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MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用
1
作者
王各各
李娇娜
+4 位作者
杜峰
邓舒
梁佳元
曹雅明
罗恩杰
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1068-1072,共5页
目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒...
目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。
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关键词
疟原虫
质粒
基因打靶
multisite
GATEWAY技术
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职称材料
mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法
被引量：
1
2
作者
周家伟
武志强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期172-180,共9页
【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已...
【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考。【方法】以水稻线粒体WA352基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体。【结果】第一步组装构建10个载体,第二步组装构建2个载体,最后通过multisite LR反应构建1个终表达载体。【结论】详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展。
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关键词
线粒体基因编辑
mitoTALENs载体
Platinum
gate
TALEN
assembly
multisite
LR
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职称材料
基于WEB服务器方式中优化ClearCase手动同步系统的实现
3
作者
赵新跃
顾玉雯
《计算机应用与软件》
CSCD
北大核心
2008年第1期190-192,共3页
针对ClearCase同步功能的不足,使用网页浏览的方式,运用适合Unix、Solaris等操作系统的Perl脚本语言及ASP客户端脚本语言编写程序代码,改善繁琐的操作界面,简化手动同步的步骤,提高手动同步功能的实用价值,构建了具有Web服务器方式的运...
针对ClearCase同步功能的不足,使用网页浏览的方式,运用适合Unix、Solaris等操作系统的Perl脚本语言及ASP客户端脚本语言编写程序代码,改善繁琐的操作界面,简化手动同步的步骤,提高手动同步功能的实用价值,构建了具有Web服务器方式的运行环境,优化了手动同步功能。
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关键词
CLEARCASE
multisite
WEB服务器
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职称材料
题名
MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用
1
作者
王各各
李娇娜
杜峰
邓舒
梁佳元
曹雅明
罗恩杰
机构
中国医科大学基础医学院免疫学教研室
沈阳市中医药学校基础教研室
中国医科大学基础医学院病原生物学教研室
出处
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第12期1068-1072,共5页
基金
国家自然科学基金资助项目(30972572)
文摘
目的构建可条件性敲除约氏疟原虫ebl基因的打靶载体。方法以约氏疟原虫基因组DNA为模板,PCR扩增EBL-3U和EBL-5U1、EBL-5U2+EBL.orf同源臂片段,利用MultiSite Gateway技术,完成若干DNA片段的定性重组,构建打靶载体pCHD-EBL-RFT,并对质粒酶切和测序鉴定。PCR扩增约氏疟原虫UIS4-5U片段,置换质粒PbUIS4/flp中原有同源臂,并通过位点特异突变技术,获取AvrII和NheI两种线性化位点,构建插入载体PyUIS4/flp。结果构建出打靶载体pCHD-EBL-FRT和PyUIS4/flp,酶切鉴定和测序分析正确。结论将MultiSite Gateway技术成功地用于疟原虫条件打靶载体的构建,建立了以MultiSite Gateway技术为基础的打靶载体构建体系。
关键词
疟原虫
质粒
基因打靶
multisite
GATEWAY技术
Keywords
Plasmodium
plasmid
gene targeting
multisite
gateway technology
分类号
R382.3 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法
被引量：
1
2
作者
周家伟
武志强
机构
农业农村部合成生物学重点实验室中国农业科学院深圳农业基因组研究所(岭南现代农业科学与技术广东省实验室深圳分中心)
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024年第10期172-180,共9页
基金
国家自然科学基金项目(32170238)
广东省“珠江人才计划”青年拔尖计划(20210N02N792)
中国农业科学院青年英才计划(11024316000100)。
文摘
【目的】mitoTALENs植物线粒体基因编辑技术能够高效地实现线粒体基因的敲除,进而有效实现线粒体基因功能的研究,但mitoTALENs载体构建过程非常的繁琐复杂且目前仍没有较为系统完整的载体构建方法作为参考。为解决这个问题,结合前人已发表的及本实验室摸索出的方法对mitoTALENs载体构建的完整过程进行了详尽描述,为之后利用mitoTALENs技术进行植物线粒体基因功能研究的研究者们提供重要参考。【方法】以水稻线粒体WA352基因作为目的基因,利用其序列特异性区域设计了靶点TAL,首先采用Platinum gate TALEN assembly的两步组装技术分别构建了mitoTALENs的TALEN-left和TALEN-right载体,然后利用multisite LR反应将TALEN-left、TALEN-right及含有其他功能元件的进入载体和目的载体进行反应,生成最终的表达载体。【结果】第一步组装构建10个载体,第二步组装构建2个载体,最后通过multisite LR反应构建1个终表达载体。【结论】详细介绍了mitoTALENs载体的构建过程,为该技术使用者提供重要参考,以促进植物线粒体基因编辑研究领域的发展。
关键词
线粒体基因编辑
mitoTALENs载体
Platinum
gate
TALEN
assembly
multisite
LR
Keywords
mitochondrial gene editing
mitoTALENs vector
Platinum gate TALEN assembly
multisite
LR
分类号
Q943.2 [生物学—植物学]
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职称材料
题名
基于WEB服务器方式中优化ClearCase手动同步系统的实现
3
作者
赵新跃
顾玉雯
机构
华东师范大学教育信息技术学系
出处
《计算机应用与软件》
CSCD
北大核心
2008年第1期190-192,共3页
文摘
针对ClearCase同步功能的不足,使用网页浏览的方式,运用适合Unix、Solaris等操作系统的Perl脚本语言及ASP客户端脚本语言编写程序代码,改善繁琐的操作界面,简化手动同步的步骤,提高手动同步功能的实用价值,构建了具有Web服务器方式的运行环境,优化了手动同步功能。
关键词
CLEARCASE
multisite
WEB服务器
Keywords
ClearCase
multisite
Web server
分类号
TP311.52 [自动化与计算机技术—计算机软件与理论]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MultiSite Gateway技术在疟原虫条件性基因打靶载体快速构建中的应用
王各各
李娇娜
杜峰
邓舒
梁佳元
曹雅明
罗恩杰
《中国医科大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2012
0
在线阅读
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职称材料
2
mitoTALENs植物线粒体基因编辑载体的构建方法
周家伟
武志强
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2024
1
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
基于WEB服务器方式中优化ClearCase手动同步系统的实现
赵新跃
顾玉雯
《计算机应用与软件》
CSCD
北大核心
2008
0
在线阅读
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职称材料
已选择
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