PRRSV nsp4蛋白的结构和功能研究进展

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作者 李兴玉 于吉锋 +3 位作者 李金海 康玮笠 毛从剑 康润敏 《中国动物检疫》 2025年第10期82-90,共9页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因组编码至少14种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp)。其中,nsp4蛋白具备3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,在病毒... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)基因组编码至少14种非结构蛋白(nonstructural protein,nsp)。其中,nsp4蛋白具备3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,在病毒复制、抑制宿主天然免疫反应以及诱导宿主细胞凋亡过程中扮演关键角色。本文系统梳理了nsp4蛋白的最新研究进展,重点探讨了其结构特征及其在抑制宿主天然免疫和促进病毒复制等领域的最新研究成果,旨在为猪繁殖与呼吸综合征防控工作提供创新思路,为新型疫苗及防治药物研发提供理论参考。 展开更多

关键词 猪繁殖和呼吸综合征病毒 nsp4蛋白 3C样丝氨酸蛋白酶 宿主免疫 病毒复制

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割IKKα抑制β干扰素产生的研究 被引量：7

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作者 李长尧 王胜男 +2 位作者 李江南 黄丽 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期425-428,共4页

IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显... IKK复合体由IKKα、IKKβ和IKKγ3个亚基组成。早期研究结果表明催化亚基IKKα在调节β干扰素(IFNβ)产生方面发挥重要作用。猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染及其非结构蛋白4(NSP4)表达能够显著抑制宿主的天然免疫反应。本研究结果显示PRRSV NSP4可以与IKKα结合,并能够切割IKKα。而且,丝氨酸蛋白酶活性是PRRSV NSP4切割IKKα所必需的,其中NSP4中的3个蛋白酶活性位点(His^(39)、Asp^(64)和Ser^(118))中任何一个发生突变均无法切割IKKα。进一步研究证明,NSP4通过切割IKKα抑制了NF-κB和IFNβ启动子的活性。本研究结果表明,PRRSV NSP4除了通过切割NEMO和MAVS抑制NF-κB和IFNβ启动子活性以外,也可以通过切割IKKα抑制机体NF-κB的激活和IFNβ的表达。这些研究结果为阐明PRRSV逃逸宿主天然免疫提供了一个新的证据,为深入研究PRRSV的致病机理奠定了基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp4 IKKα IFNβ NF-ΚB信号通路

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4切割天然免疫分子NEMO抑制I型干扰素的产生 被引量：3

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作者 张利杰 李江南 +7 位作者 胡亮 张泉 王岩 于会彬 黄丽 李曦 蔡雪辉 翁长江 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第3期169-173,共5页

猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染... 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)侵入宿主细胞后能够强烈抑制宿主天然免疫反应。早期研究表明,PRRSV 4个非结构蛋白NSP1、NSP2、NSP4和NSP11均可以抑制I型干扰素(IFN-I)的产生,但NSP4抑制IFN-I的机理尚无相关报道。本研究显示PRRSV感染猪肺泡巨噬细胞(PAMs)导致宿主蛋白NEMO(NF-κB essential modulator)被切割,产生一条约40 ku的蛋白条带。通过检测PRRSV编码蛋白酶的切割功能,进一步表明其NSP4是切割NEMO的关键蛋白酶。免疫共沉淀试验表明NSP4与NEMO具有特异性相互作用;激光共聚焦试验结果表明两者在细胞浆中共定位。通过双荧光素酶报告基因试验显示,NSP4过表达可以显著抑制仙台病毒(SeV)和NEMO诱导的IFNβ启动子的激活,导致IFNβ表达量显著下降(p<0.01)。本研究结果表明,PRRSV NSP4可以切割宿主蛋白NEMO,从而显著抑制IFNβ启动子的激活,从分子水平解释了PRRSV NSP4抑制IFNβ产生的机理。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp4蛋白 NEMO蛋白 IFNβ

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高致病性PRRSV HuN4株Nsp4的原核表达及其抗体水平检测 被引量：2

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作者 董建国 刘永刚 +8 位作者 石文达 武嘉男 王刚 刘鹤 徐明明 荣福龙 李丽琴 田志军 蔡雪辉 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第3期219-222,共4页

为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western b... 为进一步研究高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(HP-PRRSV)Nsp4的免疫学特性,本研究根据PRRSV HuN4株序列,设计并合成用于扩增PRRSV HuN4株Nsp4基因的引物。将扩增产物与原核表达载体pGEX-6P-1连接,转化到大肠杆菌BL21(DE3)中。Western blot试验显示,Nsp4在大肠杆菌中获得较高水平的表达,并且具有良好的反应活性。利用该蛋白建立ELISA方法,检测PRRSV HuN4株感染仔猪的不同时间内的血清,并比较抗Nsp4,囊膜蛋白和M蛋白,N蛋白的抗体水平,结果表明Nsp4抗体升高的时间晚于囊膜蛋白和M蛋白、N蛋白出现的时间,同时抗体水平也低于其他蛋白。 展开更多

关键词 PRRSV nsp4 原核表达 抗原性

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猪轮状病毒NSP4蛋白135、136和138位点氨基酸突变对毒力影响的研究 被引量：1

5

作者 周晗 乔薪媛 +1 位作者 葛俊伟 李一经 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期99-102,共4页

在比较我国猪轮状病毒(PRV)强弱毒株非结构蛋白NSP4 cDNA序列时发现,两者在可能与致病性有关的区域(aa112～aa175)内存在显著差异。为进一步研究这种变异是否与毒力改变有关,本研究从我国流行弱毒株JL94中扩增Nsp4基因并突变其135、136... 在比较我国猪轮状病毒(PRV)强弱毒株非结构蛋白NSP4 cDNA序列时发现,两者在可能与致病性有关的区域(aa112～aa175)内存在显著差异。为进一步研究这种变异是否与毒力改变有关,本研究从我国流行弱毒株JL94中扩增Nsp4基因并突变其135、136和138氨基酸位点,以谷胱甘肽S-转移酶GST重组蛋白的形式在大肠杆菌Rosseta中表达突变和未突变两种Nsp4蛋白C端编码aa 112～aa 175的截短蛋白并用Glutathione SepharoseTM4B亲和纯化。将纯化的两种蛋白均以40μg的剂量腹腔接种新生BALB/c乳鼠。结果显示,接种GST-Nsp4突变重组蛋白组,有大部分小鼠先后发生腹泻(7/12),接种未突变GST-Nsp4重组蛋白组,只有少部分小鼠发生先后腹泻(3/12),而注射PBS的对照组,均未发生腹泻。本研究证明PRV Nsp4第135位、136位和138位氨基酸位点的变异影响蛋白毒性的改变,其致腹泻活性具有明显差异(p<0.05)。为进一步研究PRV的致腹泻机理和防制及其疫苗的研制奠定基础。 展开更多

关键词 猪轮状病毒 腹泻 nsp4

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人轮状病毒NSP4蛋白131和133位氨基酸变异对毒力影响的研究 被引量：1

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作者 李晓琳 蒋立虹 +6 位作者 孟明耀 庞伟 王萍 李亚雄 陈智豫 刘建生 侯宗柳 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期310-313,共4页

目的研究两株A组人轮状病毒NSP4蛋白131位和133位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从昆明地区2002年和2005年秋冬季婴幼儿腹泻流行期不同程度腹泻患儿中分离得到两株轮状病毒流行株02k38和05k44,RT-PCR扩增NSP4全长基因,进行cDNA序... 目的研究两株A组人轮状病毒NSP4蛋白131位和133位氨基酸位点的变异对毒力的影响。方法从昆明地区2002年和2005年秋冬季婴幼儿腹泻流行期不同程度腹泻患儿中分离得到两株轮状病毒流行株02k38和05k44,RT-PCR扩增NSP4全长基因,进行cDNA序列测序。通过pGEX-5X-1载体,转化E.coliBL21以谷胱苷肽S-转移酶融合蛋白的形式表达两株病毒的NSP4蛋白C-端86～170位氨基酸（GST-NSP486-170）;并酶切融合头纯化得到两种NSP486-170蛋白,在ICR乳鼠中比较这两种蛋白致小鼠腹泻的差异。结果两种NSP486-170蛋白毒性无差异。结论两株轮状病毒131位和133位氨基酸位点的变异不影响毒力的改变,其致腹泻活性没有明显差异（P〉0.05）。 展开更多

关键词 轮状病毒 nsp4蛋白 腹泻 变异

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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白NSP4细胞核定位研究 被引量：5

7

作者 刘惠莉 方莹 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第4期89-94,共6页

为探讨PRRSV非结构蛋白4(NSP4)功能,体外构建了pEGFP-N1-nsp4真核表达载体,转染Marc-145细胞,利用NSP4-GFP融合蛋白携带的绿色荧光标记,研究NSP4蛋白在Marc-145细胞中的定位,并根据蛋白疏水性设计构建含有nsp4基因N端不同长度的重组pEGF... 为探讨PRRSV非结构蛋白4(NSP4)功能,体外构建了pEGFP-N1-nsp4真核表达载体,转染Marc-145细胞,利用NSP4-GFP融合蛋白携带的绿色荧光标记,研究NSP4蛋白在Marc-145细胞中的定位,并根据蛋白疏水性设计构建含有nsp4基因N端不同长度的重组pEGFP-N1表达载体,转染细胞以进一步了解NSP4蛋白是否存在核定位信号序列及其在细胞中的分布。试验结果表明:融合蛋白主要位于细胞核,部分在胞浆内。PRRSV NSP4蛋白铰链区(hinge region,HR)145～168氨基酸是决定蛋白核内定位的功能区,该片段缺失影响NSP4蛋白进入细胞核。结论:体外转染细胞内表达的NSP4蛋白主要分布在细胞核内,HR区是其核定位信号,NSP4蛋白通过HR区信号作用主动进入细胞核内。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV) 非结构蛋白4(nsp4) 核定位

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宁波地区人轮状病毒NSP4基因特征分析

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作者 高红 胡逢蛟 +1 位作者 刘健毅 毛国华 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期927-930,共4页

目的研究宁波地区2005-2006年新生儿感染的A组轮状病毒NSP4基因特征及变异情况。方法利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测新生儿病毒性腹泻便样中的轮状病毒核酸,选择部分阳性样品通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NSP4全基因并测序,测... 目的研究宁波地区2005-2006年新生儿感染的A组轮状病毒NSP4基因特征及变异情况。方法利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)检测新生儿病毒性腹泻便样中的轮状病毒核酸,选择部分阳性样品通过逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)扩增NSP4全基因并测序,测序结果利用DNAstar和Blast软件进行比较分析。结果在20份新生儿病毒性腹泻便样中共检测到RV阳性样品10份;选择4份阳性样品进行NSP4基因扩增并测序,均能扩增出750bp片段;4个宁波株与标准株Wa、KUN和AU-1的核苷酸同源性分别为93.7%～94.4%、80.5%～81.2%和80.0%～80.8%,与1994-1998年中国其他地区流行株核苷酸和氨基酸的同源性为92.8%～98.9%和93.7%～99.4%。结论在宁波新生儿中有A组轮状病毒的流行,4个宁波株的NSP4基因均为Wa型,RVNSP4蛋白的3个功能区在中国大陆十几年的进化中是高度保守的,宁波株出现了一些特征性的氨基酸变异位点。 展开更多

关键词 新生儿腹泻 A组轮状病毒 nsp4基因 序列分析

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PRRSV Nsp4基因突变株对β2M表达的影响 被引量：1

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作者 康磊 刘珂 +8 位作者 王建忠 尹才 邱亚峰 魏建超 李蓓蓓 邵东华 李宗杰 粟硕 马志永 《南京农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期507-514,共8页

[目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp... [目的]本试验旨在探究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)Nsp4基因是否在抑制细胞β2M表达方面发挥关键性作用,以进一步研究PRRSV对抗原递呈的免疫抑制机制。[方法]建立PRRSV的反向遗传平台并成功拯救出PRRSV野生毒株SH2020。根据之前对Nsp4基因不同结构域的研究以及氨基酸位点功能预测,在其DomainⅡ和DomainⅢ分别筛选出3个和5个不同的氨基酸位点,并在病毒感染性克隆质粒上对这些位点进行不同的氨基酸替换突变,再将构建好的感染性克隆质粒转染Marc-145细胞以拯救各个Nsp4突变PRRSV病毒,将拯救的PRRSV病毒以MOI=0.02感染PAM细胞,并通过RT-qPCR和Western blot验证PRRSV Nsp4基因是否能够在PAM细胞β2M表达方面发挥作用。[结果]成功拯救出PRRSV D2-5(Nsp4-A80L)突变毒株,并且在Marc-145细胞上的生长动力学特性与野生毒株SH2020相似;而Nsp4基因其余位点突变则会导致PRRSV生长受到显著抑制从而无法进行试验。Western blot和RT-qPCR试验结果证实PRRSV D2-5毒株能够显著促进β2M在Marc-145和PAM细胞的表达,而野生毒株SH2020则表现出了对β2M表达的抑制作用。[结论]Nsp4基因在PRRSV抑制细胞β2M表达方面发挥重要作用,并且Nsp4-A80L突变能够显著促进β2M的表达。 展开更多

关键词 PRRSV nsp4 Β2M 反向遗传平台 突变毒株

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高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白Nsp4的表达及其抗血清的制备 被引量：1

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作者 许傲天 周艳君 +9 位作者 李国新 于海 闫丽萍 陈宗艳 张善瑞 王礞礞 姜一峰 王亚欣 田志军 童光志 《中国动物传染病学报》 CAS 2009年第3期21-26,共6页

根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基... 根据GenBank中已发表的高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Highly Pathogenic Porcine Reproductiveand Respiratory Syndrome Virus,PRRSV)HuN4株全基因组序列,设计合成一对引物,对PRRSV HuN4株非结构蛋白Nsp4(Nonstructural protein4基因进行RT-PCR扩增,克隆到原核表达载体pET30a(+)中,构建重组表达载体pET30a-Nsp4,经酶切测序鉴定。将pET30a-Nsp4转化表达菌株BL21(DE3),诱导可表达分子量约为27kDa重组蛋白。Western blot显示其具有较好的反应原性,经镍离子亲和层析(Ni-NTA)纯化获得了高纯度的可溶性重组蛋白。将纯化的Nsp4蛋白免疫BALB/c小鼠,抗血清ELISA效价达1∶16 000,Western blot和IFA表明,所制备的抗血清能够特异性识别PRRSV自身表达的Nsp4蛋白。本研究获得了可溶性的PRRSV Nsp4蛋白,制备了Nsp4特异性多抗血清,为进一步研究Nsp4蛋白的亚细胞定位及功能奠定了基础。 展开更多

关键词 高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp4 原核表达 多抗血清

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猪轮状病毒NSP4的细胞定位及在细胞凋亡中的作用 被引量：1

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作者 建琛瑶 王静 +1 位作者 董望 张彦明 《动物医学进展》 北大核心 2015年第10期1-4,共4页

为研究猪轮状病毒非结构蛋白NSP4的细胞定位及其蛋白功能,将构建的重组质粒pNSP4-EGFP,pviroporin-EGFP和pEGFP-N1空载体质粒转染到SIEC02细胞株,通过与内质网定位蛋白的共聚焦分析、实时荧光定量PCR检测和Western blot分析,发现NSP4主... 为研究猪轮状病毒非结构蛋白NSP4的细胞定位及其蛋白功能,将构建的重组质粒pNSP4-EGFP,pviroporin-EGFP和pEGFP-N1空载体质粒转染到SIEC02细胞株,通过与内质网定位蛋白的共聚焦分析、实时荧光定量PCR检测和Western blot分析,发现NSP4主要分布于内质网,少数定位于细胞核;NSP4蛋白可显著上调Bax基因水平(P<0.01)和caspase-3蛋白表达水平。说明猪轮状病毒NSP4蛋白具有类似viroporin的功能,主要定位于内质网上;NSP4依赖或部分依赖caspase的激活和Bax的活化促进细胞凋亡。 展开更多

关键词 猪小肠上皮细胞 猪轮状病毒 非结构蛋白 4 细胞凋亡 nsp4

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轮状病毒NSP4胞质区在杆状病毒系统的表达及其黏膜佐剂效应评价 被引量：1

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作者 谢力 曾韦锟 +5 位作者 李臣 孔璟 王纪爱 陈伟伟 李鸿钧 孙茂盛 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期917-921,927,共6页

目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体... 目的:应用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达轮状病毒(RV)非结构蛋白NSP4的胞质区(CF)片段(47~175 aa),并初步检测其黏膜免疫佐剂效应。方法:将RV NSP4-CF基因片段定向克隆至转座载体pFastBac1,转化DH10Bac并筛选重组杆粒Bac-NSP4-CF。脂质体介导Bac-NSP4-CF转染sf9细胞,收获细胞并传代培养。测定病毒滴度,Western blot检测目的蛋白表达情况。纯化后的重组NSP4-CF与卵清蛋白(OVA)滴鼻共免疫小鼠,并检测其黏膜免疫佐剂效应。结果:在杆状病毒系统中成功获取了NSP4-CF重组蛋白,Western blot检测可见约16 kD的特异性条带;重组NSP4-CF与OVA共免疫小鼠后,小鼠血清OVA特异性IgG、IgA抗体水平与肠道SIgA水平较OVA单独免疫组均有升高(P<0.05);ELISPOT检测结果表明NSP4-CF佐剂组(5μg)分泌IFN-γ的脾细胞平均数均高于OVA组(P<0.05)。结论:经昆虫细胞表达系统可获得RV NSP4胞质区(47~175 aa)重组蛋白,该蛋白与模式抗原经黏膜途径免疫小鼠具有增强系统免疫应答与黏膜免疫应答的佐剂活性,为进一步研究RV-NSP4佐剂活性区域及其分子机制提供了实验基础。 展开更多

关键词 佐剂 轮状病毒 nsp4胞质区 杆状病毒 黏膜免疫

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轮状病毒腹泻患儿NSP4基因变异与临床关系 被引量：7

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作者 戚勤 侯宗柳 +4 位作者 李海林 文革生 庞伟 周丽芳 黄永坤 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第10期705-707,共3页

目的研究腹泻患儿的轮状病毒( RV)流行株非结构蛋白 4( NSP4)的基因变异与临床的关系.方 法对昆明地区 2002年和 2003年流行期不同程度腹泻患儿中分离出的 22株轮状病毒流行株的 NSP4基因进行 RT-PCR扩增,并进行 cDNA序列分析,与来自 Ge... 目的研究腹泻患儿的轮状病毒( RV)流行株非结构蛋白 4( NSP4)的基因变异与临床的关系.方 法对昆明地区 2002年和 2003年流行期不同程度腹泻患儿中分离出的 22株轮状病毒流行株的 NSP4基因进行 RT-PCR扩增,并进行 cDNA序列分析,与来自 GenBank Database的 4株人 RV( Wa、 KUN、 AU-1、 Hochi)和 3株动物 RV( EW、 OSU、 SAll)以及我国不同地区 RV流行株 NSP4的基因变异情况进行比较.结果氨基酸同源性表明昆明地区轮状病毒流行株间的同源性高达 98.9%～ 99.4%, 22株流行株全都属于 Wa组.氨基酸进化树提示在 Wa组内又包括 3个亚组.NSP4基因变异与轮状病毒腹泻临床症状严重程度不相关( P>0.05).结论 2002年和 2003年昆明地区轮状病毒流行株皆属 Wa组,且其氨基酸序列极为保守; NSP4基因变异与轮状病毒腹泻临床症状严重程度不相关,但与流行发病的关系需继续研究. 展开更多

关键词 轮状病毒 非结构蛋白4 基因 变异 临床特征

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猪繁殖与呼吸综合征病毒NSP4研究进展 被引量：6

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作者 沙惠阳 张航 +2 位作者 黄良宗 马春全 赵孟孟 《动物医学进展》 北大核心 2022年第10期80-85,共6页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病。PRRSV编码NSP4具有3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,以保守氨基酸His39-Asp64-Ser118为催化三联体,将pp1a和pp1ab... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)感染引起的一种高度接触性传染病。PRRSV编码NSP4具有3C样丝氨酸蛋白酶(3C-like serine proteinase,3CLSP)活性,以保守氨基酸His39-Asp64-Ser118为催化三联体,将pp1a和pp1ab水解成多个非结构蛋白(NSP3~NSP12)。NSP4在调控PRRSV复制、抑制干扰素(interferon,IFN)、早期感染诊断以及诱导细胞凋亡等方面具有重要作用。对NSP4进行综述,为防控PRRS及开发新疫苗提供理论基础。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 nsp4 先天免疫

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传染性支气管炎病毒nsp4和nsp15通过调节NF-κB和IRF3信号通路抑制Ⅰ型干扰素表达 被引量：2

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作者 徐刚 马淑慧 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2021年第3期6-10,13,共6页

为探究传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白在其抑制Ⅰ型干扰素表达作用中的机理,本试验利用IBV流行毒株感染原代鸡胚肾细胞,通过添加poly(I∶C),检测细胞中Ⅰ型干扰素的表达水平,并构建IBV流行毒株各非结构蛋白真核表达载体,转染鸡胚... 为探究传染性支气管炎病毒(IBV)的非结构蛋白在其抑制Ⅰ型干扰素表达作用中的机理,本试验利用IBV流行毒株感染原代鸡胚肾细胞,通过添加poly(I∶C),检测细胞中Ⅰ型干扰素的表达水平,并构建IBV流行毒株各非结构蛋白真核表达载体,转染鸡胚成纤维细胞(DF-1)后转染poly(I∶C),检测细胞中IFN-β、NF-κB以及IRF3的mRNA表达水平。结果显示,IBV JS株能显著抑制由poly(I∶C)诱导的I型干扰素的表达,且nsp3、nsp4、nsp7、nsp14以及nsp15在此过程中发挥重要作用,nsp4和nsp15可通过抑制上游信号通路中的NF-κB或IRF3的表达来抑制IFN-β的转录,拮抗I型干扰素反应。本试验结果可为深入研究IBV的致病机理及其逃避宿主免疫应答的机制提供理论基础。 展开更多

关键词 传染性支气管炎病毒 Ⅰ型干扰素 nsp4 nsp15

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禽传染性支气管炎病毒nsp4蛋白多克隆抗体制备及其生物学功能研究

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作者 卢彦澎 林丽婷 +6 位作者 任丽娜 晋英浩 张桃妮 张愉 韦兰萍 吕迪 磨美兰 《南方农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期2423-2435,共13页

【目的】筛选出禽传染性支气管炎病毒(IBV)非结构蛋白4(nsp4)抗原性较好的氨基酸区域并制备多克隆抗体,为进一步研究nsp4蛋白在IBV复制过程中的功能提供物质基础,也为研发IBV新型诊断试剂盒与疫苗打下基础。【方法】对IBV Beaudette株n... 【目的】筛选出禽传染性支气管炎病毒(IBV)非结构蛋白4(nsp4)抗原性较好的氨基酸区域并制备多克隆抗体,为进一步研究nsp4蛋白在IBV复制过程中的功能提供物质基础,也为研发IBV新型诊断试剂盒与疫苗打下基础。【方法】对IBV Beaudette株nsp4蛋白进行原核表达,以融合蛋白nsp4作为免疫原免疫健康日本大耳白兔和健康阴性鸡,制备相应的兔多克隆抗体和鸡多克隆抗体,并通过间接ELISA检测、Western blotting检测及IFA验证等对制备获得的多克隆抗体进行生物学功能研究。【结果】选取nsp4蛋白第408~514位氨基酸作为原核表达序列,成功构建了nsp4蛋白原核表达载体pCZN-1-HIS-nsp4和nsp4蛋白真核表达载体pVAX1-nsp4-HA。原核表达的融合蛋白nsp4为13.6 kD,与预期结果相符,能与IBV GX-YL5株和M41株全病毒阳性血清反应。制备的兔、鸡多克隆抗体血清效价分别为1∶128000和1∶6400,均能与融合蛋白nsp4和IBV全病毒反应,且与IBV GX-YL5株、Beaudette株和M41株感染鸡胚肾细胞(CEK)表达的nsp4蛋白反应,还能与转染状态及感染IBV Beaudette株的非洲绿猴肾细胞(Vero)表达nsp4蛋白反应。实时荧光定量PCR检测结果表明,经nsp4蛋白真核表达载体pVAX1-nsp4-HA转染后,Vero细胞的病毒载量呈逐渐上升趋势,即体外过表达nsp4蛋白能促进IBV的复制。【结论】制备获得的2种IBV nsp4多克隆抗体效价高、反应性良好、特异性强,可作为细胞定位及表达时相分析等蛋白特性研究的工具,用于解析nsp4蛋白在IBV增殖过程中的作用机制,也为其他冠状病毒nsp4蛋白的研究提供参考。 展开更多

关键词 禽传染性支气管炎病毒(IBV) nsp4蛋白 多克隆抗体 反应性 特异性

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动脉炎病毒PRRSV和EAV的Nsp4蛋白对mTANK蛋白的降解

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作者 吴磊 袁旭 +3 位作者 洪锦璇 陈叶 李训良 宋中宝 《福建农林大学学报（自然科学版）》 CSCD 北大核心 2022年第5期675-681,共7页

为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和马动脉炎病毒(EAV)等动脉炎病毒的Nsp4蛋白在病毒免疫逃逸中的作用,通过免疫沉淀和质谱技术筛选到与Nsp4互作的宿主蛋白mTANK.将pCAGGS-PRRSV-Nsp4-Flag、pCAGGS-EAV-Nsp4-Flag质粒分别与pCAGGS-m... 为研究猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)和马动脉炎病毒(EAV)等动脉炎病毒的Nsp4蛋白在病毒免疫逃逸中的作用,通过免疫沉淀和质谱技术筛选到与Nsp4互作的宿主蛋白mTANK.将pCAGGS-PRRSV-Nsp4-Flag、pCAGGS-EAV-Nsp4-Flag质粒分别与pCAGGS-mTANK-HA质粒共转染HEK293T细胞,发现Nsp4可特异性降解mTANK.为了进一步揭示其中的机制,利用蛋白酶体抑制剂MG-132、凋亡途径抑制剂Z-VAD-FMK、溶酶体抑制剂NHCl和自噬抑制剂3-MA分别处理共转染的细胞,发现这些抑制剂处理并不影响Nsp4对mTANK的降解作用,随后构建了PRRSV Nsp4(E39、E64、E118)和EAV Nsp4(E39、E65、E120)的酶活性突变体质粒.将突变体质粒分别与pCAGGS-mTANK-HA质粒共转染后发现,Nsp4蛋白酶活性缺失后无法降解mTANK.进一步研究发现,mTANK降解产生的片段分别位于30和25~30 ku附近.综上,PRRSV和EAV的Nsp4蛋白可通过其3C样蛋白酶活性特异性切割宿主蛋白mTANK. 展开更多

关键词 动脉炎病毒 猪繁殖与呼吸综合征病毒 马动脉炎病毒 nsp4 mTANK 降解

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转录因子CEBPB对猪δ冠状病毒体外复制的抑制作用

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作者 陈琢琦 范丽原 +4 位作者 钟纯燕 于岩飞 李基棕 李彬 袁晓民 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第7期3423-3432,共10页

本研究旨在探索CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPB)对猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)复制的影响。将PDCoV接种于LLC-PK1细胞,检测不同时间点CEBPB表达水平变化;过表达和敲低CEBPB,利用qPCR和Western blot评估其对PDCoV复制的... 本研究旨在探索CCAAT增强子结合蛋白β(CEBPB)对猪δ冠状病毒(porcine deltacoronavirus,PDCoV)复制的影响。将PDCoV接种于LLC-PK1细胞,检测不同时间点CEBPB表达水平变化;过表达和敲低CEBPB,利用qPCR和Western blot评估其对PDCoV复制的影响;并进一步明确CEBPB在PDCoV复制周期中的作用;利用qPCR筛选出影响CEBPB上调的病毒蛋白,共聚焦显微镜观察PDCoV病毒蛋白与CEBPB的共定位现象。结果显示,随着病毒感染时间的延长,细胞中CEBPB的表达量呈上升趋势,过表达CEBPB显著抑制了PDCoV的复制,而敲低CEBPB则促进病毒的复制,CEBPB主要作用于PDCoV的复制阶段,并且PDCoV Nsp4能促进CEBPB表达,共聚焦显微镜观察发现两者存在共定位。综上表明,CEBPB能显著抑制PDCoV复制,为基于CEBPB研制潜在的抗病毒药物提供了新的思路。 展开更多

关键词 CEBPB PDCoV nsp4 抗病毒

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猪繁殖与呼吸综合征病毒非结构蛋白4依靠其3C样色氨酸蛋白酶活性诱导细胞凋亡

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作者 Ma Z 吴艳 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2013年第11期58-58,共1页

猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种高度接触性传染病。已有研究结果表明,PRRSV感染能诱导细胞凋亡,但相关的病毒蛋白尚不清楚。本试验结果发现,PRRSV非结构蛋白4(nsp4)是一个关键的凋亡诱导因子。... 猪繁殖与呼吸综合征(PRRS)是由猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)引起猪的一种高度接触性传染病。已有研究结果表明,PRRSV感染能诱导细胞凋亡,但相关的病毒蛋白尚不清楚。本试验结果发现,PRRSV非结构蛋白4(nsp4)是一个关键的凋亡诱导因子。nsp4能活化caspase-3、caspase-8和caspase-9。本试验利用不含nsp4不同结构域的截短产物,结果发现完整的nsp4片段是其诱导凋亡活性所必需的。另外,利用定点突变技术灭活nsp4的3C样色氨酸蛋白酶活性,结果显示,nsp4诱导的凋亡依赖其色氨酸蛋白酶活性。nsp4诱导凋亡的活性被His39、Asp64和Ser118突变显著修复,表明这3个位点对nsp4诱导凋亡是必需的。本试验结果表明,PRRSV nsp4能诱导宿主细胞的凋亡,且可能对PRRSV感染诱导的凋亡起部分作用。本研究首次报道了在动脉炎病毒科动脉炎病毒属中PRRSV 3C样蛋白酶介导凋亡。 展开更多

关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 非结构蛋白4 (nsp4) 凋亡

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