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热休克反应对氧化应激所致nucleolin裂解的影响 被引量:3
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作者 王慷慨 蒋磊 +7 位作者 易宇欣 刘可 鄂顺梅 唐道林 王建设 石永忠 王秋鹏 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期504-508,共5页
观察热休克反应对氧化应激 (0 .5mmol/LH2 O2 )诱导细胞凋亡发生时nucleolin(C2 3)裂解的影响并探讨其机制。方法 :采用caspase 3活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 2 6 4 .7巨噬细胞及K5 6 2白血病细胞... 观察热休克反应对氧化应激 (0 .5mmol/LH2 O2 )诱导细胞凋亡发生时nucleolin(C2 3)裂解的影响并探讨其机制。方法 :采用caspase 3活性定量分析及免疫印迹技术检测氧化应激诱导的原代心肌细胞、RAW 2 6 4 .7巨噬细胞及K5 6 2白血病细胞凋亡及C2 3的裂解 ;通过热休克反应观察热休克反应对C2 3裂解的影响。结果 :0 .5mmol/LH2 O2处理细胞 2hcaspase 3活性显著升高 ,12h达高峰。免疫印迹结果显示上述各种细胞的C2 3蛋白均发生了裂解 (有 80kD裂解片断出现 ) ,而且最早出现裂解片段的时间都在H2 O2 处理 30min到 1h左右 ;同时热休克反应通过诱导HSP70 ,HSP2 5等应激蛋白表达而显著减少氧化应激所致C2 3的裂解。结论 :氧化应激诱导凋亡发生的同时也引起C2 3的裂解 ;热休克反应显著抑制氧化应激所致C2 3的裂解 。 展开更多
关键词 热休克反应 氧化应激 诱导 CASPASE-3 观察 表达 影响 细胞 H2O2 片段
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Vero细胞nucleolin和fibrillarin基因的克隆及序列分析
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作者 石达 陈建飞 +7 位作者 时红艳 王洪峰 张鑫 刘孝珍 张莎 刘随心 王璐 冯力 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第10期830-832,共3页
为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度... 为克隆及分析Vero细胞的nucleolin和fibrillarin基因,本研究根据人类的相关基因设计两对引物,从Vero E6细胞中扩增nucleolin和fibrillarin基因。测序结果显示nucleolin基因序列长度为2 139 bp,编码712个氨基酸;fibrillarin基因序列长度为969 bp,编码322个氨基酸。与GenBank中登录的人类相应序列相似性高达97%,处于同一进化分支,表明该基因具有种属特异性并且保守性很高;同时利用软件对nucleolin和fibrillarin预测蛋白进行了生物信息学分析,从而为研究冠状病毒核蛋白与核仁蛋白相互作用奠定了基础。 展开更多
关键词 核仁素 纤维蛋白 克隆 序列分析
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下调核仁素表达对急性髓系白血病Kasumi-1细胞生物学行为的影响
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作者 刘慧丽 徐文鑫 +1 位作者 蔡阳艳 李鸿梅 《中国实验血液学杂志》 北大核心 2025年第5期1312-1317,共6页
目的:探讨核仁素(NCL)在急性髓系白血病Kasumi-1细胞中的作用及其潜在机制。方法:通过携带NCL shRNA的慢病毒感染Kasumi-1细胞,下调NCL表达。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,转录组二代测序预测... 目的:探讨核仁素(NCL)在急性髓系白血病Kasumi-1细胞中的作用及其潜在机制。方法:通过携带NCL shRNA的慢病毒感染Kasumi-1细胞,下调NCL表达。采用CCK-8法检测各组细胞的增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡和周期情况,转录组二代测序预测关联信号通路,RT-PCR检测通路相关基因的表达水平。结果:下调NCL的表达显著抑制Kasumi-1细胞的增殖(P<0.01),并显著提高细胞的凋亡率(P<0.05)。细胞周期检测发现,NCL下调后,Kasumi-1细胞在G_(1)期和S期的分布发生显著变化(P<0.05),而G_(2)期的细胞分布未见明显差异(P>0.05)。转录组二代测序分析显示,NCL低表达的Kasumi-1细胞中差异表达基因主要富集在核糖体、剪接体、RNA转运、细胞周期和氨基酸生物合成等关键信号通路上。RT-PCR验证表明,BAX、CASP3、CYCS、PMAIP1、TP53和CD-KN1A等基因在NCL下调后表达显著上调(P<0.05),其中CDKN1A的表达差异最为显著。结论:NCL在Kasumi-1细胞的增殖、凋亡和细胞周期调控中发挥重要作用,其可能通过激活TP53-CDKN1 A通路抑制细胞周期进程,并通过上调凋亡相关基因促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 核仁素 急性髓系白血病 TP53-CDKN1 A通路
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NOL6介导核糖体生成调节内皮细胞功能障碍影响高血压进展的机制
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作者 胡晓咏 杨朝颖 +4 位作者 宋乾华 李红建 吕忠英 唐瑞 张颖 《西安交通大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第4期641-649,共9页
目的探讨核仁蛋白6(NOL6)在高血压发生和发展中的作用及其调控核糖体生成的机制。方法基于GEO数据库(高血压相关的芯片数据集GSE212338)筛选差异表达基因,结合核糖体生成相关的基因进行交集分析获取高血压中核糖体生成相关基因。将大鼠... 目的探讨核仁蛋白6(NOL6)在高血压发生和发展中的作用及其调控核糖体生成的机制。方法基于GEO数据库(高血压相关的芯片数据集GSE212338)筛选差异表达基因,结合核糖体生成相关的基因进行交集分析获取高血压中核糖体生成相关基因。将大鼠分为对照(Control)组和模型组(L-NAME组),利用N-硝基L-精氨酸甲酯(L-NAME)诱导构建高血压大鼠模型,HE染色观察各组主动脉壁的厚度及病理变化。qPCR检测大鼠主动脉组织中核糖体RNA(rRNA)表达以反映核糖体生成情况,Western blotting检测NOL6蛋白表达。培养人脐静脉内皮细胞(HUVEC)并将细胞分组处理(Control组、AngⅡ组、AngⅡ+si-NC组、AngⅡ+si-NOL6组和AngⅡ+CX-5461组),EU检测HUVEC中新生RNA合成情况,Western blotting和qPCR检测HUVEC中NOL6蛋白和mRNA表达;Western blotting检测内皮型一氧化氮合酶(eNOS)及磷酸化eNOS(p-eNOS)蛋白表达。结果结合GEO高血压数据集GSE212338的基因表达分析及核糖体生成基因集,鉴定出6个在高血压中表达显著改变且与核糖体生成相关的核心基因,其中NOL6差异最显著。L-NAME组大鼠主动脉壁厚度较Control组显著增加;rRNA表达显著上调,NOL6蛋白和mRNA表达显著上调。HUVEC实验中,AngⅡ组细胞的NOL6蛋白和mRNA、rRNA水平、新生RNA合成较Control组显著增加,较AngⅡ+si-NC组显著下调。与AngⅡ+si-NOL6组相比,AngⅡ+si-NC组和AngⅡ+CX-5461组细胞的NOL6蛋白及mRNA表达显著升高;与AngⅡ+si-NC组相比,AngⅡ+si-NOL6组和AngⅡ+CX-5461组的rRNA、新生RNA合成显著降低,eNOS及p-eNOS蛋白表达均显著增加。结论NOL6与高血压中核糖体生成异常相关,NOL6可通过调控核糖体生成影响eNOS表达,进而调节高血压的发生和发展。 展开更多
关键词 核仁蛋白6(NOL6) 核糖体生成 高血压 内皮细胞 内皮型一氧化氮合酶(eNOS)
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核仁素和Ki-67在口腔鳞癌与癌前病变中的表达及意义 被引量:6
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作者 郭钰英 蒙国照 钱成明 《口腔医学研究》 CAS CSCD 北大核心 2011年第11期974-977,共4页
目的:探讨核仁素和ki-67在口腔正常黏膜(Normal oral mucosa,NOM)、口腔黏膜白斑(Leukoplakia,LK)和口腔鳞状细胞癌组织(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中表达的变化,研究核仁素在口腔癌发病中的表达及其临床意义。方法:采用免疫... 目的:探讨核仁素和ki-67在口腔正常黏膜(Normal oral mucosa,NOM)、口腔黏膜白斑(Leukoplakia,LK)和口腔鳞状细胞癌组织(Oral Squamous Cell Carcinoma,OSCC)中表达的变化,研究核仁素在口腔癌发病中的表达及其临床意义。方法:采用免疫组织化学PV法检测10例NOM、34例LK伴异常增生上皮和47例OSCC组织中核仁素及Ki-67的表达。采用SPSS17.0进行统计分析。结果:光镜下核仁素和Ki-67的阳性部位为细胞核,但核仁素在OSCC的部分细胞的胞浆和/或胞膜亦有阳性表达。核仁素和Ki-67在NOM,LK,OSCC的表达强度依次增高,差异有显著性(P<0.05)。核仁素和Ki-67随着LK和OSCC的病理分级升高表达强度逐渐升高;核仁素和Ki-67在OSCC的分化(高分化比中低分化)差异均有显著性(P<0.05)。其中,核仁素在NOM和OSCC,NOM和LK,OSCC浸润肌层差异均有显著性(P<0.05)。Ki-67在NOM和OSCC,LK与OSCC差异有显著性(P<0.05)。核仁素和Ki-67在淋巴结转移,性别,年龄,民族,吸烟,饮酒表达差异无显著性。经Spearman相关分析,核仁素和Ki-67在NOM,LK和OSCC病理分级表达的阳性率中分布呈正相关(r=0.90,P<0.05)。结论:核仁素可能参与OSCC的发生、发展,且与其亚细胞定位的变化有一定关系,在OSCC发生浸润方面有较高的敏感性。其与Ki-67一样可以作为细胞增殖的一个指标。 展开更多
关键词 核仁素/nucleolin KI-67 口腔鳞癌/OSCC
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核仁素表达下调对C_2C_(12) 细胞增殖与凋亡的影响 被引量:7
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作者 王慷慨 蒋磊 +4 位作者 鄂顺梅 刘可 张玲莉 刘梅冬 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期125-129,共5页
目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞... 目的:探讨核仁素反义寡核苷酸对细胞增殖与凋亡的影响。方法:采用反义寡核苷酸技术以抑制CC12细胞中核仁素的表达后,用MTT法检测细胞增殖状况,流式细胞术及DNA琼脂糖凝胶电泳检测细胞凋亡。结果:免疫印迹结果显示,反义寡核苷酸导入细胞后24h,核仁素的表达受到明显抑制,同时反义寡核苷酸处理组细胞的增殖能力亦明显受到抑制,细胞凋亡百分率显著升高,并能检测到清晰的“梯状条带”。而正义及随机核酸导入细胞后不能降低核仁素的表达,对细胞增殖及凋亡均无明显影响。结论:核仁素表达下调能抑制C2C12细胞增殖并能触发C2C12细胞凋亡。 展开更多
关键词 细胞增殖 表达下调 核仁素 C2C12细胞凋亡 反义寡核苷酸技术 MTT法检测 凝胶电泳检测 流式细胞术 免疫印迹 增殖能力 抑制 琼脂糖 DNA 24h 组细胞 酸处理 百分率 导入
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核仁素对LPS诱导的白细胞介素1β释放的影响 被引量:7
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作者 张彬 肖献忠 +2 位作者 张文辉 蒋磊 蒋碧梅 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1796-1800,共5页
目的:探讨核仁素在脂多糖(LPS)所致炎症模型中的表达及其对LPS所致的白细胞介素1β(IL-1β)释放的影响。方法:小鼠腹腔注射LPS(15mg/kg)建立内毒素血症模型,LPS(500μg/L)处理建立RAW264.7细胞炎症模型,采用免疫印迹观察核仁素在炎症模... 目的:探讨核仁素在脂多糖(LPS)所致炎症模型中的表达及其对LPS所致的白细胞介素1β(IL-1β)释放的影响。方法:小鼠腹腔注射LPS(15mg/kg)建立内毒素血症模型,LPS(500μg/L)处理建立RAW264.7细胞炎症模型,采用免疫印迹观察核仁素在炎症模型中的表达。利用瞬时转染技术抑制或增加RAW264.7细胞内核仁素表达后,LPS处理,酶联免疫吸附实验(ELISA)检测细胞培养基中IL-1β的含量。结果:在内毒素血症小鼠的肺组织和RAW264.7细胞炎症模型中,110kD核仁素表达上调,80kD核仁素片段表达减少。与转空载体对照组比较,核仁素过表达组LPS所致的IL-1β释放明显增加(P<0.05);与正常细胞组和随机寡核苷酸组比较,核仁素低表达组LPS所致的IL-1β释放明显减少(P<0.05)。结论:在LPS所致的炎症模型中,110kD核仁素表达上调,80kD核仁素片段表达减少;核仁素促进LPS所致的IL-1β释放。 展开更多
关键词 核仁素 LPS类 白细胞介素1Β RAW264.7细胞 小鼠
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核仁素表达量增高与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变的病理分级正相关 被引量:8
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作者 蒙国照 资源 +2 位作者 李红全 黄铭 高婷 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1511-1514,共4页
目的比较核仁素在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织表达的差异,探讨核仁素表达增高在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法用免疫组化检测50例宫颈鳞癌、65例宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中核仁素的表达,比较核仁素在3种组织中表达... 目的比较核仁素在宫颈鳞癌、宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织表达的差异,探讨核仁素表达增高在宫颈鳞癌发生发展中的作用。方法用免疫组化检测50例宫颈鳞癌、65例宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织中核仁素的表达,比较核仁素在3种组织中表达的差异,并分析核仁素表达水平与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变病理分级的关系。结果宫颈鳞癌核仁素阳性表达率显著高于宫颈上皮内瘤变和正常宫颈组织,宫颈上皮内瘤变核仁素阳性表达率显著高于正常宫颈组织,P<0.01。Allred免疫组化半定量评分显示,核仁素表达量在宫颈鳞癌组织(7.6±0.3)显著高于宫颈上皮内瘤变(6.1±0.2)和正常宫颈组织(3.0±0.2),P<0.01。在宫颈上皮内瘤变显著高于正常宫颈组织,P<0.01。核仁素表达量在中-低分化宫颈鳞癌(7.9±0.1)显著高于高分化鳞癌(7.0±0.2),在高级别上皮内瘤变(6.0±0.1)显著高于低级别上皮内瘤变组织(4.0±0.2),P<0.01。结论宫颈鳞状上皮在癌变过程中核仁素表达量增高,核仁素表达量增高与宫颈鳞癌和宫颈上皮内瘤变的病理分级呈正相关。 展开更多
关键词 核仁素 CIN 宫颈鳞癌
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核仁素对小鼠糖尿病性心肌病心肌肥大与纤维化发生的影响 被引量:5
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作者 吕青兰 孙丽 +5 位作者 蒋碧梅 刘艳娟 李媛彬 陈广文 刘梅冬 肖献忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期1231-1236,共6页
目的:阐明核仁素在小鼠糖尿病性心肌病中的作用。方法:前期研究中我们采用了心肌特异性过表达核仁素转基因小鼠制备了Ⅱ型糖尿病性心肌病模型;实验分为野生型对照组、转基因对照组、野生型糖尿病组及转基因糖尿病组。采用麦胚凝集素(whe... 目的:阐明核仁素在小鼠糖尿病性心肌病中的作用。方法:前期研究中我们采用了心肌特异性过表达核仁素转基因小鼠制备了Ⅱ型糖尿病性心肌病模型;实验分为野生型对照组、转基因对照组、野生型糖尿病组及转基因糖尿病组。采用麦胚凝集素(wheat germ agglutinin,WGA)荧光染色检测小鼠心肌肥大情况;采用Masson三色染色检测小鼠纤维化情况;采用Power Lab system检测小鼠心肌功能变化。结果:与对照组比较,转基因糖尿病组小鼠的血糖值变化不明显,心肌细胞肥大显著减轻,胶原纤维生成显著减少,血流动力学指标±dp/dtmax、左室舒张末压、左室峰压和心率均有不同程度的改善,且差异具有统计学意义。结论:核仁素可能通过减轻糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞肥大及纤维化的发生,从而改善糖尿病性心肌病小鼠的心功能。 展开更多
关键词 糖尿病性心肌病 核仁素 心肌肥大 纤维化 转基因小鼠
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核仁素的表达定位和定量与前列腺癌演变的关系 被引量:4
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作者 蒙国照 丁宇 +2 位作者 高双全 李静 范丽萍 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1310-1313,共4页
目的探讨前列腺癌和非癌组织中核仁素表达定量和定位的差异,及核仁素表达的增高和核外迁移对鉴别诊断前列腺癌和非癌组织的价值。方法用免疫组化SP法检测50例前列腺癌组织和50例非癌组织中核仁素的表达,分析前列腺癌组织和非癌组织中核... 目的探讨前列腺癌和非癌组织中核仁素表达定量和定位的差异,及核仁素表达的增高和核外迁移对鉴别诊断前列腺癌和非癌组织的价值。方法用免疫组化SP法检测50例前列腺癌组织和50例非癌组织中核仁素的表达,分析前列腺癌组织和非癌组织中核仁素表达定量和定位的差异,并比较核仁素与p504S和p63在前列腺癌中表达的相关性,分析前列腺癌中核仁素表达定量与癌组织Gleason评分的关系。结果前列腺癌和非癌组织中细胞核均表达核仁素;前列腺癌胞质和胞膜核仁素的阳性表达率(90%)明显高于癌旁正常前列腺组织(5%)、前列腺增生症(13%)和前列腺上皮内瘤变(20%)(P<0.01)。Allred半定量分析显示,前列腺癌组织中核仁素表达量(7.7±0.3)高于癌旁正常前列腺组织(3.9±0.2)、前列腺增生症(4.0±0.4)和前列腺上皮内瘤变(5.5±0.2)(P<0.01)。在前列腺癌中,核仁素胞质阳性表达与癌细胞p504S的阳性表达呈正相关,与基底细胞p63的阳性表达呈负相关(P<0.01)。前列腺癌中核仁素表达定量与Gleason评分呈正相关(P<0.01)。结论前列腺在癌变过程中核仁素表达增高,并出现核外迁移;核仁素的核外迁移是前列腺癌变的重要标志,前列腺癌中核仁素表达量的增高提示患者预后差。 展开更多
关键词 前列腺肿瘤 核仁素 免疫组织化学
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新型光动力学疗法联合核仁素沉默对宫颈癌SiHa细胞的光动力学效应 被引量:4
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作者 刘洪丽 吕昌帅 +3 位作者 丁佰娟 王颉 李姗 张友忠 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期748-752,I0002,共6页
目的:研究新型光敏剂阳离子卟啉(TMPyP4)介导的光动力学疗法(PDT)联合人核仁素基因沉默对人宫颈癌SiHa细胞的体外抑瘤效应,探讨有效的宫颈癌联合治疗方案。方法:SiHa细胞分为空白对照组、RNAi组、PDT组和联合治疗组(PDT-RNAi组)。采用... 目的:研究新型光敏剂阳离子卟啉(TMPyP4)介导的光动力学疗法(PDT)联合人核仁素基因沉默对人宫颈癌SiHa细胞的体外抑瘤效应,探讨有效的宫颈癌联合治疗方案。方法:SiHa细胞分为空白对照组、RNAi组、PDT组和联合治疗组(PDT-RNAi组)。采用细胞增殖及细胞毒性检测试剂盒(CCK8)法检测各组细胞增殖活性;采用流式细胞术定量检测各组细胞凋亡率;采用Tranwell实验检测各组细胞侵袭能力。结果:与空白对照组比较,RNAi组、PDT组和PDT-RNAi组细胞的生长抑制率明显升高(P<0.01);PDT-RNAi组细胞生长抑制率明显高于RNAi组和PDT组(P<0.05),Q值等于1.27。与空白对照组比较,各实验组细胞凋亡率增加(P<0.05),PDT-RNAi组晚期细胞凋亡率明显增加,PDT-RNAi组细胞凋亡率与RNAi组和PDT组比较差异也有统计学意义(P<0.05)。与空白对照组比较,各实验组细胞侵袭性均减弱(P<0.05);PDT-RNAi组细胞侵袭性减弱最为显著,且与RNAi组和PDT组比较差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:新型PDT对SiHa细胞具有良好的体外光动力效应,可抑制宫颈癌SiHa细胞的增殖和侵袭,促进其凋亡。核仁素基因沉默对SiHa细胞的PDT具有协同增效作用,PDT联合核仁素沉默可能成为治疗肿瘤的新方案。 展开更多
关键词 宫颈肿瘤 SIHA细胞 新型光动力疗法 核仁素沉默 抗肿瘤效应
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膜表面核仁素对脂多糖所致TNF-α和IL-1β表达的影响 被引量:3
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作者 方立 王慷慨 +5 位作者 蒋磊 蒋碧梅 韦星 宋岚 邓恭华 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第11期999-1004,共6页
目的:观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖(LPS)所致TNF-α和IL-1β表达的影响。方法:采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达。利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转... 目的:观察人THP-1细胞膜表面核仁素对脂多糖(LPS)所致TNF-α和IL-1β表达的影响。方法:采用免疫荧光、免疫印迹等方法观察核仁素在THP-1细胞膜表面表达。利用抗体封闭策略使膜表面核仁素失活,以LPS刺激THP-1细胞的炎症细胞模型,采用逆转录PCR和酶联免疫吸附实验观察炎症因子TNF-α和IL-1β的表达与分泌。结果:免疫荧光结果显示核仁素呈斑点状位于细胞膜表面;免疫印迹检测显示核仁素和Fas存在于THP-1细胞膜蛋白中。逆转录PCR结果显示LPS(1000μg/L)处理1,2,3,4h后,IL-1β和TNF-α mRNA均表达上调,而核仁素抗体封闭明显抑制二者的表达。酶联免疫吸附检测发现,LPS(1mg/L)刺激4,12,24h后,促进THP-1细胞分泌TNF-α和IL-1β,而核仁素抗体封闭显著抑制LPS所致的炎症因子释放(P<0.05)。结论:THP-1细胞膜表面核仁素参与介导LPS所致早期炎症介质IL-1β和TNF-α的表达与分泌。 展开更多
关键词 核仁素 THP-1单核细胞 脂多糖 炎症因子 基因表达
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心肌组织特异性高表达核仁素转基因小鼠的构建与鉴定 被引量:3
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作者 刘艳娟 周斌 +4 位作者 蒋碧梅 童中艺 孙丽 李媛彬 肖献忠 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第7期1228-1232,共5页
目的:构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ncl)的转基因小鼠,为从整体水平上研究核仁素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法:采用基因重组法将小鼠核仁素基因的全长cDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha... 目的:构建并鉴定心肌组织特异性高表达核仁素(Ncl)的转基因小鼠,为从整体水平上研究核仁素对心肌功能的影响及其发挥心肌保护作用的机制提供动物模型。方法:采用基因重组法将小鼠核仁素基因的全长cDNA插入含心肌细胞特异性启动子的Alpha-MyHC clone 26载体,构建Alpha-MyHC clone 26-Ncl重组载体,通过双酶切及基因测序鉴定其正确性;采用PCR鉴定阳性小鼠并用Western blotting法观察转基因小鼠中核仁素的表达情况,采用组织切片及HE染色法观察转基因小鼠心肌组织形态;测量心脏重量指数和左室压最大上升速率,观察核仁素在心肌组织高表达后对小鼠心脏形态功能是否有影响。结果:PCR法观察显示获得4只阳性小鼠(51、52、56和86,其中52和86系繁殖良好),Western blotting结果表明转基因小鼠的核仁素表达量明显高于野生鼠,HE染色等结果表明核仁素对心肌形态学、心脏/体重比值及心功能无明显影响。结论:成功制备了心肌组织特异性高表达核仁素的转基因小鼠,与野生型小鼠相比,转基因小鼠心肌形态及心功能无明显差异。 展开更多
关键词 核仁素 转基因 心肌 小鼠
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核仁素在糖尿病性心肌病中的表达 被引量:4
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作者 孙丽 贺欣 +5 位作者 王娟 蒋碧梅 童中艺 刘艳娟 李媛彬 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期1056-1060,共5页
目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠... 目的:探讨核仁素在糖尿病性心肌病中的表达情况。方法:实验分为对照组和II型糖尿病性心肌病模型组(模型组);模型组采用高脂高糖饲料持续喂养(第5,6周于小鼠腹腔注射60 mg/kg链脲佐菌素)构建,第8周末测定小鼠血糖,第20周末测定两组小鼠空腹血糖值并计算心脏质量与体质量的比值,观察心肌形态学病理改变,采用免疫组织化学法和Western印迹检测心肌核仁素的表达水平。结果:糖尿病模型组小鼠较对照组空腹血糖值明显升高(P<0.05);模型组小鼠心肌细胞肥大、排列紊乱,出现断裂及溶解;免疫组织化学染色及Western印迹显示模型组小鼠心肌核仁素蛋白水平较对照组明显升高(P<0.05)。结论:核仁素可能在糖尿病性心肌病的发生和发展中起着一定的作用。 展开更多
关键词 Ⅱ型糖尿病 心肌病 核仁素 表达
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核仁素对糖尿病性心肌病小鼠心肌细胞凋亡的影响 被引量:2
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作者 刘梅冬 孙俪 +3 位作者 蒋碧梅 谭斯品 刘可 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期241-245,共5页
目的:探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法:小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组:野生型小鼠对照组、核仁素转基因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组... 目的:探讨核仁素对糖尿病性小鼠心肌病心肌细胞凋亡的影响。方法:小鼠给予高脂高糖饲料喂养,第5,6周分别予链脲佐菌素60 mg/kg腹腔注射,构建2型糖尿病模型;实验分为4组:野生型小鼠对照组、核仁素转基因小鼠对照组、野生型小鼠糖尿病组、核仁素转基因小鼠糖尿病组;第8周末检测糖尿病相关指标;第20周末,采用HE染色观察心肌形态学改变;TUNEL染色和caspase-3活性检测心肌细胞凋亡程度。结果:糖尿病组小鼠空腹血糖值较野生型对照组明显升高;与野生型对照组相比,野生型糖尿病组小鼠心肌HE染色显示细胞排列紊乱,部分肌纤维出现断裂及溶解,TUNEL染色和caspase-3活性检测显示心肌细胞凋亡明显增加。与野生型糖尿病组小鼠相比,转基因糖尿病组小鼠心肌形态学改变明显减轻,心肌细胞凋亡明显减少。结论:核仁素过表达可抑制糖尿病性心肌病中心肌细胞凋亡的发生。 展开更多
关键词 2型糖尿病心肌病 核仁素 细胞凋亡 转基因小鼠
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血清核仁素检测在结肠癌中的临床应用
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作者 王晓明 卢小东 +2 位作者 严枫 万杰 莫冬萍 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期529-532,共4页
目的 :探讨核仁素(nucleolin)在结肠癌患者血清中的水平与临床意义。方法:用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测172例结肠癌患者、24例直肠癌患者和80例健康体检者血清中核仁素含量,并分析血清核仁素水平与结肠癌患者临床病理特征之间的关... 目的 :探讨核仁素(nucleolin)在结肠癌患者血清中的水平与临床意义。方法:用酶联免疫吸附实验(ELISA)法检测172例结肠癌患者、24例直肠癌患者和80例健康体检者血清中核仁素含量,并分析血清核仁素水平与结肠癌患者临床病理特征之间的关系。结果:结肠癌患者血清中核仁素含量为(228.9±212.4)pg/m L,直肠癌患者为(115.1±34.5)pg/m L,健康对照组为(101.13±32.4)pg/m L。结肠癌患者血清核仁素水平明显高于健康对照组(P<0.001),直肠癌患者与健康对照组间差异无统计学意义(P>0.05)。在结肠癌检测中,血清核仁素敏感性为91.9%、特异性为83.8%,癌胚抗原(carcino-embryonic antigen,CEA)敏感性为68.6%、特异性为85.0%。浸润型结肠癌患者中血清核仁素水平明显高于隆起型和溃疡型(P<0.05)。结肠癌患者血清核仁素水平与年龄、性别、肿瘤大小、分化程度、浸润程度、淋巴结转移、远处转移、TNM分期、Ducks分期均无相关性(P均>0.05)。结论:结肠癌患者血清核仁素检测敏感性和特异性较高,敏感性优于CEA,特异性与CEA相当,对结肠癌的诊断有潜在应用价值。 展开更多
关键词 核仁素 肠癌 血清
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哺乳动物核仁蛋白基因编码多个内含子snoRNA
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作者 周惠 屈良鹄 《中山大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 1999年第5期129-130,共2页
Through computer screening of Genbank and experimental analysis a novel snoRNA, termed Z25, was first identified from mammals. Z25 snoRNA is 69 nucleotide in length, possessing typical boxC/D and terminal repeat seque... Through computer screening of Genbank and experimental analysis a novel snoRNA, termed Z25, was first identified from mammals. Z25 snoRNA is 69 nucleotide in length, possessing typical boxC/D and terminal repeat sequence, a 11 nt long sequence complementarity to 18S rRNA implies that Z25 snoRNA is a 2′ O ribose methylation guide at A1678 (human coordinate) of 18S rRNA. Z25 snoRNA is encoded by the fifth intron of human, mouse and rat nucleolin genes that have been found as the host genes for U20 and U23 snoRNA. 展开更多
关键词 SNORNA 核仁蛋白 哺乳动物 基因编码 内含子
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核仁素在小鼠帽状期牙胚中的特异性表达
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作者 谢明 张富强 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2008年第7期831-835,共5页
目的检测核仁素在小鼠胚胎帽状期牙胚发育过程中的特异性表达,并推测其可能的生物学作用。方法采用原位杂交和免疫组化方法分别检测核仁素mRNA和蛋白在小鼠胚胎第15天(E15)发育牙胚中的表达。核仁素和TUNEL的双重荧光染色观察核仁素与... 目的检测核仁素在小鼠胚胎帽状期牙胚发育过程中的特异性表达,并推测其可能的生物学作用。方法采用原位杂交和免疫组化方法分别检测核仁素mRNA和蛋白在小鼠胚胎第15天(E15)发育牙胚中的表达。核仁素和TUNEL的双重荧光染色观察核仁素与牙胚中凋亡细胞的关系。结果核仁素mRNA和蛋白主要表达于E15牙胚中的颈环、内釉上皮及其下邻接的牙乳头部分;核仁素蛋白还存在于原发性釉结节和基底膜之中。双重荧光染色显示,核仁素的分布与原发性釉结节中凋亡细胞的位置不重合。结论在帽状期牙胚中,核仁素mRNA与蛋白的表达并不完全一致。核仁素蛋白在基底膜中的表达提示其可能通过参与内釉上皮与牙乳头间充质的相互作用而影响牙胚的形态发生。 展开更多
关键词 核仁素 牙齿发生 牙胚 原发性釉结节
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沉默核仁素可诱导大鼠神经干细胞的分化
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作者 谌崇峰 杨怀才 柳国胜 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第7期875-882,共8页
目的探讨核仁素(nucleolin)对原代神经干细胞(NSCs)分化的影响及其相关机制。方法构建核仁素siRNA腺病毒表达载体,将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染HEK293A细胞,包装得到具有感染能力的nucleolin-siRNA重组腺病毒。病毒体外感染原代NS... 目的探讨核仁素(nucleolin)对原代神经干细胞(NSCs)分化的影响及其相关机制。方法构建核仁素siRNA腺病毒表达载体,将经鉴定正确的重组腺病毒质粒转染HEK293A细胞,包装得到具有感染能力的nucleolin-siRNA重组腺病毒。病毒体外感染原代NSCs,采用Western blot检测nucleolin蛋白的表达情况,Nucleolin-siRNA对神经干细胞Nestin、Wnt3、β-catenin蛋白表达的影响;采用免疫细胞化学检测nucleolin-siRNA对神经干细胞分化的影响。结果经酶切和测序鉴定均证实nucleolinsiRNA重组腺病毒载体构建成功,其插入序列正确无误。Western blot检测结果显示,转染nucleolin-siRNA2的细胞nucleolin表达明显受到抑制。siRNA+组NSCs分化为NSE阳性细胞和GFAP阳性细胞的分化率明显比CON组、siRNA-组增加,且差异具有统计学意义(P<0.01)。与阴性对照组相比,siRNA+组Nestin的表达明显减少,Wnt3表达明显增多,β-catenin入核明显增多,其差异具有统计学意义(P<0.05)。结论本研究成功地构建了针对nucleolin基因的siRNA重组腺病毒载体,沉默nucleolin可诱导神经干细胞的分化,其机制可能与Wnt信号转导通路的激活有关。 展开更多
关键词 核仁素 神经干细胞 分化 WNT信号转导通路
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大鼠压力负荷增加心肌肥厚模型中核仁素的表达 被引量:4
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作者 严思敏 吴双 +3 位作者 孙丽 蒋碧梅 涂自智 肖献忠 《中南大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期124-128,共5页
目的:探讨腹主动脉缩窄致压力负荷增加大鼠心肌肥厚模型中核仁素的表达情况.方法:采用体质量180~220 g SD大鼠40只,随机分为假手术组和腹主动脉缩窄模型组,利用腹主动脉缩窄法制备压力负荷增加心肌肥厚模型,分别于术后2周、4周观察心... 目的:探讨腹主动脉缩窄致压力负荷增加大鼠心肌肥厚模型中核仁素的表达情况.方法:采用体质量180~220 g SD大鼠40只,随机分为假手术组和腹主动脉缩窄模型组,利用腹主动脉缩窄法制备压力负荷增加心肌肥厚模型,分别于术后2周、4周观察心脏质量指数、左心室质量指数;采用RT-PCR检测心肌组织中β-MHC mRNA的表达;采用Western印迹检测心肌、脑、肾组织中核仁素的表达情况.结果:腹主动脉缩窄模型组4周以后心脏质量指数、左心室质量指数较假手术组显著增加(P<0.01);4周以后心肌组织中β-MHC mRNA的表达较假手术组显著升高(P<0.05);2周以后心肌组织中核仁素蛋白的表达较假手术组显著升高(P<0.05),而在脑、肾组织中无明显升高.结论:核仁素蛋白在大鼠压力负荷增加心肌肥厚模型中的表达上调,表明核仁素可能参与了压力负荷增加心肌肥厚的发生发展. 展开更多
关键词 核仁素 心肌肥厚 大鼠 压力负荷增加
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