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PRDM5过表达慢病毒载体的构建及稳定转染Neuro-2a细胞的建立
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作者 吴钊淳 李友 +2 位作者 何嘉文 廖科棋 李胜男 《吉林大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第1期1-8,共8页
目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列... 目的:构建PR锌指区域蛋白(PRDM)5基因的过表达慢病毒载体,建立稳定转染的小鼠神经瘤母细胞Neuro-2a,为探讨PRDM5在缺血性脑卒中(IS)发病机制中的作用奠定基础。方方法法:在NCBI上搜索PRDM5的序列并设计引物,PCR法扩增获取PRDM5基因序列,将其与Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶双酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-PRDM5过表达重组质粒,采用PCR法筛选并鉴定出的与目的基因片段长度相近的阳性克隆送生工生物工程(上海)股份有限公司测序。将测序正确的GV492-control质粒和GV492-PRDM5过表达重组质粒分别转染至人胚胎肾细胞HEK293T中,转染48 h后离心收集慢病毒,分别为GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒,采用慢病毒滴度测定法检测上述2种慢病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-control组和GV492-PRDM5组,分别使用GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后使用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))对成功感染GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的Neuro-2a细胞进行筛选,通过荧光显微镜观察GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态及绿色荧光蛋白的表达情况。采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平;Western blotting法检测2组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平。结果:PCR法,GV492-PRDM5重组质粒阳性转化子的长度约为684 bp,GV492-PRDM5过表达重组质粒基因序列与设计合成的PRDM5过表达序列一致;GV492-control慢病毒和GV492-PRDM5过表达慢病毒的滴度均为2.5×108 TU·mL^(-1)。荧光显微镜,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞的生长状态均良好,且能观察到绿色荧光蛋白的表达。RT-qPCR法,与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5 mRNA表达水平明显升高(P<0.01)。Western blotting法,GV492-control组和GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞在相对分子质量为75000附近出现特异性条带;与GV492-control组比较,GV492-PRDM5组Neuro-2a细胞中PRDM5蛋白表达水平升高(P<0.01)。结论:成功构建PRDM5过表达慢病毒载体,建立了稳定转染的GV492-PRDM5-Neuro-2a细胞。 展开更多
关键词 PR锌指区域蛋白 过表达慢病毒载体 稳定表达 neuro-2a细胞
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血清型A肉毒杆菌神经毒素重链对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用 被引量:6
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作者 高美玲 王红 +2 位作者 张彩云 兰婧 李夏青 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第12期2221-2227,共7页
目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A H... 目的:观察血清型A肉毒杆菌神经毒素重链(botulinum neurotoxin serotype A heavy chain,Bo NT/A HC)对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用并探讨与其相关的细胞内信号机制。方法:采用体外细胞培养技术,在培养液中加入不同浓度的Bo NT/A HC(0.01 nmol/L、0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L)进行干预,于24 h、48 h和72 h时收集细胞进行免疫荧光染色,再计算细胞突起长度及有突起细胞的百分比;在此基础上,选择最有效的Bo NT/A HC浓度作为处理剂量加入细胞培养液,于Bo NT/A HC作用后不同时点收集全细胞蛋白,采用Western blot检测p-ERK1/2及p-Akt的蛋白水平。结果:当Bo NT/A HC浓度为0.1 nmol/L、1 nmol/L和10 nmol/L时,细胞突起的长度及有突起细胞的百分比与对照组相比皆明显增加,差异显著(P<0.05),其中1 nmol/L效果最显著。在细胞培养液内加入1 nmol/L Bo NT/A HC后,p-ERK1/2的蛋白水平呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用60 min后,p-ERK1/2的增加与对照组相比差异显著(P<0.05);与p-ERK1/2变化趋势类似,细胞培养液内加入1 nmol/L的Bo NT/A HC后,p-Akt的蛋白水平也呈增加趋势,其中Bo NT/A HC作用15 min和60 min时,p-Akt增加显著(P<0.05)。结论:一定剂量的Bo NT/A HC可以促进神经细胞突起再生和生长;Bo NT/A HC对Neuro-2a细胞的促神经突起再生作用机制可能通过激活与神经再生相关的信号蛋白ERK1/2和Akt的磷酸化而实现。 展开更多
关键词 血清型A肉毒杆菌神经毒素重链 neuro-2a细胞株 神经突起再生 细胞外信号调节激酶 蛋白激酶B
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miRNA-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞氧化损伤的影响 被引量:3
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作者 陶真 王荣亮 +1 位作者 赵海苹 罗玉敏 《首都医科大学学报》 CAS 2014年第3期305-309,共5页
目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8... 目的研究microRNA-99a(miR-99a)对过氧化氢所诱导神经细胞neuro-2a氧化损伤的影响。方法常规培养neuro-2a细胞并分为3组:正常对照组,过氧化氢100μmol/L刺激组,miR-99a预处理组(转染miRNA-99a mimics+过氧化氢100μmol/L刺激),用CCK-8试剂盒检测细胞存活率,生化试剂盒检测还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(nicotinamide adenine dinucleotide,NADH)含量和总超氧化物歧化酶(total superoxide dismutase,T-SOD)、锰超氧化物歧化酶(manganese superoxide dismutase,MnSOD)活性,Western blotting检测突触小体相关蛋白(synaptosoma associated protein of molecular mass 25 000,SNAP25)及Mn-SOD、细胞外超氧化物歧化酶(extracellular SOD,EC-SOD)的蛋白表达水平。结果与正常对照组相比,过氧化氢刺激的2组细胞存活率明显下降,分别为85%和89%(P<0.05),但miR-99a预处理组的细胞存活率下降程度较小仅为11%(P<0.05)。进一步研究发现,过氧化氢刺激引起细胞T-SOD、Mn-SOD活性降低(P<0.05),转染miR-99a mimics不但能增强T-SOD和Mn-SOD的活性,还能促进Mn-SOD和EC-SOD的表达(P<0.05)。过氧化氢导致细胞中NADH含量降低(P<0.05),miR-99a能够增加NADH含量甚至高于正常细胞水平(P<0.05)。miR-99a还有增加neuro-2a细胞表达SNAP25的趋势。结论 miR-99a对过氧化氢诱导neuro-2a细胞引起的氧化损伤具有保护作用。 展开更多
关键词 miR-99a neuro-2a 过氧化氢 氧化损伤
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50 Hz磁场和双酚A暴露对大鼠脑组织和Neuro-2a细胞Tau蛋白磷酸化的影响
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作者 张彦文 吕艳玲 +7 位作者 马秦龙 高鹏 陈纯海 何旻蒂 张蕾 卢永辉 皮会丰 余争平 《陆军军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期950-959,共10页
目的研究50 Hz磁场、双酚A(bisphenol A,BPA)单独和联合暴露对神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法24只SD雄性大鼠,体质量(150±10)g,分为对照组(生理盐水灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场暴露组(0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露+生... 目的研究50 Hz磁场、双酚A(bisphenol A,BPA)单独和联合暴露对神经细胞Tau蛋白磷酸化的影响。方法24只SD雄性大鼠,体质量(150±10)g,分为对照组(生理盐水灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场暴露组(0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露+生理盐水灌胃)、BPA暴露组(BPA20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+50 Hz磁场假性暴露)、50 Hz磁场和BPA复合暴露组(BPA 20μg·kg^(-1)·d^(-1)灌胃+0.5 mT、4 h/d 50 Hz磁场暴露)4组,每组6只。处理1次/d,6 d/周,连续12周。小鼠神经母细胞瘤细胞株(Neuro-2a),分为对照组、50 Hz磁场暴露组(1 mT、48 h)、BPA暴露组(100μmol/L、24 h)、50 Hz磁场+BPA复合暴露组(1 mT、48 h+100μmol/L,24 h)4组。大鼠暴露结束按标准方法取材,组织免疫荧光化学方法检测大脑皮层和海马脑组织Tau-Thr^(231)、Tau-Ser^(404)的表达以及细胞凋亡。细胞实验暴露后采用CCK-8法检测细胞活力,采用细胞免疫荧光化学和Western blot方法检测Tau-Thr^(231)、TauSer;、Caspase-3的表达。结果50 Hz磁场暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05);BPA暴露或与50 Hz磁场复合暴露12周后,大鼠皮层和海马脑区Tau-Thr^(231)位点磷酸化水平、皮层Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显升高(P<0.05),复合暴露组皮层和海马脑区细胞凋亡水平变化明显(P<0.05)。50 Hz磁场暴露、BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞活力均明显低于对照组(P<0.05)。50 Hz磁场暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平明显高于对照组(P<0.05);BPA单独暴露或与50 Hz磁场复合暴露48 h后,Neuro-2a细胞Tau-Thr^(231)位点和Tau-Ser^(404)位点磷酸化水平、Caspase-3的表达水平明显升高(P<0.05)。结论50 Hz磁场、BPA暴露可引起神经细胞Tau蛋白不同位点过度磷酸化,并且二者之间存在协同效应,可引起神经细胞损伤。 展开更多
关键词 50 Hz磁场 双酚A 雄性大鼠 neuro-2a细胞 TAU蛋白磷酸化
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激活素A对Neuro-2a细胞电压门控钠电流的作用
5
作者 孙洋 柳忠辉 +3 位作者 王轶楠 刘海岩 王东辉 葛敬岩 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期837-840,F0002,共5页
目的:研究激活素A(activinA)对Neuro-2a细胞电压门控钠电流(INa)的作用及其机制,为激活素A在神经系统疾病中的应用奠定基础。方法:培养小鼠源性Neuro-2a细胞,分为IgG对照组和抗激活素受体ⅡA(ActRⅡA)抗体染色组,免疫组织化学染色观察A... 目的:研究激活素A(activinA)对Neuro-2a细胞电压门控钠电流(INa)的作用及其机制,为激活素A在神经系统疾病中的应用奠定基础。方法:培养小鼠源性Neuro-2a细胞,分为IgG对照组和抗激活素受体ⅡA(ActRⅡA)抗体染色组,免疫组织化学染色观察ActRⅡA在Neuro-2a细胞中是否表达;将Neuro-2a细胞随机分为正常对照组和激活素A组,采用全细胞膜片钳技术检测激活素A对Neuro-2a细胞INa的作用;采用RT-PCR检测激活素A对血管活性肠肽(VIP)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA表达的影响。结果:正常Neuro-2a细胞中可检测到ActRⅡA的表达;与正常对照组比较,激活素A明显增加Neuro-2a细胞INa(P<0.05);激活素A组Neuro-2a细胞VIPmRNA表达明显高于正常对照组(P<0.05),而iNOSmRNA表达低于正常对照组(P<0.05)。结论:激活素A具有增加Neuro-2a细胞电压门控Na+电流的作用,VIP和iNOS途径可能参与了激活素A调控神经细胞的功能。 展开更多
关键词 激活素A neuro-2a细胞 电压门控性钠电流
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C57小鼠LATl真核表达载体的构建及其对Neuro-2a细胞的影响
6
作者 卫兵艳 刘田福 +1 位作者 樊林花 刘茂林 《中国比较医学杂志》 CAS 2014年第5期25-30,F0003,共7页
目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,... 目的构建C57小鼠L型氨基酸转运载体1(LAT1)的真核表达载体,转染Neuro-2a肿瘤细胞进行表达,探讨LAT1对Neuro-2a细胞增殖及凋亡的影响。方法采用RT-PCR扩增出LAT1全长目的基因,定向克隆pcDNA3.1表达载体,构建pcDNA3.1-LAT1重组表达质粒,通过脂质体法将阳性克隆转染Neuro-2a细胞,经G418筛选获得稳定表达株后,用RT-PCR和western blot蛋白印迹法检测LAT1的表达情况。通过MTT法检测各组Neuro-2a细胞的增殖情况,并借助流式细胞仪检测LAT1对Neuro-2a细胞增殖和凋亡的影响。结果成功构建小鼠pcDNA3.1-LAT1真核表达载体,酶切和测序证实其序列正确,并成功转染Neuro-2a细胞建立稳定转染细胞系。MTT法显示转染重组质粒pcDNA3.1-LAT1的Neuro-2a细胞增殖速度显著高于对照组(P<0.05),且流式细胞术检测转染组对Neuro-2a细胞具有促进增殖抑制凋亡的作用。结论转染pcDNA3.1-LAT1质粒的Neuro-2a细胞能成功表达LAT1蛋白,且LAT1对Neuro-2a细胞的增殖和凋亡均有显著影响,为进一步研究LAT1的生物学作用奠定了重要基础。 展开更多
关键词 L型氨基酸转运载体1 真核表达载体 neuro-2a细胞 增殖 凋亡
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基于Neuro-SM的新型HBT晶体管直流特性建模
7
作者 闫淑霞 张爽 《天津工业大学学报》 CAS 北大核心 2021年第6期66-70,共5页
为在不降低建模设计要求的条件下改进建模方法,提高建模精度,对神经网络空间映射(neuro-space mapping,Neuro-SM)直流特性建模方法进行优化,提出了一种适用于异质结双极型晶体管(heterojunction bipolar transistor,HBT)的新型Neuro-SM... 为在不降低建模设计要求的条件下改进建模方法,提高建模精度,对神经网络空间映射(neuro-space mapping,Neuro-SM)直流特性建模方法进行优化,提出了一种适用于异质结双极型晶体管(heterojunction bipolar transistor,HBT)的新型Neuro-SM模型,该方法在输入映射基础上增加了输出映射神经网络,并将该模型在HBT晶体管实例中进行验证。结果表明:输入输出映射网络可以共同作用将粗模型的电流电压信号映射到细模型,新型Neuro-SM模型可以自动调整输入信号以准确地匹配设备数据;通过HBT晶体管的实验证明,新型Neuro-SM模型在直流特性建模中可以达到优化的效果,且建模误差由传统Neuro-SM模型的0.744%降低到0.477%,比传统Neuro-SM模型提高了精度。 展开更多
关键词 neuro-SM 输出映射神经网络 HBT晶体管 直流特性 建模
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基于Neuro-Fuzzy方法的Web服务器访问流量预测
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作者 周咏梅 阳爱民 《计算机工程》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期77-80,共4页
Neuro-Fuzzy方法是将神经网络和模糊逻辑进行有机的结合,用于解决复杂的非线性问题;用它来进行Web服务器流量预测,是一种新的思路和方法。该文介绍了模型构造的基本思想、结构、算法,也介绍了进化式聚类方法和预测过程;同时,给出... Neuro-Fuzzy方法是将神经网络和模糊逻辑进行有机的结合,用于解决复杂的非线性问题;用它来进行Web服务器流量预测,是一种新的思路和方法。该文介绍了模型构造的基本思想、结构、算法,也介绍了进化式聚类方法和预测过程;同时,给出了实验数据及分析。 展开更多
关键词 neuro-Fuzzy方法 Web流量预测 进化式聚类方法
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0.22太赫兹电磁辐射暴露致神经母细胞瘤Neuro-2a细胞损伤的非热效应研究 被引量:8
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作者 马秦龙 陈纯海 +9 位作者 林敏 陶嘉雯 邓平 高鹏 卢永辉 皮会丰 何旻蒂 张蕾 张彦文 余争平 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第23期2267-2273,2289,共8页
目的探讨0.22太赫兹(terahertz,THz)电磁辐射暴露致小鼠神经母细胞瘤细胞株——Neuro-2a细胞损伤的非热效应特点。方法以Neuro-2a细胞作为体外实验暴露模型,采用频率为0.22 THz,平均功率密度为0(Sham组)、25(25 mW/cm^2辐照组)、50 mW/c... 目的探讨0.22太赫兹(terahertz,THz)电磁辐射暴露致小鼠神经母细胞瘤细胞株——Neuro-2a细胞损伤的非热效应特点。方法以Neuro-2a细胞作为体外实验暴露模型,采用频率为0.22 THz,平均功率密度为0(Sham组)、25(25 mW/cm^2辐照组)、50 mW/cm^2(50 mW/cm^2辐照组)辐照细胞,辐照时间为5 min,监测辐照引起的细胞培养基温度变化;于暴露后24 h检测细胞增殖(EdU阳性细胞比例和细胞活力)、凋亡(γH2AX、TUNEL阳性细胞比例、Bax与Bcl2基因表达水平);于暴露后48 h分析细胞突触生长(突触长度、分支数目及Tubb3与Syp基因表达水平)的变化情况。结果与Sham组比较,两辐照组细胞培养基温度升高在0.1~0.4℃;EdU阳性细胞比例、细胞活力、γH2AX和TUNEL阳性细胞比例及Bax、Bcl2基因表达水平均无明显改变;仅50 mW/cm^2辐照组细胞突触长度和分支数目较Sham组明显减少(P<0.01),Tubb3和Syp基因表达也明显降低(P<0.05)。结论THz辐射暴露以非热效应为主,可抑制Neuro-2a细胞突触生长,而不影响细胞增殖和凋亡,提示神经细胞突触生长是THz辐射产生神经生物效应的敏感靶标。 展开更多
关键词 太赫兹辐射 细胞增殖 细胞凋亡 突触生长 neuro-2a细胞
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京尼平通过线粒体动力学缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡 被引量:6
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作者 谢祥军 吴菲菲 +3 位作者 王圣明 拜云虎 王亚云 杨瑞华 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期320-326,共7页
目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组... 目的:观察京尼平(genipin)对H2O2诱导Neuro-2a细胞凋亡的影响,并对其机制进行初步探讨。方法:体外培养Neuro-2a细胞,利用400μmol/L H2O2诱导6 h建立Neuro-2a凋亡模型。处于对数生长期的Neuro-2a细胞随机分为对照组、模型组、京尼平组、京尼平预处理后模型组。MTT法测定细胞存活率;倒置相差显微镜观察细胞形态;Annexin V-FITC/PI双染法流式细胞仪检测细胞凋亡率;DCFH-DA(2,7-二氯荧光素二乙酸酯)染色、流式细胞仪检测细胞内线粒体活性氧(ROS)的产生;qRT-PCR检测UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1 mRNA表达;Western blot测定UCP2、UCP4、Mfn2、Drp1蛋白表达。结果:与对照组相比,模型组细胞存活率显著降低,细胞凋亡率增加,ROS生成量升高,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达增加,Mfn2蛋白及mRNA表达降低,UCP4及mRNA蛋白表达无明显变化。提前给予京尼平(40μmol/L)干预后,与模型组相比,细胞存活率提高,细胞凋亡率降低,ROS生成量减少,同时UCP2、Drp1蛋白及mRNA表达减少,Mfn2蛋白及mRNA表达升高,但UCP4蛋白及mRNA表达无明显变化。以上指标相比,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。结论:适宜浓度的京尼平能缓解氧化应激诱导的Neuro-2a细胞凋亡,其机制可能与抑制UCP2蛋白表达,促进线粒体融合进而改善线粒体功能有关。 展开更多
关键词 京尼平 neuro-2a细胞 线粒体融合 氧化应激 凋亡
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BDE47对Neuro-2a细胞毒性效应及作用机制 被引量:2
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作者 李振伟 刘畅 +5 位作者 李春娜 邵静 李亚晨 李双月 刘晓晖 韩璐 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期145-150,共6页
探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenylether,BDE 47)对神经细胞Neuro-2a的毒性影响及机制。将Neuro-2a细胞暴露于浓度为6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1的BDE 47,采用MTT法检测细胞存活率、... 探讨2,2',4,4'-四溴联苯醚(2,2',4,4'-tetrabromodiphenylether,BDE 47)对神经细胞Neuro-2a的毒性影响及机制。将Neuro-2a细胞暴露于浓度为6.25、12.5、25、50、100μmol·L-1的BDE 47,采用MTT法检测细胞存活率、荧光探针DCFH-DA检测细胞活性氧生成量、吖啶橙检测溶酶体膜通透性、罗丹明123检测细胞线粒体膜电位、Annexin V-FITC检测细胞凋亡、Western blot检测组织蛋白酶B(Cathespin B)表达。结果显示,与对照组相比,12.5、25、50、100μmol·L^(-1)BDE 47显著降低Neuro-2a细胞存活率和细胞线粒体膜电位(P<0.05);6.25、12.5、25、50、100μmol·L^(-1)BDE 47显著诱导活性氧含量升高(P<0.05),增加Neuro-2a细胞溶酶体膜通透性(P<0.05),诱导Neuro-2a细胞凋亡(P<0.05),升高Cathespin B蛋白表达(P<0.05)。结果表明,BDE 47可能通过介导溶酶体-活性氧-线粒体环路,诱导Neuro-2a细胞凋亡。 展开更多
关键词 BDE 47 neuro-2a 神经毒性 溶酶体 线粒体 活性氧 凋亡
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EZH2抑制剂GSK126对Neuro-2a细胞增殖分化的影响及其可能机制 被引量:2
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作者 林伟仁 朱锋 +2 位作者 应荣彪 陈亚天 曾玲晖 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期289-290,共2页
神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)能抑制相关抑癌基因,明显增加... 神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)是常见的儿童恶性肿瘤,在手术、放化疗及介入等多种手段综合治疗下,总体疗效仍然极差。近年来研究发现,果蝇zeste基因增强子同源物2(enhancer of zeste homolog 2,EZH2)能抑制相关抑癌基因,明显增加神经母细胞瘤发生、发展的风险。GSK126是一种新型的选择性EZH2抑制剂,其在实体瘤方面的药效探究目前相对较少。 展开更多
关键词 EZH2抑制剂 GSK126 neuro-2a细胞 MTOR信号通路 凋亡 分化
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稳定低表达GSNOR细胞系Neuro-2a的构建及其对S-亚硝基化的影响
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作者 严洁萍 韩臻平 +5 位作者 李婷婷 王思懿 高立 罗双 李汉兵 黄萍 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1547-1552,共6页
目的:探讨转染慢病毒载体构建稳定低表达S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)的小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞系,并考察稳定低表达GSNOR对S-亚硝基化修饰水平的影响。方法:构建靶向GSNOR的慢病毒载体,用LipoF... 目的:探讨转染慢病毒载体构建稳定低表达S-亚硝基谷胱甘肽还原酶(S-nitrosoglutathione reductase,GSNOR)的小鼠神经母细胞瘤Neuro-2a细胞系,并考察稳定低表达GSNOR对S-亚硝基化修饰水平的影响。方法:构建靶向GSNOR的慢病毒载体,用LipoFiter脂质体转染Neuro-2a细胞,并用嘌呤霉素筛选稳定低表达GSNOR的细胞系。光镜观察Neuro-2a细胞的形态变化,CCK-8法检测转染不同时间后的细胞活力,RT-qPCR和Western blot检测GSNOR的mRNA和蛋白表达水平。生物素转换法检测转染后Neuro-2a细胞内总S-亚硝基化蛋白水平。结果:HBLV-m-ADH5-shRNA1-PURO慢病毒载体序列与目的序列结果一致,提示慢病毒载体构建成功。嘌呤霉素筛选后,光镜观察Neuro-2a细胞形态良好,CCK-8实验结果显示在24、48、72和96 h时点细胞活力无显著差异,提示转染对细胞活力无明显影响。转染第2、4和6代后细胞内GSNOR mRNA水平分别是空载病毒组的37.02%、40.66%和30.13%,均显著降低(P<0.01),GSNOR蛋白表达水平较空载病毒组亦显著下降(P<0.01)。此外,稳定低表达GSNOR的Neuro-2a细胞中蛋白S-亚硝基化修饰水平显著上调(P<0.01)。结论:稳定低表达GSNOR的Neuro-2a细胞系构建成功,GSNOR低表达可上调胞内总蛋白的S-亚硝基化修饰水平。 展开更多
关键词 S-亚硝基谷胱甘肽还原酶 慢病毒 neuro-2a细胞 S-亚硝基化
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RHBDF2-shRNA慢病毒载体的构建和Neuro-2a-RHBDF2-shRNA稳转细胞系的建立 被引量:2
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作者 李胜男 陈吴海 +3 位作者 陈少凤 邓福 朱佩仪 李友 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2019年第6期1224-1230,I0016,共8页
目的:构建RHBDF2-shRNA慢病毒载体,建立Neuro-2a-RHBDF2-shRNA稳转细胞系,并检测稳转细胞株中RHBDF2 mRNA和蛋白表达水平。方法:根据NCBI提供的RHBDF2基因序列,设计并合成针对RHBDF2基因干扰靶点的shRNA-oligo,退火后将其连接到经Eco R... 目的:构建RHBDF2-shRNA慢病毒载体,建立Neuro-2a-RHBDF2-shRNA稳转细胞系,并检测稳转细胞株中RHBDF2 mRNA和蛋白表达水平。方法:根据NCBI提供的RHBDF2基因序列,设计并合成针对RHBDF2基因干扰靶点的shRNA-oligo,退火后将其连接到经Eco RⅠ和AgeⅠ酶切的慢病毒载体FV067-RNAi-EGFP-Puro中,构建FV067-RHBDF2-shRNA慢病毒质粒,通过PCR筛选阳性克隆并测序鉴定。使用HEK 293T细胞和Neuro-2a细胞作为实验材料,FV067 Vector作为对照组,FV067-RHBDF2-shRNA作为实验组。通过Lipofectamine 2000将FV067 Vector和FV067-RHBDF2-shRNA慢病毒质粒分别与慢病毒辅助质粒psPAX2和pMD2G共转染至HEK 293T细胞中,转染48 h收集并纯化慢病毒,分别将对照组FV067 Vector和实验组FV067-RHBDF2-shRNA慢病毒在感染复数(MOI)为50时感染Neuro-2a细胞,荧光显微镜下观察细胞中绿色荧光蛋白的表达,采用2 mg·L^-1嘌呤霉素筛选出RHBDF2基因稳定沉默的细胞系。实时荧光定量PCR法检测2组细胞中RHBDF2 mRNA表达水平,免疫印迹法检测2组细胞中RHBDF2蛋白表达水平。结果:PCR和测序,RHBDF2-shRNA慢病毒载体中的干扰序列与设计合成的RHBDF2-shRNA-oligo序列完全一致。FV067 Vector慢病毒的滴度为5×10^8 TU·mL^-1,FV067-RHBDF2-shRNA慢病毒的滴度为3×10^8 TU·mL^-1。实时荧光定量PCR检测,实验组稳转细胞株中RHBDF2 mRNA表达水平比对照组降低了52.26%(t=11.44,P=0.0076)。免疫印迹法检测,与对照组比较,实验组RHBDF2-shRNA稳转细胞系中RHBDF2蛋白表达水平降低了47%(t=6.374,P=0.0078)。结论:成功构建了FV067-RHBDF2-shRNA慢病毒载体并建立了Neuro-2a-RHBDF2-shRNA稳转细胞系,且Neuro-2a-RHBDF2-shRNA稳转细胞系中RHBDF2 mRNA和蛋白表达水平明显降低。 展开更多
关键词 RHBDF2 RNA干扰 慢病毒 HEK293T细胞neuro-2a细胞 稳转细胞系
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Ant colony optimization algorithm and its application to Neuro-Fuzzy controller design 被引量:11
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作者 Zhao Baojiang Li Shiyong 《Journal of Systems Engineering and Electronics》 SCIE EI CSCD 2007年第3期603-610,共8页
An adaptive ant colony algorithm is proposed based on dynamically adjusting the strategy of updating trail information. The algorithm can keep good balance between accelerating convergence and averting precocity and s... An adaptive ant colony algorithm is proposed based on dynamically adjusting the strategy of updating trail information. The algorithm can keep good balance between accelerating convergence and averting precocity and stagnation. The results of function optimization show that the algorithm has good searching ability and high convergence speed. The algorithm is employed to design a neuro-fuzzy controller for real-time control of an inverted pendulum. In order to avoid the combinatorial explosion of fuzzy rules due tσ multivariable inputs, a state variable synthesis scheme is employed to reduce the number of fuzzy rules greatly. The simulation results show that the designed controller can control the inverted pendulum successfully. 展开更多
关键词 neuro-fuzzy controller ant colony algorithm function optimization genetic algorithm inverted pen-dulum system.
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胞质分裂作用因子4过表达慢病毒载体的构建和稳定转染Neuro-2a细胞的建立
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作者 李胜男 何嘉文 +1 位作者 廖科棋 李友 《吉林大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2024年第5期1322-1329,共8页
目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限... 目的:构建胞质分裂作用因子4(DOCK4)过表达慢病毒载体,建立DOCK4稳定过表达的Neuro-2a细胞。方法:在美国国家生物信息中心(NCBI)查找DOCK4的序列并设计合成引物,采用聚合酶链式反应(PCR)法扩增获取DOCK4基因序列,通过Bam HⅠ和AgeⅠ限制性内切酶酶切后,将其与酶切后的慢病毒载体GV492进行连接,构建GV492-DOCK4过表达重组质粒,PCR法鉴定筛选出与目的基因片段长度大小相近的阳性克隆。将GV492-对照质粒和GV492-DOCK4过表达重组质粒分别转染至HEK293T细胞中,转染48 h后收集慢病毒进行包装并测定病毒滴度。将Neuro-2a细胞分为GV492-对照组和GV492-DOCK4组,分别采用GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒感染Neuro-2a细胞,慢病毒感染复数(MOI)为100,感染72 h后采用嘌呤霉素(10 mg·L^(-1))筛选出成功感染GV492-对照组慢病毒和GV492-DOCK4过表达慢病毒的Neuro-2a细胞,荧光显微镜观察各组Neuro-2a细胞生长状态及绿色荧光蛋白表达情况;采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)法和Western blotting法检测各组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA和DOCK4蛋白表达水平。结果:PCR检测,GV492-DOCK4过表达重组质粒的基因片段长度约为691 bp,测序结果显示GV492-DOCK4过表达重组质粒基因序列与设计合成的DOCK4过表达序列一致;GV492-对照组和GV492-DOCK4过表达组慢病毒的滴度分别为2.5×10^(8) TU·mL^(-1)和2.5×10^(8) TU·mL^(-1);荧光显微镜观察,各组Neuro-2a细胞生长状态良好且存在绿色荧光蛋白表达;RT-qPCR法检测,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4 mRNA表达水平明显升高(P<0.01);Western blotting法检测,各组细胞在相对分子质量225000附近出现特异性条带,与GV492-对照组比较,GV492-DOCK4组Neuro-2a细胞中DOCK4蛋白表达水平明显升高(P<0.01)。结论:本研究成功构建DOCK4过表达慢病毒载体,建立了稳定过表达DOCK4的Neuro-2a细胞。 展开更多
关键词 胞质分裂作用因子4 过表达慢病毒载体 neuro-2a细胞 稳定转染 过表达慢病毒
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Neuro-Computing Applications in Security of Network Information Systems
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作者 Yao, Min Sun, Qiaoping 《Journal of Systems Engineering and Electronics》 SCIE EI CSCD 1999年第2期65-68,共4页
Currently computing information systems have entered a new stage and the security of systems is more and more serious, and the research on system security is developing in depth. This paper discusses neuro-computing a... Currently computing information systems have entered a new stage and the security of systems is more and more serious, and the research on system security is developing in depth. This paper discusses neuro-computing applications in security of network information systems. 展开更多
关键词 Information system Security mechanism neuro-computing.
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Performance Potential-based Neuro-dynamic Programming for SMDPs 被引量:10
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作者 TANGHao YUANJi-Bin LUYang CHENGWen-Juan 《自动化学报》 EI CSCD 北大核心 2005年第4期642-645,共4页
An alpha-uniformized Markov chain is defined by the concept of equivalent infinitesimalgenerator for a semi-Markov decision process (SMDP) with both average- and discounted-criteria.According to the relations of their... An alpha-uniformized Markov chain is defined by the concept of equivalent infinitesimalgenerator for a semi-Markov decision process (SMDP) with both average- and discounted-criteria.According to the relations of their performance measures and performance potentials, the optimiza-tion of an SMDP can be realized by simulating the chain. For the critic model of neuro-dynamicprogramming (NDP), a neuro-policy iteration (NPI) algorithm is presented, and the performanceerror bound is shown as there are approximate error and improvement error in each iteration step.The obtained results may be extended to Markov systems, and have much applicability. Finally, anumerical example is provided. 展开更多
关键词 决议过程 SMDP 执行电位 神经动力学 MARKOV链 优化设计
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圆小囊结构和功能的研究进展
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作者 李佳 马卓 +3 位作者 于畅 王丹丹 张金龙 马志禹 《动物医学进展》 北大核心 2025年第6期105-109,共5页
圆小囊(SR)是兔回肠末端与盲肠相接处形成的一个壁厚而膨大的圆囊,主要由丰富的淋巴组织构成,为兔特有的外周免疫器官。圆小囊在兔的生理活动中具有重要地位,发挥着消化吸收、免疫防御、神经内分泌等多种生理功能。圆小囊结构特殊、功... 圆小囊(SR)是兔回肠末端与盲肠相接处形成的一个壁厚而膨大的圆囊,主要由丰富的淋巴组织构成,为兔特有的外周免疫器官。圆小囊在兔的生理活动中具有重要地位,发挥着消化吸收、免疫防御、神经内分泌等多种生理功能。圆小囊结构特殊、功能复杂,在科学试验中具有重要研究价值和参考意义,在实际应用中具有广阔发展前景。论文从圆小囊的解剖学、组织学、影像学等方面总结了其结构特征,对圆小囊多种生理功能的研究进展做了综述,并对圆小囊抗菌肽的研究和应用进行了总结与展望。旨在为今后以圆小囊为研究对象的学者提供借鉴和参考,同时为宠物兔疾病临床诊断以及推动圆小囊抗菌肽的研究应用提供理论依据和支撑。 展开更多
关键词 圆小囊 结构 生理功能 神经-内分泌-免疫网络 抗菌肽
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人机共生:脑芯片的监管挑战和三维建构
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作者 张曼 《东北师大学报(哲学社会科学版)》 北大核心 2025年第2期116-125,共10页
神经科技创新所内含的技术和操作风险,甚至有诱发系统性风险之可能,迫使监管者必须给予有力回应。然而,固有的信息不对称、伦理审查弹性较差和法律滞后等问题,使得以普适性伦理审查和法律惩戒为核心构建的传统二维监管体系无法有效应对... 神经科技创新所内含的技术和操作风险,甚至有诱发系统性风险之可能,迫使监管者必须给予有力回应。然而,固有的信息不对称、伦理审查弹性较差和法律滞后等问题,使得以普适性伦理审查和法律惩戒为核心构建的传统二维监管体系无法有效应对芯片入脑的“人机共生”交互进化的技术特质,因此必须在伦理和法律监管维度之外增加智能维度,形塑三维监管体系。智能维度的监管致力于依靠“智能技术体系”构建精准性和限时性监管,以数据驱动为核心,构筑起精细化脑芯片数据采集和解码系统、阶段性技术风险预警机制和敏捷监管反馈循环,突破了传统科技监管的困局,创新了监管方式,实现了技术发展安全与效率的平衡。 展开更多
关键词 神经科技 脑芯片 人机共生 智能治理 数据
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