同毒力赖型钩体均能扩增出约600bp的片段,而PatocI株则未能扩增出目的片段;PCR、双酶切及测序证实pGEX-Loa22构建成功:分析显示不同赖型钩体的Loa22的同源性很高,C末端都具有同OmpA一致的保守序列及肽聚糖相关基序,都有信号肽序列;表达产物经SDS-PAGE检测证明是目的蛋白。结论赖型钩体具有编码OmpA膜蛋白的Loa22基因,可能与赖型钩体毒力和免疫原性存在某种相关性。 展开更多
关键词 钩端螺旋体 ompa基因 克隆 表达
在线阅读 下载PDF
11株禽多杀性巴氏杆菌OmpA基因克隆测序及其序列分析 被引量：4
9
作者 高明燕 徐步 +3 位作者 龚建森 王鑫 范建华 刘学贤 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2013年第5期951-956,共6页
为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）OmpA基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的OmpA基因进行扩增，将... 为了解国内禽多杀性巴氏杆菌流行株（Pasteurellamultocida，Pm）OmpA基因的变异情况，参考Gen-Bank中已发表的多杀性巴氏杆菌序列设计一对特异性引物，采用PCR方法对11个禽Pm菌株和3个荚膜型参考株（A，B，D）的OmpA基因进行扩增，将各菌株纯化回收的扩增产物与pMDl8-T载体连接，筛选阳性克隆进行测序。结果表明：14个菌株的OmpA基因开放阅读框在1047～1077bp之间，其中长度为1062bp的有9个菌株；SignalIP4．0预测表明，信号肽均为N端21个氨基酸残基，成熟蛋白氨基酸残基数量在327～332之间，推测的分子量为35．19～36．35kD。与GenBank中12个菌株OmpA基因核苷酸序列比对及遗传进化分析发现，核苷酸同源性为85．3％～100％；氨基酸同源性为83．1％～100％；其中C48—1，1010，9003，890920，921012，xj等6个国内禽Pm分离株OmpA序列同源性为100％。由此可见国内禽Pm菌株OmpA基因非常保守。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompa基因 序列分析 同源性
在线阅读 下载PDF
羊流产嗜衣原体ompA基因克隆及生物信息学分析 被引量：2
10
作者 龙冲冲 江楠 +4 位作者 彭中友 龙胜基 罗意 周碧君 文明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期113-118,共6页
分析羊流产嗜衣原体ompA基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。采用DNA Star、DNA MAN、vector NTI suite11.5序列分析软件和在线网站ExPASy分析该基因的结构和预测其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、一级结构修饰位点、二级结构特... 分析羊流产嗜衣原体ompA基因结构并预测其编码蛋白的结构和功能。采用DNA Star、DNA MAN、vector NTI suite11.5序列分析软件和在线网站ExPASy分析该基因的结构和预测其编码蛋白的理化性质、亚细胞定位、一级结构修饰位点、二级结构特征及三维空间构象、潜在抗原表位等。结果显示,该基因全长1 170 bp,可编码389个氨基酸,编码蛋白理化性质较稳定,无各种亚细胞定位序列,含有多个能被其他酶修饰的位点,该蛋白以无规则卷曲为主,大部分氨基酸残基包埋在分子内部,含5个跨膜区,3个亲水性较强的抗原表位。ompA基因生物信息学分析结果为ompA蛋白功能的深入研究和新型多价疫苗的开发提供了基础数据。 展开更多
关键词 羊流产嗜衣原体 ompa基因 生物信息学分析
在线阅读 下载PDF
鸡肠炎沙门氏菌ompA基因的克隆与表达 被引量：2
11
作者 余波 徐景峨 +1 位作者 王璇 谭诗文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期20-23,共4页
根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经... 根据GenBank中鸡肠炎沙门氏菌ompA基因序列设计1对引物,以鸡肠炎沙门氏菌贵州分离株基因组为模板,扩增鸡肠炎沙门氏菌ompA基因,将其亚克隆到原核表达载体pET-32a(+)中,构建重组表达质粒pET-32a-ompA,转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞,经IPTG诱导,实现了鸡肠炎沙门氏菌ompA蛋白在大肠杆菌中的表达。SDS-PAGE分析结果表明,该重组蛋白的分子质量约为55 ku,可溶性分析结果表明表达蛋白大部分以包涵体形式存在。Western blotting分析结果表明,该重组蛋白具备免疫原性。 展开更多
关键词 鸡 肠炎沙门氏菌 ompa基因 原核表达
在线阅读 下载PDF
抗生素耐药性大肠杆菌外膜蛋白mOmpA N端序列分析 被引量：1
12
作者 赵志平 聂鑫 +3 位作者 李再新 丁杰 张智 谢万如 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期155-159,共5页
从抗生素耐药大肠杆菌中克隆了mOmpA(突变OmpA)并构建表达载体pET32a-mOmpA。序列比对分析表明,mOmpA N端与OmpA N端DNA序列同源性为79.93%,氨基酸同源性为81.17%。Swiss-Model蛋白结构预测表明,mOmpA loop环的方向发生了显著变化。研... 从抗生素耐药大肠杆菌中克隆了mOmpA(突变OmpA)并构建表达载体pET32a-mOmpA。序列比对分析表明,mOmpA N端与OmpA N端DNA序列同源性为79.93%,氨基酸同源性为81.17%。Swiss-Model蛋白结构预测表明,mOmpA loop环的方向发生了显著变化。研究结果有助于进一步了解大肠杆菌OmpA的结构和功能以及大肠杆菌耐药机制。 展开更多
关键词 抗生素耐药 外膜蛋白 ompa 大肠杆菌 突变
在线阅读 下载PDF
禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗免疫效果的研究 被引量：2
13
作者 宫强 王帅涛 +5 位作者 秦翠丽 牛明福 程茗 侯玉泽 张勇法 孙晓菲 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第5期454-458,共5页
目的：研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果。方法：PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1（＋）上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情... 目的：研究禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗在鸡体内诱导的免疫保护效果。方法：PCR扩增禽多杀性巴氏杆菌的ompa基因片段,克隆入pcDNA3.1（＋）上,构建重组质粒pOMPA,体外转染SP2/0细胞,RT-PCR和免疫荧光试验检测目的基因的转录及表达情况。动物免疫共分四组：pOMPA组、弱毒疫苗组、pCDNA3.1（＋）空载体组和PBS对照组,每组15只4周龄鸡,除弱毒疫苗组外其他三组均肌注免疫三次,每次间隔两周,弱毒疫苗组仅首免时肌注1羽份/每只鸡。间接ELISA检测免疫后血清特异性抗体水平,MTT法检测免疫鸡外周血淋巴细胞增殖情况,双抗夹心ELISA检测IFN~γ分泌情况,强毒攻击,计算免疫鸡存活数目及保护率。结果：体外转染检测结果表明pOMPA可在体外培养的细胞中表达目的蛋白。动物免疫后,DNA疫苗组和弱毒疫苗组血清抗体水平持续上升,与两对照组相比差异极显著（P〈0.01）,且弱毒疫苗组血清抗体水平明显高于DNA疫苗组（P〈0.05）。经提取的外膜蛋白（Omps）诱生后,两疫苗组的SI值极显著高于pCDNA3.1（＋）组和PBS免疫组（P〈0.01）,两疫苗组之间则无差别。两疫苗组免疫鸡外周血淋巴细胞产生的IFNγ-极显著高于两对照组（P〈0.01）。强毒攻击后DNA疫苗组和弱毒疫苗组的保护率分别为60%和73.3%。结论：成功构建了禽多杀性巴氏杆菌OmpA DNA疫苗,该疫苗为动物提供一定的免疫保护力,但不够理想。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompaDNA疫苗 免疫应答 保护效果
在线阅读 下载PDF
牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA的原核表达及免疫活性分析 被引量：1
14
作者 亓英芳 黄瑛 +6 位作者 杜艳芬 刘慧芳 赫明雷 司微 倪洪波 王春来 刘思国 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第4期43-46,共4页
为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中... 为验证牛分枝杆菌外膜蛋白A是否具有免疫活性,以牛分枝杆菌ValleeⅢ株基因组DNA为模板扩增牛分枝杆菌外膜蛋白基因ompA,采用DNA重组技术将此基因片段连于表达载体pGEX6p-1,构建重组质粒pGEX6p-1-ompA,并将其转化到大肠杆菌中BL21(DE3)中,IPTG诱导(终浓度为0.1mmol/L),表达产物进行SDS-PAGE分析。用glutathione sepharose4B纯化蛋白和Western blot分析该蛋白的免疫学活性。结果表明:pGEX6p-1-ompA以可溶形式表达,蛋白分子量大小为60kDa,与预计大小相符,纯化的蛋白具有良好的免疫学活性。 展开更多
关键词 牛分枝杆菌 外膜蛋白ompa 原核表达 纯化 WESTERNBLOT
在线阅读 下载PDF
1型鸭疫里氏杆菌的分离鉴定及其ompA基因B细胞表位预测 被引量：1
15
作者 余波 徐景峨 +1 位作者 王璇 谭诗文 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2012年第12期51-55,共5页
本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌o... 本研究从贵州发病鸭中分离到1株致病菌,经生化试验、16S rRNA序列分析、血清学试验和动物回归试验,鉴定为1型鸭疫里氏杆菌(RA),药敏试验结果表明,其对头孢拉定、头孢曲松钠、头孢噻肟和氟苯尼考高度敏感;同时根据GenBank中鸭疫里氏杆菌ompA基因序列,设计1对引物,成功克隆出鸭疫里氏杆菌ompA基因,扩增产物大小为1149 bp。采用DNAStar Protean程序,综合运用二级结构、亲水性、可塑性和抗原性指数等参数,对鸭疫里氏杆菌ompA基因的氨基酸序列进行了B细胞表位预测,为进一步研究鸭疫里氏杆菌表位疫苗和分子诊断技术的建立奠定基础。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 ompa基因 B细胞表位预测
在线阅读 下载PDF
奶牛衣原体ompA基因的克隆及序列分析 被引量：1
16
作者 宋竹青 魏彦明 +3 位作者 周继章 曹小安 王光华 邱昌庆 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第3期6-9,15,共5页
以流产奶牛肝组织块内提取的基因组DNA为模板,根据GenBank数据库中的衣原体ompA基因序列设计2对引物,采用套式PCR进行扩增.PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:ompA基因的... 以流产奶牛肝组织块内提取的基因组DNA为模板,根据GenBank数据库中的衣原体ompA基因序列设计2对引物,采用套式PCR进行扩增.PCR产物经纯化后连接到pMD18-T载体,转化至大肠杆菌DH5α后,进行序列测定和生物信息学分析.结果表明:ompA基因的开放阅读框架全长1 170 bp,编码由389个氨基酸组成的多肽,理论分子质量为41.9 ku,等电点为7.61;SMART分析表明,ompA基因编码的氨基酸中,1-22位氨基酸为信号肽序列,另外还有7个保守的半胱氨酸残基形成二硫键;BLAST同源性分析表明,ompA基因的核苷酸序列与已发表的衣原体ompA序列的同源性均达到了98%以上. 展开更多
关键词 奶牛衣原体ompa克隆 序列分析
在线阅读 下载PDF
鸭疫里氏杆菌吉林分离株16S rRNA系统分析及其OmpA基因克隆 被引量：1
17
作者 高云航 刘佳丽 +3 位作者 王巍 徐凤宇 张福君 马红霞 《中国兽药杂志》 2013年第6期9-13,共5页
为研究鸭疫里氏杆菌(RA)16S rRNA变异与OmpA基因之间的关系,提取了RA吉林分离株JL-RA1和JL-RA3总DNA,并设计特异性引物扩增两株RA保护性抗原OmpA全基因序列。结果显示,扩增出的16S rRNA序列大小均为1478 bp,OmpA片段序列大小均为1164 bp... 为研究鸭疫里氏杆菌(RA)16S rRNA变异与OmpA基因之间的关系,提取了RA吉林分离株JL-RA1和JL-RA3总DNA,并设计特异性引物扩增两株RA保护性抗原OmpA全基因序列。结果显示,扩增出的16S rRNA序列大小均为1478 bp,OmpA片段序列大小均为1164 bp,与预期结果一致。扩增的16S rRNA与GenBank中已知的RA 16S rRNA序列同源性高达99.0%～99.9%,扩增的OmpA序列与GenBank中已知的RA OmpA序列同源性达93.3%～100%,编码蛋白质的氨基酸序列同源性为96%～100%。 展开更多
关键词 鸭疫里氏杆菌 16SRRNA基因 ompa基因 系统进化分析
在线阅读 下载PDF
禽多杀性巴氏杆菌ompa基因在Vero细胞中的表达
18
作者 宫强 牛明福 +4 位作者 秦翠丽 张敏 孙晓菲 王帅涛 程铭 《中国家禽》 北大核心 2010年第8期24-27,共4页
利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),将该重组质粒体外转染Vero细胞,检测其转录和表达情况。结果表明重组质粒pCA构建成功... 利用PCR技术扩增出禽多杀性巴氏杆菌1 050 bp的ompa基因片段,克隆到pUCm-T载体上,再亚克隆到真核载体pcDNA3.1(+)上,构建重组质粒pCA(pcDNA3.1-OmpA),将该重组质粒体外转染Vero细胞,检测其转录和表达情况。结果表明重组质粒pCA构建成功,通过RT-PCR由转染了重组质粒的Vero细胞中扩增出了目的条带,间接免疫荧光试验分析表明在转染了pCA的Vero细胞中出现绿色荧光,Western blotting分析显示重组质粒pCA转染的Vero细胞泳道出现约37.5 ku的特异条带,说明ompa基因在Vero细胞中成功表达了活性蛋白,从而为进一步研究禽多杀性巴氏杆菌ompa DNA疫苗的免疫效果奠定了基础。 展开更多
关键词 禽多杀性巴氏杆菌 ompa基因 RT—PCR 间接免疫荧光试验
在线阅读 下载PDF
兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株ompA基因表达与免疫原性鉴定
19
作者 徐为中 王芳 +6 位作者 胡波 范志宇 魏后军 宋艳华 薛家宾 仇汝龙 刘星 《安徽农业科学》 CAS 2015年第35期227-228,237,共3页
[目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-... [目的]研究兔源多杀性巴氏杆菌C_(51-17)株omp A基因表达与蛋白免疫原性鉴定。[方法]根据Gen Bank公布的多杀性巴氏杆菌序列AE004439设计引物,经PCR扩增出兔源多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A基因,开放阅读框包含1 062 bp碱基,插入到p GEX-6p-1质粒,构建成功重组表达载体p GEX-domp A,转入大肠杆菌BL21,经IPTG诱导高效表达出多杀性巴氏杆菌成熟重组外膜蛋白omp A。[结果]表达产物经SDS-PAGE分析,重组多杀性巴氏杆菌外膜蛋白omp A分子量在63 ku,Western blot分析显示,重组蛋白能与兔抗多杀性巴氏杆菌高免血清呈现免疫反应,表明表达的重组蛋白具有较好的免疫活性。[结论]获得的重组蛋白为家兔多杀性巴氏杆菌病诊断试剂盒和疫苗的进一步研究奠定基础。 展开更多
关键词 兔多杀性巴氏杆菌 ompa 原核表达
在线阅读 下载PDF
猪流行性腹泻病毒N-E.coli OmpA融合基因构建、表达及其免疫原性评价
20
作者 沈学怀 汪洁茹 +8 位作者 尹磊 周学利 赵瑞宏 潘孝成 戴银 殷冬冬 张丹俊 胡晓苗 侯宏艳 《养猪》 2022年第3期115-120,共6页
为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白,试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌(E.coli)OmpA蛋白基因进行融合,采用柔性linker联接,得到OmpA-linker-PEDV N融合基因,并克隆至pCold I质粒,构建重组质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV ... 为获得免疫原性更强的猪流行性腹泻病毒(PEDV)结构蛋白,试验将PEDV N蛋白基因和大肠杆菌(E.coli)OmpA蛋白基因进行融合,采用柔性linker联接,得到OmpA-linker-PEDV N融合基因,并克隆至pCold I质粒,构建重组质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N。重组质粒转入BL21感受态细胞,SDS-PAGE分析重组质粒的表达,并对其编码的融合蛋白进行二级和三级结构预测。Western-blot和ELISA分析融合蛋白的免疫原性。结果表明:构建了融合基因表达质粒pCold I-OmpA-linker-PEDV N,表达了约88 ku的融合蛋白;融合蛋白的二级结构未发生明显变化,三级结构预测可折叠为正确的空间构像。该融合蛋白同时具有PEDV N蛋白和OmpA蛋白的免疫原性,并且其免疫原性显著高于单一PEDV N蛋白。说明试验获得了免疫原性较好的融合基因表达蛋白,可以为PEDV N蛋白功能研究、特异性抗体制备以及PEDV亚单位疫苗的研制提供材料和研究基础。 展开更多
关键词 PEDV N基因 E.coli ompa基因 基因融合 基因表达 免疫原性
在线阅读 下载PDF
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 2 … 4 下一页 到第 页
关于我们 | 版权声明 | 联系我们 | 帮助中心| 意见反馈
主办单位：上海市教育委员会
技术支持：重庆维普资讯有限公司
渝公网安备 50019002500403号
使用帮助 返回顶部