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MDA-MB-231细胞在乏氧条件下通过外泌体传递miR-221、miR-222增强乳腺癌细胞侵袭和迁移能力 被引量:7
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作者 秦爱伟 于梦雨 +2 位作者 盖程程 李文通 吕世军 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第3期270-274,共5页
目的探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231在乏氧条件下分泌的外泌体对肿瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法利用差速离心法分离外泌体,并通过动态光散射和透射电镜对外泌体的粒径、形态进行表征。通过对外泌体进行PKH26染色,进而观察肿瘤细胞对外泌体... 目的探讨乳腺癌细胞MDA-MB-231在乏氧条件下分泌的外泌体对肿瘤细胞侵袭和迁移的影响。方法利用差速离心法分离外泌体,并通过动态光散射和透射电镜对外泌体的粒径、形态进行表征。通过对外泌体进行PKH26染色,进而观察肿瘤细胞对外泌体的摄取情况。应用qRT-PCR法检测肿瘤细胞及外泌体中miR-221、miR-222的含量。Transwell侵袭实验和细胞划痕实验检测MDA-MB-231细胞的侵袭和迁移能力。Western blot法检测MDA-MB-231细胞中上皮细胞-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)相关蛋白(E-cadherin、N-cadherin和vimentin)的表达。结果MDA-MB-231细胞经乏氧处理后,其侵袭和迁移能力增强,并且N-cadherin和vimentin的表达上调;乏氧处理的肿瘤细胞分泌的外泌体通过传递miR-221、miR-222,促进MDA-MB-231细胞的EMT进展。结论MDA-MB-231细胞在乏氧条件下,可以通过外泌体传递miR-221、miR-222增加癌细胞侵袭和迁移能力。 展开更多
关键词 乳腺肿瘤 外泌体 mir-221 mir-222 EMT
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miR-221/222及其靶基因在妊娠期肝内胆汁淤积症发病机制中作用的研究 被引量:8
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作者 王林若 刘建 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第5期662-667,共6页
目的:研究微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)221/222 及其靶基因在正常孕妇和妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepaticcholestasis of pregnancy,ICP)孕妇胎盘中表达的差异,并通过细胞实验过表达方法研究 miR-221/222 对靶基因表达影响,探讨其在 ... 目的:研究微小核糖核酸(MicroRNA,miRNA)221/222 及其靶基因在正常孕妇和妊娠期肝内胆汁淤积症(intrahepaticcholestasis of pregnancy,ICP)孕妇胎盘中表达的差异,并通过细胞实验过表达方法研究 miR-221/222 对靶基因表达影响,探讨其在 ICP 发病机制中的作用。方法:搜集 2015 年 9 月到 2016 年 3 月在重庆医科大学附属第二医院妇产科行剖宫产分娩的正常孕妇和 ICP 孕妇的胎盘组织各 20 例,直接提取 miRNA,采用实时荧光定量逆转录 PCR(qRT-PCR)检测 miR-221/222 在 2 组胎盘组织中的表达情况;预测 miR-221/222 的靶基因是顶端钠依赖性胆酸转运体(apical sodium-dependent bile acid transporter,ASBT,又称 SLC10A2);Western blot 检测 ASBT 在 ICP 和正常胎盘组织中的表达情况;用 Lipofectaine2000 脂质体包裹合成的miR-221/222 mimic 转染正常滋养细胞 HTR-8;qRT-PCR 检测 miR-221/222 表达水平;蛋白质印迹法检测转染后 ASBT 蛋白表达。结果:①经过内参 U6 的校正,miR-221 在 ICP 胎盘表达量为 1.066±0.044,正常胎盘表达量为 0.053±0.009;miR-222 在ICP胎盘表达量为 13.724±4.355,正常胎盘表达量为 0.833±0.189。可见 miR-221/222 在 ICP 胎盘中的表达明显上调(P<0.05)。②SLC10A2 在 ICP 组中的表达量为 0.328±0.102,在正常组中的表达量为 0.604±0.119,其在 ICP 组的表达较正常组的表达下调(P=0.000)。③经过内参 ACTIN 校正,ASBT 在转染 miR-221 组细胞内表达量为 0.338±0.064,对照组表达量为 0.583±0.040;ASBT 在转染 miR-222 组细胞内表达量为 0.371±0.024,对照组表达量为 0.624±0.031,可见 ASBT 在转染组中较对照组表达下调。结论:miR-221/222 在 ICP 胎盘组织中表达升高,而其预测靶基因 ASBT 的表达则下降;细胞实验中 miR-221/222 转染组靶基因 ASBT 表达下降。两者之间可能存在负调控关系。可能由此影响了孕妇胆汁酸在肠道的重吸收及在肝脏的转运而导致妊娠期肝内胆汁淤积。 展开更多
关键词 妊娠期肝内胆汁淤积症 mir-221/222 顶端钠依赖性胆汁酸转运体
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甲状腺细针穿刺吸取细胞学标本中miR-221与miR-222对良恶性甲状腺结节的诊断价值研究 被引量:19
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作者 闫永鑫 徐宁 王国凤 《中国全科医学》 CAS 北大核心 2019年第30期3731-3735,共5页
背景甲状腺结节是一种常见的临床问题,甲状腺细针穿刺吸取细胞学(FNAC)检查是临床常用的诊断良恶性甲状腺结节的检查方法,但15%~30%的患者无法确切诊断。因此,临床上迫切需要能有效帮助鉴别诊断良恶性甲状腺结节的生物学标志物。目的探... 背景甲状腺结节是一种常见的临床问题,甲状腺细针穿刺吸取细胞学(FNAC)检查是临床常用的诊断良恶性甲状腺结节的检查方法,但15%~30%的患者无法确切诊断。因此,临床上迫切需要能有效帮助鉴别诊断良恶性甲状腺结节的生物学标志物。目的探讨良恶性甲状腺结节患者甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222的表达水平及其对良恶性甲状腺结节的诊断价值。方法选取2015年3月-2017年12月就诊于南京医科大学康达学院第一附属医院符合研究标准的甲状腺结节患者60例。患者均经甲状腺FNAC检查,初次诊断为恶性病变17例,良性病变34例,可疑恶性、未诊断病变5例,滤泡性病变2例,滤泡性肿瘤2例。比较初次诊断为良性病变和恶性病变患者的甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222表达水平。以术后病理检查结果为金标准,绘制甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222诊断恶性甲状腺结节的受试者工作特征曲线(ROC曲线),并计算ROC曲线下面积(AUC),最佳截断值、灵敏度、特异度。计算甲状腺FNAC检查结果联合甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222诊断甲状腺结节的符合率。并比较不同一般资料患者甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222表达水平。结果 60例患者经甲状腺术后病理检查示,良性结节51例,恶性结节9例。恶性结节患者FANC检查中miR-221、miR-222表达水平高于良性结节患者(P<0.05)。甲状腺FNAC检查标本中miR-221诊断恶性甲状腺结节的AUC为0.774(0.691,0.858),其最佳截断值为2.77,灵敏度为80%,特异度为60.0%,约登指数为0.400。甲状腺FNAC检查标本中miR-222诊断恶性甲状腺结节的AUC为0.759(0.672,0.845),其最佳截断值为2.73,灵敏度为76.7%,特异度为66.7%,约登指数为0.443。甲状腺FNAC检查结果联合甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222诊断甲状腺结节与术后病理检查结果的符合率为80.0%。不同性别、年龄、肿瘤最大径、病灶数量、包膜侵犯情况、淋巴结转移情况、TNM分期患者miR-221、miR-222表达水平比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论恶性甲状腺患者甲状腺FNAC检查标本中miR-221、miR-222表达水平明显升高,其单独鉴别良恶性甲状腺结节的诊断价值不高,但联合甲状腺FNAC检查结果可以提高对良恶性甲状腺结节的诊断效能。 展开更多
关键词 甲状腺结节 微RNAS mir-221 mir-222 甲状腺细针穿刺 诊断 鉴别
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沉默信息调节因子1通过诱导miR-221/222表达促进细胞自噬 被引量:1
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作者 杨文平 刘新光 《中国生物化学与分子生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第2期197-203,共7页
微小RNA(microRNAs,miRNAs,)是一类强大的基因表达调控子,可在转录及转录后水平负调控靶基因的表达来参与生物学过程。沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)底物众多,可通过去乙酰化作用参与多种细胞生命活动进程。... 微小RNA(microRNAs,miRNAs,)是一类强大的基因表达调控子,可在转录及转录后水平负调控靶基因的表达来参与生物学过程。沉默信息调节因子1(silent information regulator1,SIRT1)底物众多,可通过去乙酰化作用参与多种细胞生命活动进程。尽管如此,SIRT1与非编码RNA如miRNA的表达调控关系仍有待深入研究。本文利用荧光定量PCR检测发现,SIRT1与miR-221和miR-222的表达呈正相关:干扰SIRT1后,miR-221/222呈低水平表达;而过表达SIRT1则促进miR-221/222的表达。将miR-221/222基因簇启动子区序列插入p EZX-GA01构建双荧光素酶报告载体,与SIRT1过表达质粒或干扰序列共转至细胞。结果显示,SIRT1可显著提高miR-221/222启动子区活性,提示SIRT1可在转录水平调节miR-221/222的表达。进一步运用Western印迹研究发现,在HEK293细胞中过表达miR-221/222可促进细胞的自噬能力,而抑制miR-221/222的表达可减弱自噬。此外,过表达SIRT1的同时抑制miR-221/222的表达可减弱SIRT1的自噬诱导作用。综上所述,SIRT1可通过诱导miR-221/222的表达促进细胞自噬,其具体作用机制有待进一步探讨。 展开更多
关键词 微小RNA-221/222 沉默信息调节因子1 自噬
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