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nptⅡ::mgfp5融合基因的构建及其在柑桔遗传转化中的应用
被引量:
2
1
作者
刘小丰
彭爱红
+4 位作者
许兰珍
邹修平
朱世平
赵晓春
陈善春
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2013年第7期1282-1287,共6页
早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸...
早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸,作为表达载体p1301NG的选择标记和报告基因。通过农杆菌介导法转化锦橙上胚轴,再生培养1周后用体式荧光显微镜观察外植体的再生情况。在再生培养第9天时即观察到GFP荧光再生芽的形成,再生培养后10~15 d是GFP再生芽形成的高峰期。GUS染色和PCR分子检测结果证明,GFP荧光检测结果是真实可靠的。研究结果表明:nptⅡ::mgfp5融合基因能够在再生培养早期筛选到阳性转化芽,有助于提高阳性转化芽的存活率,提高柑橘遗传转化效率。
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关键词
npt
ⅱ
m
gfp
5
融合
基因
柑橘遗传转化
gfp
荧光
转化效率
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职称材料
以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法
被引量:
2
2
作者
李淑洁
王红梅
+2 位作者
张正英
杨随庄
倪建福
《甘肃农业科技》
2008年第5期5-8,共4页
采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时(A方法),50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进...
采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时(A方法),50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时(常规方法,B方法),80~100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。
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关键词
npt
ⅱ
选择
标记
基因
卡那霉素
转
基因
小麦
高效
筛选方法
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职称材料
NPTII标记转基因棉花再生株的延期筛选
被引量:
8
3
作者
张慧军
石跃进
+2 位作者
朱永红
岳建雄
杨怀义
《中国棉花》
北大核心
2002年第5期25-26,共2页
关键词
npt
ⅱ
标记
转
基因
棉花再生株
延期筛选
棉花
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职称材料
nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中转化效率的研究
被引量:
1
4
作者
何丹丹
邹修平
+4 位作者
解栋梁
彭爱红
许兰珍
何永睿
陈善春
《中国南方果树》
北大核心
2014年第6期1-4,23,共5页
绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由C...
绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由CaMV35s启动子分别驱动nptⅡ、gfp两个基因的表达载体pNPTⅡ-GF转化至锦橙上胚轴内。GFP绿色荧光检测结果显示,gfp在转nptⅡ::gfp融合基因植株中强烈表达,荧光强度与转非融合nptⅡ和gfp基因植株的表达水平相当。nptⅡ::gfp融合标记基因在锦橙上的转化效率为10.8%,与非融合nptⅡ和gfp基因的转化效率(11.0%)无明显差异。nptⅡ::gfp融合标记基因是一个有效的锦橙遗传转化筛选标记基因。
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关键词
npt
ⅱ
::
gfp
融合
标记
基因
遗传转化
转化效率
锦橙
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职称材料
应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激Ⅱ在HeLa细胞中的分布
5
作者
吴耀春
戴谷
+1 位作者
胡艳
李朝军
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2002年第2期12-16,共5页
采用绿色荧光蛋白 (GFP)标记技术研究钙离子钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )在HeLa细胞中的分布 .为了研究细胞内钙离子钙调素信号的下游作用物 ,我们首先构建了CaMKⅡ与GFP的融合基因 ,磷酸钙沉淀法将pCaMKⅡ -GFP重组载体导入HeLa细...
采用绿色荧光蛋白 (GFP)标记技术研究钙离子钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )在HeLa细胞中的分布 .为了研究细胞内钙离子钙调素信号的下游作用物 ,我们首先构建了CaMKⅡ与GFP的融合基因 ,磷酸钙沉淀法将pCaMKⅡ -GFP重组载体导入HeLa细胞 .通过荧光显微镜观察 ,发现在细胞间期 ,CaMKⅡ -GFP融合蛋白主要分布于细胞核中 ,细胞质中亦有少量分布 ,这一分布不同于绿色荧光蛋白在间期细胞内的均匀分布 .同时讨论了与间接免疫荧光染色方法相比 ,GFP技术在功能蛋白定位研究上的应用优势 .
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关键词
绿色荧光蛋白
标记
技术
HELA细胞
分布
钙调激酶创
ⅱ
细胞周期调控
钙调素
融合
基因
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职称材料
题名
nptⅡ::mgfp5融合基因的构建及其在柑桔遗传转化中的应用
被引量:
2
1
作者
刘小丰
彭爱红
许兰珍
邹修平
朱世平
赵晓春
陈善春
机构
中国农业科学院柑桔研究所
西南大学柑桔研究所
出处
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2013年第7期1282-1287,共6页
基金
重庆市自然科学基金项目(No.CSTC
2010BB1153)
现代农业技术体系资助项目(No.CARS-27)
文摘
早期、无损伤、易于操作的阳性芽检测技术,对提高柑橘遗传转化效率是十分有利的。本文设计和构建了nptⅡ::mgfp5融合基因,通过锦橙上胚轴转化体系研究其在柑橘遗传转化中的作用。nptⅡ::mgfp5融合基因全长1 578 bp,编码525个氨基酸,作为表达载体p1301NG的选择标记和报告基因。通过农杆菌介导法转化锦橙上胚轴,再生培养1周后用体式荧光显微镜观察外植体的再生情况。在再生培养第9天时即观察到GFP荧光再生芽的形成,再生培养后10~15 d是GFP再生芽形成的高峰期。GUS染色和PCR分子检测结果证明,GFP荧光检测结果是真实可靠的。研究结果表明:nptⅡ::mgfp5融合基因能够在再生培养早期筛选到阳性转化芽,有助于提高阳性转化芽的存活率,提高柑橘遗传转化效率。
关键词
npt
ⅱ
m
gfp
5
融合
基因
柑橘遗传转化
gfp
荧光
转化效率
Keywords
npt
ⅱ
::m
gfp
5 fusion gene
Citrus transformation
gfp
fluorescent
Transformation efficiency
分类号
S666 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法
被引量:
2
2
作者
李淑洁
王红梅
张正英
杨随庄
倪建福
机构
甘肃省农业科学院生物技术研究所
出处
《甘肃农业科技》
2008年第5期5-8,共4页
基金
甘肃省科学事业费项目(QS031-C31-15)
文摘
采用两种方法筛选以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦植株,结果表明,由未成熟种子获得的植株在无菌条件下进行卡那霉素筛选时(A方法),50 mg/L的卡那霉素能有效抑制非转化小麦幼苗的正常生长;由成熟种子自然发芽获得的植株在滤纸上进行卡那霉素滴注筛选时(常规方法,B方法),80~100 mg/L的卡那霉素能较好地抑制非转化小麦幼苗的正常生长。相对于B方法的常规筛选方法,A方法具有材料对卡那霉素敏感性高、筛选周期短而且筛选结果可靠性高等优点,是一种高效的以npⅡt为选择标记基因的转基因小麦的筛选方法。
关键词
npt
ⅱ
选择
标记
基因
卡那霉素
转
基因
小麦
高效
筛选方法
Keywords
npt
ⅱ
mark gene
Kanamycin
Transgenic wheat
Effective
Selection method
分类号
S512 [农业科学—作物学]
在线阅读
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职称材料
题名
NPTII标记转基因棉花再生株的延期筛选
被引量:
8
3
作者
张慧军
石跃进
朱永红
岳建雄
杨怀义
机构
山西省农科院棉花研究所
出处
《中国棉花》
北大核心
2002年第5期25-26,共2页
关键词
npt
ⅱ
标记
转
基因
棉花再生株
延期筛选
棉花
分类号
S562 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中转化效率的研究
被引量:
1
4
作者
何丹丹
邹修平
解栋梁
彭爱红
许兰珍
何永睿
陈善春
机构
西南大学园艺园林学院
中国农业科学院柑桔研究所/西南大学柑桔研究所
出处
《中国南方果树》
北大核心
2014年第6期1-4,23,共5页
基金
中央高校基本科研业务费专项(XDJK2014A018)
国家科技支撑计划课题任务书(2012BAD19B06)
+1 种基金
重庆应用开发项目(CSTC2013yykfA8002)
柑桔学重庆市市级重点实验室开放基金计划项目(CKLC201105)资助
文摘
绿色荧光蛋白基因(gfp)和新霉素磷酸转移酶基因(nptⅡ)被广泛应用于植物的遗传转化中。为了研究融合标记基因nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中的转化效率,经农杆菌介导法将CaMV35s组成型启动子驱动的nptⅡ::gfp融合标记基因表达载体pNGM和由CaMV35s启动子分别驱动nptⅡ、gfp两个基因的表达载体pNPTⅡ-GF转化至锦橙上胚轴内。GFP绿色荧光检测结果显示,gfp在转nptⅡ::gfp融合基因植株中强烈表达,荧光强度与转非融合nptⅡ和gfp基因植株的表达水平相当。nptⅡ::gfp融合标记基因在锦橙上的转化效率为10.8%,与非融合nptⅡ和gfp基因的转化效率(11.0%)无明显差异。nptⅡ::gfp融合标记基因是一个有效的锦橙遗传转化筛选标记基因。
关键词
npt
ⅱ
::
gfp
融合
标记
基因
遗传转化
转化效率
锦橙
Keywords
npt
ⅱ
::
gfp
fusion gene
transformation
transformation efficiency
Jincheng orange
分类号
S666 [农业科学—果树学]
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职称材料
题名
应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激Ⅱ在HeLa细胞中的分布
5
作者
吴耀春
戴谷
胡艳
李朝军
机构
南京师范大学生命科学学院
出处
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2002年第2期12-16,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目 (30 170 4 5 3)
文摘
采用绿色荧光蛋白 (GFP)标记技术研究钙离子钙调素依赖性蛋白激酶Ⅱ (CaMKⅡ )在HeLa细胞中的分布 .为了研究细胞内钙离子钙调素信号的下游作用物 ,我们首先构建了CaMKⅡ与GFP的融合基因 ,磷酸钙沉淀法将pCaMKⅡ -GFP重组载体导入HeLa细胞 .通过荧光显微镜观察 ,发现在细胞间期 ,CaMKⅡ -GFP融合蛋白主要分布于细胞核中 ,细胞质中亦有少量分布 ,这一分布不同于绿色荧光蛋白在间期细胞内的均匀分布 .同时讨论了与间接免疫荧光染色方法相比 ,GFP技术在功能蛋白定位研究上的应用优势 .
关键词
绿色荧光蛋白
标记
技术
HELA细胞
分布
钙调激酶创
ⅱ
细胞周期调控
钙调素
融合
基因
Keywords
gfp
,CaMK
ⅱ
,cell cycle regulation
分类号
Q253 [生物学—细胞生物学]
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
nptⅡ::mgfp5融合基因的构建及其在柑桔遗传转化中的应用
刘小丰
彭爱红
许兰珍
邹修平
朱世平
赵晓春
陈善春
《热带作物学报》
CSCD
北大核心
2013
2
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职称材料
2
以nptⅡ为选择标记基因的转基因小麦高效筛选方法
李淑洁
王红梅
张正英
杨随庄
倪建福
《甘肃农业科技》
2008
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
NPTII标记转基因棉花再生株的延期筛选
张慧军
石跃进
朱永红
岳建雄
杨怀义
《中国棉花》
北大核心
2002
8
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
nptⅡ::gfp在锦橙遗传转化中转化效率的研究
何丹丹
邹修平
解栋梁
彭爱红
许兰珍
何永睿
陈善春
《中国南方果树》
北大核心
2014
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
5
应用绿色荧光蛋白标记技术研究钙调激Ⅱ在HeLa细胞中的分布
吴耀春
戴谷
胡艳
李朝军
《南京师大学报(自然科学版)》
CAS
CSCD
2002
0
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职称材料
已选择
0
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