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基于miRNA测序技术探讨艾灸治疗骨质疏松模型大鼠的分子机制 被引量:1
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作者 崔露 李萧 +4 位作者 李杏 陈小丽 胡笑燊 周海燕 李享 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第6期22-34,共13页
目的基于微小RNA(micro-RNA,miRNA)高通量测序技术,探究艾灸改善骨质疏松模型大鼠的分子机制。方法18只雌性SD大鼠随机分为假手术(SO)组(6只)和手术组(12只)。手术组以去卵巢手术法制备骨质疏松症(osteoporosis,OP)模型,将造模成功的12... 目的基于微小RNA(micro-RNA,miRNA)高通量测序技术,探究艾灸改善骨质疏松模型大鼠的分子机制。方法18只雌性SD大鼠随机分为假手术(SO)组(6只)和手术组(12只)。手术组以去卵巢手术法制备骨质疏松症(osteoporosis,OP)模型,将造模成功的12只大鼠随机分为模型(OVX)组和艾灸(MOX)组,每组6只。艾灸组大鼠艾灸双侧“肾俞”“关元”穴,每天1次,每天20 min,持续12周。Micro-CT扫描大鼠股骨并成像,分析骨小梁厚度(trabecular thickness,Tb.Th)、骨小梁分离度(trabecular separation,Tb.Sp)、骨体积分数(bone volume/total volume,BV/TV);HE染色观察大鼠胫骨组织形态;ELISA法检测血清碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)、骨钙素(osteocalcin,OCN)含量;随机挑选3只大鼠的右胫骨进行miRNA高通量测序,筛选差异表达的miRNA,并对差异表达miRNA进行功能富集分析与靶基因预测。结果Micro-CT图像显示艾灸组骨密度优于模型组,与模型组比较,艾灸组骨小梁厚度显著增加,骨体积分数显著上升,骨小梁分离度显著下降(P<0.05);ELISA结果表明,与模型组比较,艾灸组血清ALP活性显著降低,血清OCN含量显著上升(P<0.05);miRNA测序结果显示模型组上调基因与干预后下调基因共同表达34个,模型组下调与干预后上调基因共同表达15个。KEGG通路富集分析结果显示,差异基因的表达主要富集于MAPK、Ras、FoxO、TNF、癌症中的miRNA等信号通路途径。对显著性最高的前5个差异miRNA(miR-153-5p、miR-201-5p、miR-449c-5p、miR-451-3p、miR-153-3p)的靶基因预测得到10个主要靶点(Ebf2、Rtn4、Fbxl3、Naa15、Vamp2、Daam1、Akap6、Camta1、Ptprz1、Lamp1)。结论艾灸能够延缓OP病程、改善骨微结构、平衡骨代谢,这种治疗作用可能通过调控miRNA及其靶基因表达来实现,更详细的机制有待进一步探索。 展开更多
关键词 骨质疏松症 艾灸 mirna测序 生物信息学分析
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牛骨骼肌不同发育阶段miRNA测序及生物信息学分析 被引量:1
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作者 石闪闪 万琼飞 +7 位作者 许赢心 王秋硕 张林林 郭益文 胡德宝 郭宏 丁向彬 李新 《畜牧兽医学报》 北大核心 2025年第6期2701-2710,共10页
为明确牛骨骼肌不同发育阶段miRNA表达情况,筛选影响牛骨骼肌发育的关键miRNA。本研究利用胚胎切割和胚胎移植技术获得的来源相同、遗传背景高度一致的3月龄、6月龄胚胎肌肉组织和9月龄胎儿肌肉组织进行RNA-seq测序分析,运用生物信息学... 为明确牛骨骼肌不同发育阶段miRNA表达情况,筛选影响牛骨骼肌发育的关键miRNA。本研究利用胚胎切割和胚胎移植技术获得的来源相同、遗传背景高度一致的3月龄、6月龄胚胎肌肉组织和9月龄胎儿肌肉组织进行RNA-seq测序分析,运用生物信息学筛选差异表达的miRNA,并进行靶基因预测和功能富集分析。6月龄vs.3月龄、9月龄vs.6月龄、9月龄vs.3月龄分别筛选出262个(上调130个,下调132个)、397个(上调199个,下调198个)、448个(上调224个,下调224个)差异表达miRNA,同时分别预测到靶基因3854个、7434个、8167个。对这些靶基因进行功能注释及信号通路分析,发现6月龄vs.3月龄差异表达miRNA靶基因主要参与肌肉细胞中的细胞骨架、焦点粘连以及动物自噬等5条与肌肉发育相关通路;9月龄vs.6月龄差异表达miRNA靶基因主要参与肌肉细胞中的细胞骨架、焦点粘连以及生长激素的合成、分泌和作用等4条与肌肉发育相关通路;9月龄vs.3月龄差异表达miRNA靶基因主要参与肌肉细胞中的细胞骨架、焦点粘连以及肌动蛋白细胞骨架的调节等6条与肌肉发育相关通路;构建差异表达miRNAs与骨骼肌发育相关功能靶基因的调控网络图,发现其中bta-miR-139、bta-miR-499、bta-miR-7、bta-miR-148a、bta-miR-204等38个miRNA可能在牛不同时期骨骼肌生长发育中起调控作用。本研究结果为深入理解牛骨骼肌发育的分子机制提供重要的理论依据,同时为后续牛骨骼肌miRNA研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 骨骼肌发育 mirna测序 靶基因预
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干旱胁迫下花生转录组与miRNA测序及相关基因的表达 被引量:3
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作者 徐媛 陈锦玲 +3 位作者 陈玉梅 李璐璐 李惠敏 秦新民 《贵州农业科学》 CAS 2021年第1期1-9,共9页
【目的】探明干旱胁迫下花生转录组与miRNA测序及相关基因的表达,为深入分析花生抗旱分子机制提供理论依据。【方法】采用转录组测序和miRNA测序技术,对桂花37花生在15%PEG6000模拟干旱胁迫下基因和miRNA的表达模式进行分析。【结果】... 【目的】探明干旱胁迫下花生转录组与miRNA测序及相关基因的表达,为深入分析花生抗旱分子机制提供理论依据。【方法】采用转录组测序和miRNA测序技术,对桂花37花生在15%PEG6000模拟干旱胁迫下基因和miRNA的表达模式进行分析。【结果】转录组测序发现有13个显著持续上调的差异基因,其中7个为HSP分子伴侣家族基因,2个RING E3泛素连接酶,1个为谷胱甘肽-S-转移酶,1个柱头特异性STIG1样蛋白1,1个免疫球蛋白结合蛋白和1个DnaJ同源B亚家族成员13;同时筛选出13个显著下调的差异基因;在miRNA测序数据中筛选到8个持续下调表达的miRNA,分别ahy-mir156-3p、ahy-miR159、ahy-miR167-5p、ahy-miR156a、ahy-miR156b-5p、novel_mir103、novel_mir83和novel_mir70。【结论】持续下调表达的miRNA通过负调控方式参与花生干旱胁迫过程。 展开更多
关键词 花生 干旱胁迫 转录组 mirna测序 差异表达基因
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miRNA和转录组测序联合分析石斛花型形成机理
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作者 朱洪凤 宋雅蓉 +3 位作者 敖叠 陆得银 臧瑞 和凤美 《南方农业学报》 北大核心 2025年第4期1017-1030,共14页
【目的】通过miRNA和转录组测序联合分析探究石斛花型多样性形成机理,为深入探究石斛花发育调控机制及培育具有观赏价值的新品种提供理论参考。【方法】以观赏价值高、花型差异大的玫瑰石斛、铁皮石斛和美花石斛为材料,对其进行miRNA和... 【目的】通过miRNA和转录组测序联合分析探究石斛花型多样性形成机理,为深入探究石斛花发育调控机制及培育具有观赏价值的新品种提供理论参考。【方法】以观赏价值高、花型差异大的玫瑰石斛、铁皮石斛和美花石斛为材料,对其进行miRNA和转录组测序,利用DEGseq对3种石斛进行基因表达差异分析,并绘制3种石斛miRNA与mRNA的调控网络。【结果】从玫瑰石斛、铁皮石斛和美花石斛转录组测序数据中分别筛选到279、319和293个花发育相关mRNA。从玫瑰石斛中得到1364个miRNA靶向117个花发育相关靶mRNA,从铁皮石斛中得到1615个miRNA靶向195个花发育相关靶mRNA,从美花石斛中得到1360个miRNA靶向111个花发育相关靶mRNA。通过3种石斛miRNA-mRNA调控网络联合分析,最终筛选得到差异显著表达的940个miRNA靶向31个花发育相关靶mRNA,包括miR172-AP2/AP2-3、miR5179-MADS16、miR168-NPR5/DCAF1、miR408-5GT/LOC110111162/ANS/FHA2/SPL8、miR528-YAB1/SOC1/MADS6/GPAT6/VIL1和miR166-MADS3/5GT等调控网络,以上miRNA和mRNA共同构成了3种石斛花器官发育的调控网络,主要参与花瓣、萼片、花器官、分身组织发育和雌雄蕊的形态大小发育等生物过程。【结论】石斛花发育过程中存在复杂的miRNA-mRNA调控机制,在玫瑰石斛、铁皮石斛和美花石斛中差异表达的mRNA和miRNA-mRNA调控网络可能是导致3种石斛花型差异的主要机理;miR172、miR168、miR408、miR528和miR166等作为关键候选miRNA参与调控石斛兰花发育的多个生物过程,miR168-NPR5/DCAF1、miR408-5GT/LOC110111162/ANS/FHA2/SPL8、miR528-YAB1/SOC1/MADS6/GPAT6/VIL1和miR166-MADS3/5GT等调控网络为石斛兰花器官发育分子调控机制研究提供新的方向。 展开更多
关键词 石斛 花发育 mirna测序 转录组 调控网络
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基于高通量测序技术探讨健脾化痰方对ApoE^(-/-)AS小鼠VSMC增殖相关miRNA的调控作用 被引量:1
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作者 田苗 贾连群 +6 位作者 具星 关乐 王洋 闵冬雨 杜高乐 佟惊宇 杨关林 《世界科学技术-中医药现代化》 CSCD 北大核心 2023年第11期3646-3653,共8页
目的本研究运用高通量测序技术检测健脾化痰方调控ApoE^(-/-)小鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移相关miRNA,并验证相关蛋白的表达,探讨该方对动脉粥样硬化的治疗作用。方法10只C57BL/6J小鼠作为对照组,30只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、西... 目的本研究运用高通量测序技术检测健脾化痰方调控ApoE^(-/-)小鼠血管平滑肌细胞增殖和迁移相关miRNA,并验证相关蛋白的表达,探讨该方对动脉粥样硬化的治疗作用。方法10只C57BL/6J小鼠作为对照组,30只ApoE^(-/-)小鼠随机分为模型组、西药组和健脾化痰中药组,对各组小鼠主动脉样本进行miRNA测序,比较差异表达miRNA,筛选出与血管平滑肌细胞增殖和迁移相关miRNA,使用RT-qPCR和Western blot技术对差异miRNA及相关蛋白进行验证。结果与模型组相比,中药组共有9个miRNA表达发生改变,其中7个上调,2个下调。miRNA-34a在中药组表达上调,经RT-qPCR及Western blot实验验证,中药组小鼠主动脉miRNA-34a及α-SMA蛋白表达与模型组比较均有显著差异(P<0.01)。结论健脾化痰方可能通过调控miRNA-34a抑制血管平滑肌细胞增殖改善ApoE^(-/-)小鼠动脉粥样硬化。 展开更多
关键词 mirna测序 健脾化痰 血管平滑肌细胞 动脉粥样硬化 脾主肌肉
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miRNA表达水平检测技术研究进展
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作者 周兆瑞 徐梦思 甘尚权 《现代畜牧科技》 2025年第2期127-131,共5页
miRNA(microRNA)是一类由为21~23个核苷酸组成的小型非编码RNA分子,它们主要通过靶mRNA序列中3′非编码区(3′UTR)相互结合,进而调控靶基因的表达,一般通过抑制的方式影响靶基因的翻译。目前,miRNA已被证实在机体的各种生命活动过程中... miRNA(microRNA)是一类由为21~23个核苷酸组成的小型非编码RNA分子,它们主要通过靶mRNA序列中3′非编码区(3′UTR)相互结合,进而调控靶基因的表达,一般通过抑制的方式影响靶基因的翻译。目前,miRNA已被证实在机体的各种生命活动过程中发挥了关键的调控作用。因此,研发具有高特异性和高灵敏度的miRNA检测技术尤为重要。该文将围绕Northern blot(Northern印记)、实时荧光定量PCR(qRT-PCR)、荧光原位杂交(FISH)、miRNA测序法进行综述。 展开更多
关键词 mirna Northern blot QRT-PCR FISH mirna测序
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苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养后细胞外泌体测序及功能分析 被引量:4
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作者 吴育 汪洁 +2 位作者 魏晨旭 张硕 李伟东 《医药导报》 CAS 北大核心 2023年第6期807-813,共7页
目的筛选苍耳亭与MHCC97H共培养过程中差异miRNAs并进行验证,为寻找肝癌治疗靶点提供线索。方法将苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养24 h,利用差速超离心法分离出外泌体。通过透射电镜观察外泌体的典型结构以及Western blotting分析外泌体... 目的筛选苍耳亭与MHCC97H共培养过程中差异miRNAs并进行验证,为寻找肝癌治疗靶点提供线索。方法将苍耳亭与肝癌细胞MHCC97H共培养24 h,利用差速超离心法分离出外泌体。通过透射电镜观察外泌体的典型结构以及Western blotting分析外泌体标志性蛋白CD9和HSP70的表达来验证分离的是外泌体;检测苍耳亭与MHCC97H共培养后细胞外泌体的miRNA谱。筛选苍耳亭与MHCC97H细胞共培养和未共培养的MHCC97H细胞外泌体的差异miRNAs,通过GO和KEGG分析表征差异miRNAs的功能,分析差异miRNAs的潜在抗肿瘤意义。利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)对筛选的4种差异miRNAs进行验证。结果共鉴定出78个差异miRNAs,其中36个上调miRNA,42个下调miRNA。差异基因主要与肿瘤代谢通路相关。qRT-PCR实验结果显示,细胞外泌体let-7f-5p、let-7b-5p、miR-192-5p和miR-197-3p表达上调,与miRNA测序结果一致。结论苍耳亭可调节肿瘤细胞来源的外泌体miRNA,这些外泌体对抑制肝癌具有重要意义。 展开更多
关键词 苍耳亭 肝癌 mirna测序
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第二代测序技术在植物遗传研究中的应用 被引量:5
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作者 罗纯 张青林 罗正荣 《广东农业科学》 CAS 2015年第3期186-192,共7页
第二代测序技术,又称"新一代测序技术",其较Sanger测序具有通量高、测序成本低和测序时间短等特点。介绍了以454、Illumina/Solexa和SOLi D为代表的第二代高通量测序技术的基本特性及其在植物全基因组、转录组和miRNA测序等... 第二代测序技术,又称"新一代测序技术",其较Sanger测序具有通量高、测序成本低和测序时间短等特点。介绍了以454、Illumina/Solexa和SOLi D为代表的第二代高通量测序技术的基本特性及其在植物全基因组、转录组和miRNA测序等领域的研究进展,并对新一代高通量测序技术的发展趋势进行了展望。 展开更多
关键词 高通量 新一代 转录组 mirna测序
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玉米花粉高温胁迫相关miRNA的筛选及其靶基因分析 被引量:3
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作者 李川 张盼盼 +4 位作者 张美微 牛军 穆蔚林 郭涵潇 乔江方 《河南农业科学》 北大核心 2024年第2期1-16,共16页
以高耐热玉米品种郑单958、低耐热玉米品种先玉335为材料,以正常生长条件为对照,在花期进行高温胁迫,通过miRNA高通量测序筛选玉米花粉中的差异表达miRNA,然后预测其靶基因,并对靶基因的本体特征和代谢通路进行富集分析。结果表明,共筛... 以高耐热玉米品种郑单958、低耐热玉米品种先玉335为材料,以正常生长条件为对照,在花期进行高温胁迫,通过miRNA高通量测序筛选玉米花粉中的差异表达miRNA,然后预测其靶基因,并对靶基因的本体特征和代谢通路进行富集分析。结果表明,共筛选到818个miRNA前体序列。在郑单958高温胁迫花粉与对照花粉对比组(HT958 vs CK958)中共筛选到19个显著差异表达miRNA序列,其中15个miRNA序列上调表达,4个下调表达,3个miRNA序列达到极显著水平(P<0.01)。对这19个显著差异表达miRNA的靶基因进行预测,共获得了503个基因转录本,其富集较多的GO生物学过程条目分别为转录调控DNA-模板、微管生物学过程、磷酸化作用、RNA聚合酶Ⅱ正向调控转录过程、甲基化作用等,KEGG富集较显著的代谢通路分别是谷胱甘肽代谢、碳代谢、花生四烯酸代谢、糖酵解/糖异生、叶酸生物合成等。在先玉335高温胁迫花粉与对照花粉对比组(HT335 vs CK335)中共筛选到15个显著差异表达miRNA序列,其中7个miRNA序列上调表达,8个下调表达,1个miRNA序列达到了极显著水平(P<0.01)。对这15个显著差异表达miRNA的靶基因进行预测,共获得了454个基因转录本,其富集较多的GO生物学过程条目分别为转录调控DNA-模板、磷酸化作用、蛋白质磷酸化作用、蛋白质水解、DNA修复等,富集较显著的KEGG代谢通路分别是其他多糖降解、亚油酸代谢、代谢通路、硫胺素代谢、内质网内蛋白质加工过程等。在郑单958高温胁迫花粉与先玉335高温胁迫花粉对比组(HT985 vs HT335)中共筛选到85个显著差异表达miRNA序列,其中35个miRNA序列为上调表达,50个为下调表达,24个miRNA序列达到了极显著水平(P<0.01)。对这85个显著差异表达miRNA的靶基因进行预测,共获得了2 286个基因转录本,其富集较多的GO生物学过程条目分别为转录调控DNA-模板、磷酸化作用、蛋白质磷酸化、蛋白质水解、跨膜转运等,富集较显著的代谢通路分别是鞘脂类代谢、淀粉和蔗糖代谢、其他多糖降解、代谢通路、半胱氨酸及甲硫氨酸代谢等。在HT958 vs CK958与HT335 vs CK335对比组中共筛选到94个显著差异表达miRNA序列,其中(预测全新)PC-3p-10069_1143、(预测全新)PC-3p-18335_646、(玉米)zma-miR164f-5p等28个miRNA序列达到了极显著水平(P<0.01)。对这94个显著差异表达miRNA的靶基因进行预测,共获得了4 569个基因转录本,其富集较多的GO生物学过程条目分别为转录调控DNA-模板、磷酸化作用、蛋白质磷酸化、蛋白质转运、蛋白质水解等,其富集较显著的KEGG代谢通路分别是内质网内蛋白质加工过程、真核生物核糖体生物合成、剪接体、鞘脂类代谢、内吞作用等。 展开更多
关键词 玉米 花粉 花期高温胁迫 mirna测序 差异表达mirna 靶基因
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摄食不同种类饵料的鲤肝脏组织miRNA表达谱分析及验证 被引量:1
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作者 罗杰 杨淞 +5 位作者 杜杰 刘巧 杜宗君 杨世勇 李胜杰 赵柳兰 《淡水渔业》 CSCD 北大核心 2020年第1期31-37,共7页
MicroRNA(miRNAs)是一类长度为18-25nt的内源性非编码单链小RNA,参与细胞增殖与凋亡、免疫、脂肪代谢等过程。本试验以三组投喂不同类型饵料的鲤(Cyprinus carpio)肝脏为研究材料,通过HiSeq 2500深度测序技术和生物信息学分析miRNA,鉴定... MicroRNA(miRNAs)是一类长度为18-25nt的内源性非编码单链小RNA,参与细胞增殖与凋亡、免疫、脂肪代谢等过程。本试验以三组投喂不同类型饵料的鲤(Cyprinus carpio)肝脏为研究材料,通过HiSeq 2500深度测序技术和生物信息学分析miRNA,鉴定出235个已知miRNAs。三种饵料组共表达的差异miRNAs有13个,随机挑选5个miRNA并采用qPCR进行验证,表达趋势在qRT-PCR结果和RNA测序结果中高度相似;对13个共表达的差异表达miRNAs进行靶基因预测,共预测到靶基因530个。对预测靶基因进行KEGG通路分析,结果显示参与2-羰基羧酸代谢,糖基磷脂酰肌醇(GPI)-锚定生物合成,柠檬酸循环(TCA循环)等通路的调节。本研究首次了解鲤摄食不同种类饵料的miRNAs表达特征,可以为深入了解miRNA对鲤摄食不同种类饵料过程的调控作用奠定基础。 展开更多
关键词 鲤(Cyprinus carpio) mirna测序 饵料 肝脏 差异表达mirna
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1月龄五指山猪与长白猪骨骼肌miRNA转录组比较 被引量:6
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作者 孙瑞萍 王峰 +6 位作者 晁哲 刘海隆 郑心力 刘圈炜 黄丽丽 邢漫萍 魏立民 《江苏农业学报》 CSCD 北大核心 2020年第3期620-625,共6页
为研究microRNA(miRNA)在五指山猪和长白猪肌肉生长发育中的差异和探究差异miRNA对骨骼肌发育转录后调控的影响,以1月龄的五指山猪和长白猪背最长肌为材料,通过转录组测序和生物信息学分析筛选与骨骼肌发育相关的差异miRNA。结果显示,从... 为研究microRNA(miRNA)在五指山猪和长白猪肌肉生长发育中的差异和探究差异miRNA对骨骼肌发育转录后调控的影响,以1月龄的五指山猪和长白猪背最长肌为材料,通过转录组测序和生物信息学分析筛选与骨骼肌发育相关的差异miRNA。结果显示,从2个文库中共鉴定获得318种己知的猪miRNA,五指山猪和长白猪分别鉴定出312个和306个已知miRNA,同时分别发现了83个和88个新的miRNA。获得17个差异显著的miRNA,其中16个miRNA表达上调,1个miRNA表达下调。靶基因预测和生物学功能预测发现17个差异miRNA,共预测到535个靶基因,靶向作用于mTOR信号通路和肌动蛋白细胞骨架调控的ssc-miR-486,ssc-miR-204,ssc-miR-338和ssc-miR-885-3p 4个miRNA可能参与骨骼肌生长发育过程。 展开更多
关键词 五指山猪 骨骼肌 mirna高通量
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LPS诱导牛子宫内膜细胞miRNA差异表达分析 被引量:4
12
作者 王军 燕晓晓 +2 位作者 丁赫 王静芳 吕文发 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2017年第10期10-12,16,I0002,I0003,共6页
MicroRNA(miRNA)在炎症反应中起重要作用,本试验用miRNA测序技术研究了细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛子宫内膜细胞miRNA差异表达。用1μg/mL的LPS处理牛子宫内膜细胞24 h,测定细胞上清液IL-6和IL-8分泌量,对细胞进行miRN... MicroRNA(miRNA)在炎症反应中起重要作用,本试验用miRNA测序技术研究了细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导的牛子宫内膜细胞miRNA差异表达。用1μg/mL的LPS处理牛子宫内膜细胞24 h,测定细胞上清液IL-6和IL-8分泌量,对细胞进行miRNA测序,并用荧光定量PCR验证测序结果。结果表明,LPS可诱导牛子宫内膜细胞11个miRNA表达上调、9个miRNA表达下调。差异表达miRNA的靶基因注释到生物过程的GO term共20个,注释到细胞组分的GO term共12个,注释到分子功能的GO term共20个;差异表达miRNA靶基因主要富集于PI3K-Akt和MAPK等信号通路。结果提示,miRNA在LPS诱导的牛子宫内膜细胞炎症反应中起重要作用,其作用与PI3K-Akt和MAPK等信号通路激活有关。 展开更多
关键词 细菌脂多糖 子宫内膜细胞 mirna测序 差异表达
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一种高通量自动化血浆miRNA文库构建方法及其跨批次性能评估 被引量:1
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作者 么欣彤 孙善月 +2 位作者 刘雅晴 石乐明 郑媛婷 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2022年第3期425-434,共10页
目的建立一种适用于低起始量血浆样本的高通量(96样本/批次)、自动化miRNA文库构建方法,并系统评估该方法的可靠性与跨批次一致性。方法基于PerkinElmer公司的NEXTFLEX^(■)small RNA-seq试剂盒和Sciclone^(■)NGSx液体工作站,建立自动... 目的建立一种适用于低起始量血浆样本的高通量(96样本/批次)、自动化miRNA文库构建方法,并系统评估该方法的可靠性与跨批次一致性。方法基于PerkinElmer公司的NEXTFLEX^(■)small RNA-seq试剂盒和Sciclone^(■)NGSx液体工作站,建立自动化miRNA文库构建方法。制备3类血浆参考物质(分别来自健康男性、健康女性和糖尿病患者)模拟临床血浆样本,并使用自动化建库方法进行4个批次文库构建实验。从miRNA检出种类、绝对定量、不同样本间相对定量及差异表达分析等层面评估方法性能及跨批次一致性。结果miRNA检出种类一致性:批次内和批次间并交比(Jaccard index)分别为0.61和0.62;miRNA表达水平绝对定量一致性:批次内和批次间Pearson相关系数平均值均为0.96;两个不同样本间相对定量水平在不同批次间的相关系数平均值为0.74,且超过60%的差异表达miRNA可在多个批次中检出。结论本研究建立了一种高通量自动化血浆miRNA文库构建方法,具有良好的批次内性能和跨批次一致性,可用于大型队列血浆miRNA文库构建实验。 展开更多
关键词 二代 mirna测序技术(mirna-seq) 文库构建 性能评估 跨批次一致性
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益脉降脂汤含药血清对THP-1源性泡沫细胞模型miRNA差异表达分析
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作者 赖春冰 古展鑫 刘锐 《海南医学院学报》 CAS 北大核心 2024年第3期183-191,共9页
目的:探讨益脉降脂汤含药血清干预THP-1源性泡沫细胞模型后差异表达miRNA及相关生物功能、信号通路。方法:实验分为巨噬细胞组、泡沫细胞模型组、益脉降脂含药血清组,以佛波酯对THP-1细胞诱导为巨噬细胞,经诱导分化的巨噬细胞给予ox-LD... 目的:探讨益脉降脂汤含药血清干预THP-1源性泡沫细胞模型后差异表达miRNA及相关生物功能、信号通路。方法:实验分为巨噬细胞组、泡沫细胞模型组、益脉降脂含药血清组,以佛波酯对THP-1细胞诱导为巨噬细胞,经诱导分化的巨噬细胞给予ox-LDL建立泡沫细胞模型,以益脉降脂汤大鼠血清干预泡沫细胞。提取各组细胞Total RNA进行miRNA测序,筛选差异表达miRNA,预测相关靶基因后进行GO分析、KEGG分析,建立蛋白互作网络、miRNA-靶基因互作网络,RT-qPCR验证改善动脉粥样硬化可能信号通路。结果:空白组与模型组差异miRNA为hsa-miR-302c-3p、hsa-miR-302d-3p、hsa-miR-30d-3p、hsa-miR-3189-3p、hsa-miR-374b-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-4781-3p、hsa-miR-663a;模型组和益脉降脂含药血清组差异miRNA为hsa-miR-3150a-3p、hsa-miR-7704、hsa-miR-877-3p、hsa-miR-150-5p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-374b-5p;模型组与益脉降脂含药血清组差异miRNA预测靶基因显示主要富集于MAPK信号通路、ErbB信号通路、Hippo信号通路、Wnt信号通路等信号通路;SCN1A、PRKACA、MECP2、EIF4E、SRSF1、MBNL1、PRKCA、PPARGC1A可能是益脉降脂汤含药血清向THP-1源性泡沫细胞发挥作用潜在关键靶标。结论:hsa-miR-374c-3p、hsa-miR-423-5p、hsa-miR-374b-5p是益脉降脂汤含药血清作用于泡沫细胞重要的miRNAs,差异表达显著的miRNA以及显著富集的相关信号通路可为诊断和治疗动脉粥样硬化提供新的思路。 展开更多
关键词 益脉降脂汤 泡沫细胞 mirna测序 生物信息学
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基于微小核糖核酸筛选和竞争性内源核糖核酸网络构建的尿酸盐肾沉积机制研究
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作者 安笑叶 毛秋月 +4 位作者 刘泽宇 鲁程锦 张冰 林志健 王雨 《世界中医药》 CAS 北大核心 2024年第13期1896-1901,共6页
目的:构建竞争性内源核糖核酸(ceRNA)以揭示尿酸盐肾沉积分子调控机制。方法:复制尿酸盐肾沉积大鼠模型,采用高通量核糖核酸(RNA)测序技术分析尿酸盐肾沉积大鼠肾组织中微小核糖核酸(miRNA)的表达,并筛选出差异表达的miRNA。利用TargetS... 目的:构建竞争性内源核糖核酸(ceRNA)以揭示尿酸盐肾沉积分子调控机制。方法:复制尿酸盐肾沉积大鼠模型,采用高通量核糖核酸(RNA)测序技术分析尿酸盐肾沉积大鼠肾组织中微小核糖核酸(miRNA)的表达,并筛选出差异表达的miRNA。利用TargetScan、StarBase、miRDB、miRWalk 4个数据库预测miRNA的靶基因,通过DAVID和Metascape数据库对靶基因进行基因本体(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析。运用Cytoscape构建主要信号通路的ceRNA调控网络。结果:测序共检测到14个差异miRNA(均为上调),该差异miRNA的靶基因主要富集在细胞衰老和癌症相关信号通路;构建获得的ceRNA调控网络含47个长链非编码RNA(lncRNA)节点、10个miRNA节点、27个信使RNA(mRNA)节点,该调控网络中miR-155-5p、miR-132-3p、miR-503-5p、miR-146b-5p和miR-212-5p为排名前5的HUB基因。结论:本研究通过筛选尿酸盐肾沉积差异miRNA,构建了尿酸盐肾沉积ceRNA网络,为尿酸盐肾沉积机制探讨提供了新思路。 展开更多
关键词 尿酸盐肾沉积 mirna测序 mirna lncRNA ceRNA 生信预 作用机制 细胞衰老
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月季‘绿萼’花器官发育相关microRNA的鉴定及分析 被引量:8
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作者 眭梦洁 晏慧君 +6 位作者 王珍珍 邱显钦 蹇洪英 王其刚 陈敏 张颢 唐开学 《植物科学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第1期37-46,共10页
利用高通量测序技术,构建了中国古老月季‘绿萼’(Rosa chinensis ‘Viridiflora’)和‘月月粉’(R.chinensis‘Old Blush’)花蕾期的microRNA(miRNA)文库,并对其进行了测序和序列分析。结果显示,在‘绿萼’文库中,鉴定到已知的miRNA成... 利用高通量测序技术,构建了中国古老月季‘绿萼’(Rosa chinensis ‘Viridiflora’)和‘月月粉’(R.chinensis‘Old Blush’)花蕾期的microRNA(miRNA)文库,并对其进行了测序和序列分析。结果显示,在‘绿萼’文库中,鉴定到已知的miRNA成熟体39个,miRNA前体42个;预测到新的miRNA成熟体56个,前体57个。在‘月月粉’文库中,鉴定到已知RNA成熟体39个,已知miRNA前体40个;预测到新的miRNA成熟体53个,前体57个。与‘月月粉’相比,‘绿萼’中差异表达的miRNA有31个,其中17个上调、14个下调。荧光定量PCR实验结果表明,miR156、miR398和miR535在2种月季的花蕾期表达上调,而miR167、miR172和miR396表达下调。进一步检测miR172和miR156在2种月季不同花器官中的表达差异,发现miR172在‘绿萼’的花瓣、雌、雄蕊中表达显著下调,提示miR172可能通过负调控其靶基因RcAP2的表达,在‘绿萼’花器官发育过程中起重要作用。 展开更多
关键词 月季品种'绿萼’ 花器官发育 mirna高通量 荧光定量PCR
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