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Lhx8基因沉默抑制NGF诱导的海马NSCs向胆碱能神经元分化的研究 被引量：1
1
作者 李浩明 金国华 +7 位作者 朱培培 施金洪 邹琳清 张新化 田美玲 衣昕 秦建兵 成翔 《神经解剖学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第6期629-633,共5页
目的:明确Lhx8在神经生长因子(nerve growth factors,NGF)促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化中的作用。方法:体外培养海马神经干细胞并应用NGF促进其向胆碱能神经元分化的过程中,将构建的Lhx8干扰慢病毒加入至培养液中,7 d后应用免... 目的:明确Lhx8在神经生长因子(nerve growth factors,NGF)促进海马神经干细胞向胆碱能神经元分化中的作用。方法:体外培养海马神经干细胞并应用NGF促进其向胆碱能神经元分化的过程中,将构建的Lhx8干扰慢病毒加入至培养液中,7 d后应用免疫荧光标记技术检测分化所得胆碱乙酰转移酶(choline acetyltransferase,Ch AT)和微管相关蛋白-2(microtubule-associated protein 2,MAP-2)双标阳性细胞。结果:在空白对照组中,仅检测到少量的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞;在NGF组或是NGF联合阴性对照慢病毒组中则可检测到较多的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞;在加入Lhx8干扰慢病毒的实验组中,分化所得的Ch AT/MAP-2双标阳性细胞数较NGF组或是NGF联合阴性慢病毒组明显减少。结论:Lhx8基因沉默抑制了NGF诱导的海马神经干细胞向胆碱能神经元的分化。 展开更多
关键词 Lhx8 基因沉默 神经生长因子 神经干细胞 胆碱能神经元 海马
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牦牛NGF基因克隆及其在生殖器官中的表达定位 被引量：3
2
作者 邬建飞 刘宇 +5 位作者 马瑶 蒋旭东 胡双阁 龚三你 字向东 卢建远 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期778-790,共13页
旨在探究NGF基因的生物学特性及其在母牦牛生殖器官中的表达特性。本研究收集黄体期母牦牛的心、肝、脾、肺、肾以及胎牛期、卵泡期、黄体期、妊娠期母牦牛的卵巢、子宫和输卵管(n=3),利用RT-PCR克隆牦牛NGF基因,并对其序列进行生物信... 旨在探究NGF基因的生物学特性及其在母牦牛生殖器官中的表达特性。本研究收集黄体期母牦牛的心、肝、脾、肺、肾以及胎牛期、卵泡期、黄体期、妊娠期母牦牛的卵巢、子宫和输卵管(n=3),利用RT-PCR克隆牦牛NGF基因,并对其序列进行生物信息学分析,利用RT-qPCR技术分析NGF基因的组织表达特性,利用免疫组化技术(IHC)定位NGF蛋白在牦牛生殖器官中的表达分布。结果显示,牦牛NGF基因CDS区全长为726 bp,共编码241个氨基酸,编码的蛋白质属于碱性不稳定亲水蛋白;NGF氨基酸系统进化树结果显示,牦牛首先与黄牛聚为一类,与其他物种的同源性均高于87%,说明该基因在进化过程中表现出高度保守性。RT-qPCR结果显示,牦牛NGF基因在卵巢中的表达量极显著高于心、肝、肾、脾、肺、子宫和输卵管(P<0.01)。黄体期卵巢中NGF的相对表达量最高,极显著高于胎牛期、卵泡期和妊娠期(P<0.01);妊娠期子宫NGF相对表达量较高,显著高于胎牛期和卵泡期(P<0.05);各时期输卵管的NGF mRNA表达差异不显著。IHC结果显示,NGF蛋白主要在牦牛卵泡的颗粒细胞和卵巢上皮层细胞中表达,且在颗粒层细胞表达最高;在子宫内膜和输卵管的黏膜上皮细胞也有表达。综上,牦牛NGF基因序列在进化过程中较为保守,在卵巢中表达量较高,可能在维持母牦牛卵巢机能和妊娠以及促进黄体功能方面发挥重要的调控作用。 展开更多
关键词 牦牛 ngf基因 卵巢 组织表达 免疫组化
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人神经生长因子的基因克隆和序列分析 被引量：7
3
作者 马巍 吴玲 +4 位作者 刘淼 任惠民 扬广笑 王全颖 王德利 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期338-341,共4页
目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制... 目的　克隆人神经生长因子基因编码区。方法　由人末梢血白细胞中提取细胞总DNA ,利用PCR法 ,从DNA中扩增出人神经生长因子编码区基因DNA片段 ;将获得的基因片段插入 pGEM T Easy质粒中 ,转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆 ,利用限制性内切酶酶切核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。结果　经质粒DNA酶切分析及序列测定 ,获得了人神经生长因子DNA片段序列。结论　首次由人白细胞DNA中克隆获得了人神经生长因子基因 ,为神经生长因子的基因治疗提供了前提条件。 展开更多
关键词 人神经生长因子 基因克隆 序列分析 聚合酶链反应
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