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牛分枝杆菌mpb51-63融合基因的克隆及其原核表达
被引量:
2
1
作者
李璐璐
王春芳
+6 位作者
任飞
刘新宇
宁浩然
刘磊
李冰洁
姜秀云
何昭阳
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期898-900,共3页
为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovis mpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD-51-63和pET28a(+),将纯化的mpb51-63融合基因亚克隆至p...
为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovis mpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD-51-63和pET28a(+),将纯化的mpb51-63融合基因亚克隆至pET28a(+)中,获得了重组表达质粒pET-51-63。该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达约46 ku的外源融合蛋白,免疫印迹实验证实,该融合蛋白具有M.bovis的抗原反应性。为进一步研究mpb51-63融合基因及其表达产物作为牛结核病亚单位疫苗、核酸疫苗以及特异的诊断试剂奠定了基础。
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关键词
牛分枝杆菌
mpb51-63融合基因
克隆
原核表达
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职称材料
牛分枝杆菌mpb51-mpb70融合基因的原核表达与抗原活性初步鉴定
被引量:
2
2
作者
姜秀云
周步丹
+6 位作者
董阳
包艳红
陈敬蕊
刘磊
王春芳
徐博文
马红霞
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期805-810,共6页
目的通过获得牛分枝杆菌保护性抗原MPB51、MPB70的融合蛋白MPB51-MPB70,以提高单一蛋白的抗原性。方法采用重叠拼接PCR技术将牛分枝杆菌mpb51与mpb70基因融合,获得融合基因mpb51-mpb70,克隆至pMD19中,构建重组质粒pMD-51-70。酶切、纯...
目的通过获得牛分枝杆菌保护性抗原MPB51、MPB70的融合蛋白MPB51-MPB70,以提高单一蛋白的抗原性。方法采用重叠拼接PCR技术将牛分枝杆菌mpb51与mpb70基因融合,获得融合基因mpb51-mpb70,克隆至pMD19中,构建重组质粒pMD-51-70。酶切、纯化后连接至pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET-51-70。通过SDS-PAGE和Western blotting分析、鉴定融合蛋白的表达及抗原性。以间接ELISA比较MPB51、MPB70、MPB51-MPB70的抗原性。结果表达、纯化了45ku的融合蛋白MPB51-MPB70,并与牛结核血清发生特异性反应,且比单一蛋白反应性强。结论成功地获得了具有良好抗原性的牛分枝杆菌融合蛋白MPB51-MPB70。
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关键词
牛分枝杆菌
mpb
51
基因
mpb
70
基因
融合
蛋白
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职称材料
题名
牛分枝杆菌mpb51-63融合基因的克隆及其原核表达
被引量:
2
1
作者
李璐璐
王春芳
任飞
刘新宇
宁浩然
刘磊
李冰洁
姜秀云
何昭阳
机构
吉林农业大学动物科技学院
教育部动物生产及产品质量安全重点实验室
吉林农业大学生命科学学院
出处
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第11期898-900,共3页
基金
国家自然科学基金资助项目(30972190)
吉林省科技发展计划资助项目(20070569)
文摘
为提高牛分枝杆菌(M.bovis)单一抗原的抗原性,本研究以重叠延伸拼接PCR技术将M.bovis mpb51与mpb63基因连接,并克隆至pMD18-T中,构建重组质粒pMD-51-63。以BamHⅠ和EcoRⅠ双酶切pMD-51-63和pET28a(+),将纯化的mpb51-63融合基因亚克隆至pET28a(+)中,获得了重组表达质粒pET-51-63。该重组质粒在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,表达约46 ku的外源融合蛋白,免疫印迹实验证实,该融合蛋白具有M.bovis的抗原反应性。为进一步研究mpb51-63融合基因及其表达产物作为牛结核病亚单位疫苗、核酸疫苗以及特异的诊断试剂奠定了基础。
关键词
牛分枝杆菌
mpb51-63融合基因
克隆
原核表达
Keywords
Mycobacterium bovis
mpb
51
-
63
fusion gene
cloning
prokaryotic
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S855.2 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
牛分枝杆菌mpb51-mpb70融合基因的原核表达与抗原活性初步鉴定
被引量:
2
2
作者
姜秀云
周步丹
董阳
包艳红
陈敬蕊
刘磊
王春芳
徐博文
马红霞
机构
吉林农业大学
长春科技学院
出处
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第9期805-810,共6页
基金
国家自然科学基金(No.31572555)
吉林省科技发展计划项目(No.20170101025JC)
吉林省教育厅科学技术研究项目(No.201441)资助~~
文摘
目的通过获得牛分枝杆菌保护性抗原MPB51、MPB70的融合蛋白MPB51-MPB70,以提高单一蛋白的抗原性。方法采用重叠拼接PCR技术将牛分枝杆菌mpb51与mpb70基因融合,获得融合基因mpb51-mpb70,克隆至pMD19中,构建重组质粒pMD-51-70。酶切、纯化后连接至pET28a(+)中,构建重组表达质粒pET-51-70。通过SDS-PAGE和Western blotting分析、鉴定融合蛋白的表达及抗原性。以间接ELISA比较MPB51、MPB70、MPB51-MPB70的抗原性。结果表达、纯化了45ku的融合蛋白MPB51-MPB70,并与牛结核血清发生特异性反应,且比单一蛋白反应性强。结论成功地获得了具有良好抗原性的牛分枝杆菌融合蛋白MPB51-MPB70。
关键词
牛分枝杆菌
mpb
51
基因
mpb
70
基因
融合
蛋白
Keywords
Mycobacterium bovis
mpb
51
gene
mpb
70 gene
fusion protein
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S855.2 [农业科学—临床兽医学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
牛分枝杆菌mpb51-63融合基因的克隆及其原核表达
李璐璐
王春芳
任飞
刘新宇
宁浩然
刘磊
李冰洁
姜秀云
何昭阳
《中国预防兽医学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
2
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下载PDF
职称材料
2
牛分枝杆菌mpb51-mpb70融合基因的原核表达与抗原活性初步鉴定
姜秀云
周步丹
董阳
包艳红
陈敬蕊
刘磊
王春芳
徐博文
马红霞
《中国人兽共患病学报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
2
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