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猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用
被引量:
2
1
作者
宋雪
赵格
+7 位作者
王娟
黄秀梅
盖文燕
赵建梅
曲志娜
李月华
张林波
王君玮
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期710-715,共6页
目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,...
目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值。结果所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1CFU。60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100%,准确性为94%,阳性预测值为81.44%。结论多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测。
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关键词
多重直接
pcr
猪肉
食源性致病菌
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职称材料
菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌
被引量:
3
2
作者
李伟杰
赵耘
+2 位作者
杜昕波
康凯
陈敏
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010年第1期6-9,共4页
参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩...
参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。
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关键词
多杀性巴氏杆菌
菌落多重
pcr
荚膜血清型
Biolog鉴定
Carter氏间接血凝试验
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职称材料
叶片直接PCR法在玉米转基因快速检测中的应用
被引量:
4
3
作者
赵冰兵
任雯
+3 位作者
周秒依
李韩帅
刘亚
白琪林
《山西农业科学》
2019年第4期497-500,共4页
采用直接PCR方法跳过DNA提取步骤直接对小块玉米植株叶片进行转基因检测,并设计出针对转基因玉米叶片进行直接PCR及多重PCR的事件特异性检测体系和程序,从而极大简化了检测步骤,大大缩短了检测时长。通过对CC-2和2A-5转基因玉米及复合...
采用直接PCR方法跳过DNA提取步骤直接对小块玉米植株叶片进行转基因检测,并设计出针对转基因玉米叶片进行直接PCR及多重PCR的事件特异性检测体系和程序,从而极大简化了检测步骤,大大缩短了检测时长。通过对CC-2和2A-5转基因玉米及复合转基因玉米检测待测样品叶片进行直接PCR检测后发现,该直接PCR检测方法获得的PCR检测结果准确、可靠,适用于多样品玉米叶片转基因植株的快速鉴定。
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关键词
转基因玉米
叶片
pcr
直接多重
pcr
法
转基因玉米检测
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职称材料
四翼无刺线虫形态和分子鉴定
被引量:
7
4
作者
高正琴
岳秉飞
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期635-639,644,共6页
目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的...
目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的四翼无刺线虫进行筛查。应用多重PCR和测序技术鉴定四翼无刺线虫特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA。结果采用直接镜检实时动态显微视频技术在肠道中检出数量众多的四翼无刺线虫虫卵、幼虫和成虫。根据四翼无刺线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR和测序技术从分离获得的四翼无刺线虫中鉴定出特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA,与其他不同种寄生虫无交叉反应。SPF和清洁级实验动物四翼无刺线虫感染率分别为41.5%和40.8%。结论直接镜检法和多重PCR结合测序技术能够快速准确检测鉴定出四翼无刺线虫。实验动物在四翼无刺线虫的传播中可能起着重要的储存作用。因此,需要考虑该寄生虫的潜在健康危害,以防传染人类。
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关键词
四翼无刺线虫
直接镜检
多重
pcr
测序
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职称材料
题名
猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用
被引量:
2
1
作者
宋雪
赵格
王娟
黄秀梅
盖文燕
赵建梅
曲志娜
李月华
张林波
王君玮
机构
中国动物卫生与流行病学中心农业部畜禽产品质量安全风险评估实验室(青岛)
吉林农业大学生命科学学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第8期710-715,共6页
基金
农业部"国家农产品质量安全风险评估重大专项"(No.GJFP2016007)资助
留学人员科技活动项目择优资助~~
文摘
目的建立检测大肠杆菌、沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、李斯特菌和小肠耶尔森氏菌5种致病菌的多重直接PCR方法。方法根据大肠杆菌phoA、沙门氏菌invA、金黄色葡萄球菌nuc、李斯特菌hly、小肠耶尔森氏菌ail的基因序列,设计多重直接PCR引物,建立并优化多重直接PCR反应条件,检测引物的扩增特异性和灵敏性,并将所建立的方法应用于实际采集猪肉样本的检测,与金标培养法相比较,计算多重直接PCR检测法的敏感性、准确性以及阳性预测值。结果所设计的多重直接PCR引物对5种菌都有特异扩增,最低检出限量大肠杆菌为10CFU,金黄色葡萄球菌敏感性为100CFU,沙门氏菌、李斯特菌、小肠耶尔森氏菌敏感性可达1CFU。60份猪肉样本中检出大肠杆菌15份、沙门氏菌6份、金黄色葡萄球菌21份、李斯特菌20份、小肠耶尔森氏菌35份,阳性检出率均高于金标培养法,总体检测敏感性为100%,准确性为94%,阳性预测值为81.44%。结论多重直接PCR法实现了同时对各食源性致病菌敏感特异的检测,并且省去了提取模板的步骤,将检测时间缩短至3h左右,便于食品安全风险监测中常见食源性致病菌的通量检测。
关键词
多重直接
pcr
猪肉
食源性致病菌
Keywords
multiplex direct pcr
food-borne pathogens
rapid
sensitive
分类号
R378 [医药卫生—病原生物学]
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职称材料
题名
菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌
被引量:
3
2
作者
李伟杰
赵耘
杜昕波
康凯
陈敏
机构
中国兽医药品监察所
出处
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010年第1期6-9,共4页
基金
国家科技支撑计划(项目编号:2006BAD06A11)
文摘
参照文献报道的多杀性巴氏杆菌KMT1基因和荚膜生物合成位点hyaD-hyaC、bcbD、dcbF、ecbJf、cbD基因的序列合成了6对特异性引物,建立了多杀性巴氏杆菌种和型的菌落多重PCR方法。结果表明,本所保藏的A、B、D、E、F各型多杀性巴氏杆菌均扩增出了相应的预期片段,PCR结果与Biolog鉴定结果和Carter氏间接血球凝集试验结果相一致;而支气管败血波氏杆菌、胸膜肺炎放线杆菌、大肠埃希菌、猪链球菌和粪肠球菌的扩增均为阴性。
关键词
多杀性巴氏杆菌
菌落多重
pcr
荚膜血清型
Biolog鉴定
Carter氏间接血凝试验
Keywords
Pasteurella multocida
colony
multiplex
pcr
capsular serotype
biolog identification
Cater in-
direct
hemagglutination test
分类号
S852.612 [农业科学—基础兽医学]
Q789 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
叶片直接PCR法在玉米转基因快速检测中的应用
被引量:
4
3
作者
赵冰兵
任雯
周秒依
李韩帅
刘亚
白琪林
机构
山西大学生物工程学院
山西省农业科学院作物科学研究所
北京市农林科学院玉米研究中心
出处
《山西农业科学》
2019年第4期497-500,共4页
基金
北京市农林科学院科技创新能力建设专项(KJCX20170203)
北京市农林科学院青年科研基金项目(QNJJ201622)
+2 种基金
北京市农林科学院院级科技创新团队建设项目(JNKYT201603)
山西省科技攻关项目(201703D221001-10)
山西省农业科学院育种工程项目(17yzgc084)
文摘
采用直接PCR方法跳过DNA提取步骤直接对小块玉米植株叶片进行转基因检测,并设计出针对转基因玉米叶片进行直接PCR及多重PCR的事件特异性检测体系和程序,从而极大简化了检测步骤,大大缩短了检测时长。通过对CC-2和2A-5转基因玉米及复合转基因玉米检测待测样品叶片进行直接PCR检测后发现,该直接PCR检测方法获得的PCR检测结果准确、可靠,适用于多样品玉米叶片转基因植株的快速鉴定。
关键词
转基因玉米
叶片
pcr
直接多重
pcr
法
转基因玉米检测
Keywords
transgenic maize
leaf
pcr
direct
multiplex
pcr
method
transgenic maize detection
分类号
S513 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
四翼无刺线虫形态和分子鉴定
被引量:
7
4
作者
高正琴
岳秉飞
机构
中国食品药品检定研究院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015年第7期635-639,644,共6页
文摘
目的四翼无刺线虫是一种重要的人兽共患寄生虫病的病原,其对实验动物的感染危害严重。然而,缺乏有效检测鉴定四翼无刺线虫的技术。本研究目的是建立四翼无刺线虫诊断方法,为国家标准的修订提供科学依据。方法应用直接镜检法对肠道中的四翼无刺线虫进行筛查。应用多重PCR和测序技术鉴定四翼无刺线虫特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA。结果采用直接镜检实时动态显微视频技术在肠道中检出数量众多的四翼无刺线虫虫卵、幼虫和成虫。根据四翼无刺线虫的卵细胞、幼虫、雌雄成虫的大小和形态来鉴定虫种。应用多重PCR和测序技术从分离获得的四翼无刺线虫中鉴定出特定基因nd1、nd5、cox1、cytb、ITS2和28SrRNA,与其他不同种寄生虫无交叉反应。SPF和清洁级实验动物四翼无刺线虫感染率分别为41.5%和40.8%。结论直接镜检法和多重PCR结合测序技术能够快速准确检测鉴定出四翼无刺线虫。实验动物在四翼无刺线虫的传播中可能起着重要的储存作用。因此,需要考虑该寄生虫的潜在健康危害,以防传染人类。
关键词
四翼无刺线虫
直接镜检
多重
pcr
测序
Keywords
Aspiculuris tetraptera,
direct
microscopy,
multiplex
-
pcr
, sequencing
分类号
R383 [医药卫生—医学寄生虫学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
猪肉中常见致病菌的多重直接PCR法的建立与应用
宋雪
赵格
王娟
黄秀梅
盖文燕
赵建梅
曲志娜
李月华
张林波
王君玮
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2017
2
在线阅读
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职称材料
2
菌落多重PCR鉴定不同荚膜血清型的多杀性巴氏杆菌
李伟杰
赵耘
杜昕波
康凯
陈敏
《动物医学进展》
CSCD
北大核心
2010
3
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
叶片直接PCR法在玉米转基因快速检测中的应用
赵冰兵
任雯
周秒依
李韩帅
刘亚
白琪林
《山西农业科学》
2019
4
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
四翼无刺线虫形态和分子鉴定
高正琴
岳秉飞
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2015
7
在线阅读
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职称材料
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