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鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用
1
作者
张飘
贺欣薇
+7 位作者
杨霞
曾茂芹
刘妍罕
张扬子
杨颖
温贵兰
程振涛
文明
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期215-222,共8页
为建立鸭NF-κB1(nuclear factor-kappa B, NF-κB)基因的荧光定量PCR检测方法,并以建立的方法检测鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblasts, DEF)在感染鸭肠炎病毒(DEV)后NF-κB1基因随时间变化转录表达量的变化情况。根据GenBank上NF-...
为建立鸭NF-κB1(nuclear factor-kappa B, NF-κB)基因的荧光定量PCR检测方法,并以建立的方法检测鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblasts, DEF)在感染鸭肠炎病毒(DEV)后NF-κB1基因随时间变化转录表达量的变化情况。根据GenBank上NF-κB1基因保守序列设计特异性引物,以鸭胚成纤维细胞mRNA提取样本反转录为cDNA,进行NF-κB1基因克隆质粒构建,以此为模板建立鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法并进行特异性、重复性和敏感性试验,并利用建立的方法DEF感染DEV后NF-κB1基因随时间变化的转录变化进行检测。结果显示:建立的鸭NF-κB1基因荧光定量PCR方法标准曲线呈现典型的S型,方程为y=-3.12x+44.086(R~2=1),扩增效率为109.2%;其熔解温度Tm值为(83.5±0)℃,曲线呈特异性单峰,批内变异系数小于0.3%,批间变异系数小于0.2%;检测灵敏度可达到1.79个拷贝。DEF细胞在感染DEV后NF-κB1基因随时间改变转录水平变化无规律,但整体表达水平高于正常细胞,差异显著(P<0.05),36~84 h NF-κB1基因的转录水平与正常细胞中差异极显著(P<0.01)。本研究成功建立了鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法,并对DEF细胞感染DEV后NF-κB1基因的转录水平进行了研究,为后续实验研究提供了技术和数据支撑。
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关键词
鸭
nf-kb1
基因
荧光定量PCR
建立
应用
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职称材料
番鸭核转录因子亚基基因的克隆与分析
2
作者
张蓉蓉
王红琳
+6 位作者
张腾飞
罗青平
温国元
汪宏才
罗玲
卢琴
邵华斌
《中国家禽》
北大核心
2018年第10期50-52,共3页
细胞核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)普遍存在于真核细胞内,在天然免疫、炎症、代谢等方面起着重要作用。为获得番鸭NF-κB的nf-kb1和nf-kb2亚基序列,试验设计引物对这两个亚基进行了克隆、序列鉴定及进化分析。
关键词
细胞核因子-ΚB
番鸭
nf-kb1
nf-kb
2
序列分析
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职称材料
题名
鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用
1
作者
张飘
贺欣薇
杨霞
曾茂芹
刘妍罕
张扬子
杨颖
温贵兰
程振涛
文明
机构
贵州大学动物科学学院
贵州省畜牧兽医研究所
贵州省动物生物制品工程技术研究中心
出处
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021年第2期215-222,共8页
基金
国家自然科学基金(31260607,31560703)
贵州省百层次创新型人才项目(黔科合人才[2016]4009号)
贵州省科技平台及人才团队计划(黔科合平台人才[2018]5253号)。
文摘
为建立鸭NF-κB1(nuclear factor-kappa B, NF-κB)基因的荧光定量PCR检测方法,并以建立的方法检测鸭胚成纤维细胞(duck embryo fibroblasts, DEF)在感染鸭肠炎病毒(DEV)后NF-κB1基因随时间变化转录表达量的变化情况。根据GenBank上NF-κB1基因保守序列设计特异性引物,以鸭胚成纤维细胞mRNA提取样本反转录为cDNA,进行NF-κB1基因克隆质粒构建,以此为模板建立鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法并进行特异性、重复性和敏感性试验,并利用建立的方法DEF感染DEV后NF-κB1基因随时间变化的转录变化进行检测。结果显示:建立的鸭NF-κB1基因荧光定量PCR方法标准曲线呈现典型的S型,方程为y=-3.12x+44.086(R~2=1),扩增效率为109.2%;其熔解温度Tm值为(83.5±0)℃,曲线呈特异性单峰,批内变异系数小于0.3%,批间变异系数小于0.2%;检测灵敏度可达到1.79个拷贝。DEF细胞在感染DEV后NF-κB1基因随时间改变转录水平变化无规律,但整体表达水平高于正常细胞,差异显著(P<0.05),36~84 h NF-κB1基因的转录水平与正常细胞中差异极显著(P<0.01)。本研究成功建立了鸭NF-κB1基因荧光定量PCR检测方法,并对DEF细胞感染DEV后NF-κB1基因的转录水平进行了研究,为后续实验研究提供了技术和数据支撑。
关键词
鸭
nf-kb1
基因
荧光定量PCR
建立
应用
Keywords
duck
NF-κB
1
gene
fluorescence quantitative PCR
establishment
application
分类号
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
番鸭核转录因子亚基基因的克隆与分析
2
作者
张蓉蓉
王红琳
张腾飞
罗青平
温国元
汪宏才
罗玲
卢琴
邵华斌
机构
湖北省农业科学院畜牧兽医研究所
出处
《中国家禽》
北大核心
2018年第10期50-52,共3页
基金
国家重点研发计划项目(2016YFD0500100)
湖北省农业科技创新中心项目(2011-620-001-003)
现代农业产业技术体系建设专项资金(CARS-42-G11)
文摘
细胞核因子-κB(Nuclear factor kappa B,NF-κB)普遍存在于真核细胞内,在天然免疫、炎症、代谢等方面起着重要作用。为获得番鸭NF-κB的nf-kb1和nf-kb2亚基序列,试验设计引物对这两个亚基进行了克隆、序列鉴定及进化分析。
关键词
细胞核因子-ΚB
番鸭
nf-kb1
nf-kb
2
序列分析
分类号
S852.4 [农业科学—基础兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
鸭源NF-κB1基因荧光定量PCR方法建立及其初步应用
张飘
贺欣薇
杨霞
曾茂芹
刘妍罕
张扬子
杨颖
温贵兰
程振涛
文明
《浙江农业学报》
CSCD
北大核心
2021
0
在线阅读
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职称材料
2
番鸭核转录因子亚基基因的克隆与分析
张蓉蓉
王红琳
张腾飞
罗青平
温国元
汪宏才
罗玲
卢琴
邵华斌
《中国家禽》
北大核心
2018
0
在线阅读
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职称材料
已选择
0
条
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参考文献
引证文献
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