miR-200a对奶山羊乳腺上皮细胞乳脂合成相关基因mRNA表达的影响 被引量：10

1

作者 林先滋 罗军 +3 位作者 张犁苹 朱江江 石恒波 苟德明 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期1028-1036,共9页

旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响。以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a。采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于... 旨在构建pAd-pri-miR-200a重组腺病毒,使其在奶山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,研究miR-200a对乳脂合成相关基因mRNA表达的影响。以西农萨能羊DNA为模板扩增pri-miR-200a。采用Ad-Easy系统构建重组腺病毒载体pAd-pri-miR-200a,并于HEK 293细胞株中进行病毒的包装、扩繁。TCI50法测定病毒滴度。qRT-PCR检测miR-200a及16个乳脂合成相关基因mRNA表达水平。序列分析结果显示,pri-miR-200a包括pre-miR-200a86bp和侧翼序列共297bp。酶切结果证实pAd-pri-miR-200a构建成功。Ad-pri-miR-200a滴度达8×109 PFU.mL-1。实时定量结果表明,Ad-pri-miR-200a(MOI为200)感染奶山羊乳腺上皮细胞72h,miR-200a的表达量较对照高出2.4倍。同时miR-200a的过表达引起10个基因mRNA表达量下调,6个基因mRNA表达量上调。其中脂肪酸从头合成相关基因FASN、脂滴生成相关基因TIP47及脂肪酸运输相关基因FABP4降幅较大,分别下降了0.47、0.89及0.65倍。而TAG生成相关基因DGAT1和脂解相关基因HSL较对照分别增加了0.52和1.49倍。本研究获得的重组腺病毒Ad-pri-miR-200a能在山羊乳腺上皮细胞中稳定表达miR-200a,同时miR-200a过表达影响乳脂合成相关基因mRNA表达水平。 展开更多

关键词 pri-mir-200a 重组腺病毒 乳腺上皮细胞 西农萨能羊

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结直肠癌miR-200a与miR-92a表达水平及其与临床病理特征的关系 被引量：3

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作者 杨新辉 赵为民 +1 位作者 达热拜.热达提 曾祥岳 《中国医药导报》 CAS 2018年第13期63-66,75,共5页

目的研究miR-200a、miR-92a在结直肠癌中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系。方法选取2011年2月~2012年8月在新疆医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的结直肠癌患者60例,采集结直肠癌组织与癌旁组织标本各60例。采用原位分子杂交... 目的研究miR-200a、miR-92a在结直肠癌中的表达水平及其与患者临床病理特征的关系。方法选取2011年2月~2012年8月在新疆医科大学附属肿瘤医院接受手术治疗的结直肠癌患者60例,采集结直肠癌组织与癌旁组织标本各60例。采用原位分子杂交技术检测上述标本中miR-200a表达阳性率,采用实时荧光定量PCR法检测上述标本中miR-92a表达情况。分析miR-200a及miR-92a表达情况与结直肠癌患者的临床病理特征相关性。随访5年,根据生存状态分为存活组与死亡组,比较两组患者miR-200a、miR-92a表达情况差异。结果结直肠癌组织中miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达明显高于癌旁组织(均P<0.05)。中高分化、TNMⅠ~Ⅱ期结直肠癌患者miR-200a表达阳性率明显低于低分化、TNMⅢ~Ⅳ期的结直肠癌患者,分别为40.00%(18/45)比73.33%(11/15)、58.06%(18/31)比86.21%(25/29),差异均有统计学意义(均P<0.05)。而TNMⅠ~Ⅱ期、无淋巴结转移结直肠癌患者miR-92a相对表达量均明显低于TNMⅢ~Ⅳ期、有淋巴结转移患者(均P<0.05)。随访5年,生存组21例,死亡组39例。存活组miR-200a表达阳性率及miR-92a相对表达量均明显低于死亡组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论结直肠癌组织的miR-200a、miR-92a高表达,与病情严重程度及预后密切相关。 展开更多

关键词 结直肠癌 mir-200a mir-92a 临床病理特征 预后评估

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Hsa-miR-200a真核表达载体的构建及鉴定

3

作者 陈倩 陈雪梅 +4 位作者 何俊琳 王应雄 丁裕斌 杨德辉 刘学庆 《激光杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期76-77,共2页

目的:通过构建及鉴定miR-200a的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-200a,为进一步研究miR-200a的功能奠定实验基础。方法:RT-PCR扩增pre-miR-200a基因序列,连接于表达载体pcDNA3.1(+)中,对重组质粒双酶切鉴定并测序验证。结果:pcDNA3.1(+)-mi... 目的:通过构建及鉴定miR-200a的真核表达载体pcDNA3.1(+)-miR-200a,为进一步研究miR-200a的功能奠定实验基础。方法:RT-PCR扩增pre-miR-200a基因序列,连接于表达载体pcDNA3.1(+)中,对重组质粒双酶切鉴定并测序验证。结果:pcDNA3.1(+)-miR-200a真核表达载体经酶切及测序鉴定正确。结论:pcDNA3.1(+)-miR-200a真核表达载体构建成功,为下一步深入研究miR-200a的生物学功能和验证miR-200a的靶基因提供有效工具。 展开更多

关键词 MICRORNAS hsa-mir-200a 真核表达载体 肿瘤

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鼻咽癌组织中miR-200a的表达及意义 被引量：5

4

作者 李晓雪 石书婧 易翔 《山东医药》 CAS 北大核心 2015年第34期14-15,共2页

目的观察鼻咽癌和鼻咽黏膜炎性组织中microRNA-200a(miR-200a)的表达变化,分析其与鼻咽癌发生发展的关系。方法取鼻咽癌组织39例(观察组)、鼻咽黏膜炎性组织12例(对照组)。采用实时荧光定量PCR方法检测两组miR-200a表达,比较不同临床病... 目的观察鼻咽癌和鼻咽黏膜炎性组织中microRNA-200a(miR-200a)的表达变化,分析其与鼻咽癌发生发展的关系。方法取鼻咽癌组织39例(观察组)、鼻咽黏膜炎性组织12例(对照组)。采用实时荧光定量PCR方法检测两组miR-200a表达,比较不同临床病理参数(包括年龄、性别、T分期、N分期、临床分期)的鼻咽癌患者miR-200a表达差异。结果观察组和对照组miR-200a的相对表达量分别为0.539±0.281、0.744±0.358,观察组较对照组明显下降(P<0.05)。鼻咽癌组织中miR-200a表达:T3、T4期低于T1、T2期,N2、N3期低于N0、N1期,临床分期Ⅲ、Ⅳ期低于Ⅰ、Ⅱ期(P<0.05或<0.01)。结论 miR-200a在鼻咽癌组织中的表达明显下调,其参与了鼻咽癌的发生发展过程。 展开更多

关键词 鼻咽肿瘤 mir-200a 实时荧光定量聚合酶链反应

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上皮性卵巢癌患者血清miR-200a、miR-200b水平变化及意义

5

作者 王丽雯 李静芳 +3 位作者 李晓红 余鑫 杨伟 高艳章 《山东医药》 CAS 2023年第26期58-61,共4页

目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清miR-200a和miR-200b水平变化及意义。方法 选取EOC患者80例(EOC组)、卵巢良性病变患者80例(良性对照组)、体检健康女性80例(正常对照组),采集受试者血清,采用qRT-PCR法检测miR-200a、miR-200b。比较... 目的 探讨上皮性卵巢癌(EOC)患者血清miR-200a和miR-200b水平变化及意义。方法 选取EOC患者80例(EOC组)、卵巢良性病变患者80例(良性对照组)、体检健康女性80例(正常对照组),采集受试者血清,采用qRT-PCR法检测miR-200a、miR-200b。比较三组血清miR-200a、miR-200b水平,分析EOC患者血清miR-200a、miR-200b水平与临床病理特征的关系,采用受试者工作特征(ROC)曲线评价二者对EOC的诊断价值。对EOC患者行手术联合化疗方案进行治疗,术后随访2年,记录患者复发情况,根据miR-200a、miR-200b中位数将患者分为低水平和高水平,比较二者的复发时间。结果 EOC组血清miR-200a和miR-200b水平较良性对照组和正常对照组升高(P均<0.01)。EOC晚期、合并淋巴结转移、腹水或腹腔灌洗液检出恶细胞患者的血清miR-200a、miR-200b水平分别高于晚期、未合并淋巴结转移、腹水或腹腔灌洗液检出恶细胞患者(P均<0.05)。ROC分析显示,血清miR-200a(AUC=0.890)和miR-200b(AUC=0.912)有助于EOC的诊断。在EOC患者中,血清miR-200a(Log-Rank=4.061,P=0.044)和miR-200b(Log-Rank=5.012,P=0.025)高水平者的复发时间均短于低水平者。结论 EOC患者血清miR-200a和miR-200b水平升高,监测血清miR-200a和miR-200b水平有助于EOC的诊断和预后评估。 展开更多

关键词 上皮性卵巢癌 mir-200a mir-200b 肿瘤复发

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miR-200c通过抑制RhoA/ROCK通路延缓皮肤创伤愈合进程

6

作者 杨明 何林 荆银磊 《山西医科大学学报》 CAS 2024年第7期885-894,共10页

目的探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型,将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达,Western blot检测创面组织... 目的探究miR-200c在皮肤创伤愈合中的作用及其调控机制。方法构建SD大鼠背部全层皮肤创伤模型,将创伤后大鼠分为agomir-NC组、miR-200c agomir组、sh-NC组和sh-RhoA组。采用qRT-PCR检测创面组织中miR-200c表达,Western blot检测创面组织中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin和RhoA蛋白表达。创伤后第1,7,14天计算大鼠创面愈合率。采用双荧光素酶报告实验分析miR-200c和RhoA靶向关系。将人永生化角质形成细胞系HaCaT细胞分为inhibitor-NC组、miR-200c inhibitor组、miR-200c inhibitor+sh-NC组和miR-200c inhibitor+sh-RhoA组。采用EdU法检测细胞增殖,细胞划痕实验检测细胞迁移,qRT-PCR检测HaCaT细胞中miR-200c表达,Western blot检测HaCaT细胞中MMP-9、N-cadherin、E-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达。结果与正常皮肤比较,创面组织中miR-200c表达降低(P<0.01),RhoA表达升高(P<0.01)。miR-200c与RhoA 3′UTR存在靶向结合关系。与agomir-NC组比较,miR-200c agomir组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05);与sh-NC组比较,sh-RhoA组大鼠创面愈合率以及MMP-9、N-cadherin、RhoA和ROCK蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。与inhibitor-NC组比较,miR-200c inhibitor组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均升高(P<0.05),E-cadherin蛋白表达降低(P<0.05);与miR-200c inhibitor+sh-NC组比较,miR-200c inhibitor+sh-RhoA组HaCaT细胞增殖水平、细胞迁移率以及MMP-9和N-cadherin蛋白表达均降低(P<0.05),E-cadherin蛋白表达升高(P<0.05)。结论miR-200c靶向RhoA,过表达miR-200c可以通过调控RhoA/ROCK通路抑制皮肤创伤愈合的再上皮化过程,进而延缓皮肤创伤愈合进程。 展开更多

关键词 mir-200C 皮肤 创伤愈合 再上皮化 RhoA/ROCK通路

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miR-200家族在西农萨能奶山羊乳腺组织中的表达分析 被引量：6

7

作者 张犁苹 罗军 +4 位作者 林先滋 朱江江 石恒波 史怀平 李君 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第6期944-951,共8页

笔者拟获得山羊miR-200家族乳腺组织表达谱,研究miR-200家族成员之间表达相关性及miR-200家族成员与山羊乳成分的相关性。通过定量PCR,检测miR-200家族在西农萨能奶山羊泌乳中期和干奶期乳腺组织中的表达量;利用Pearson相关系数分析miR-... 笔者拟获得山羊miR-200家族乳腺组织表达谱,研究miR-200家族成员之间表达相关性及miR-200家族成员与山羊乳成分的相关性。通过定量PCR,检测miR-200家族在西农萨能奶山羊泌乳中期和干奶期乳腺组织中的表达量;利用Pearson相关系数分析miR-200家族不同成员表达量之间的相关性,同时分析miR-200家族成员与山羊乳成分之间的相关关系;利用miRanda和TargetScan 6.2软件分析、RNAhybrid和PITA软件预测miR-200家族的靶基因。结果表明,miR-200家族在奶山羊泌乳中期的乳腺组织中的表达量极显著高于干奶期(P<0.01);miR-200a与miR-141之间的表达量显著相关(P<0.05),miR-200b与miR-200c之间的表达量极显著相关(P<0.01);泌乳中期奶山羊乳腺组织中miR-200c的表达量与乳蛋白、非脂固形物(SNF)、冰点(FPD)的含量显著相关(P<0.05);经软件分析及预测发现,miR-200a/miR-141靶向作用于在乳脂合成中起关键作用的基因STAT4。miR-200家族可能对山羊乳蛋白及乳脂合成具有一定的调控作用。 展开更多

关键词 mir-200家族 西农萨能奶山羊 乳腺组织表达 靶基因

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miR-200b对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231的负性调控作用 被引量：6

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作者 刘棣 张寅斌 +5 位作者 闫婉君 赵小瑶 盛倩文 许朋 管海涛 张淑群 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第5期743-746,共4页

目的研究miRNA-200b对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法定量PCR检测人乳腺癌细胞株MCF-7、BT-474、MDA-MB-453、SKBR3、MDA-MB-468、MDA-MB-231中miRNA-200a/b/c的表达情况,通过miR-200b抑制剂及拟似物分别抑制、促进miR-200... 目的研究miRNA-200b对三阴性乳腺癌细胞增殖、侵袭能力的影响。方法定量PCR检测人乳腺癌细胞株MCF-7、BT-474、MDA-MB-453、SKBR3、MDA-MB-468、MDA-MB-231中miRNA-200a/b/c的表达情况,通过miR-200b抑制剂及拟似物分别抑制、促进miR-200b的表达后,观察癌细胞增殖能力、克隆形成及侵袭能力的变化。结果 miRNA-200家族在Luminal型乳腺癌细胞MCF-7、BT-474和Her-2表达型MDA-MB-453、SKBR3的表达量高于三阴性型MDA-MB-468、MDA-MB-231的表达。通过inhibitor、mimics分别抑制、促进MDA-MB-231细胞中miR-200b的表达后,结果显示miR-200b对肿瘤细胞的增殖有抑制作用(P<0.05),miRNA-200b组对肿瘤细胞的克隆形成有抑制作用(P<0.05),对癌细胞侵袭有抑制作用(P<0.05)。结论miRNA-200b对三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231具有负性调控作用,可以作为潜在的早期诊断及治疗靶点。 展开更多

关键词 MIRNA 乳腺癌 mir-200b

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海七鳃鳗pma-miR-200c-3p对斑马鱼心脏发育的作用研究 被引量：3

9

作者 刘云 王丛丛 +1 位作者 郭亚南 许强华 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期510-515,共6页

为研究海七鳃鳗Petromyzon marinus pma-miR-200c-3p在心脏发育过程中的生物学功能,采用显微注射技术,将pma-miR-200c-3p模拟体注射到斑马鱼Danio rerio胚胎,过表达pma-miR-200c-3p后,使用qRT-PCR及Western blot法检测了一些与心脏发育... 为研究海七鳃鳗Petromyzon marinus pma-miR-200c-3p在心脏发育过程中的生物学功能,采用显微注射技术,将pma-miR-200c-3p模拟体注射到斑马鱼Danio rerio胚胎,过表达pma-miR-200c-3p后,使用qRT-PCR及Western blot法检测了一些与心脏发育相关的标志性基因的表达水平,以及BMP/Smad通路重要基因蛋白水平的变化,并利用生物信息学预测、GFP荧光表达分析了pma-miR-200c-3p的生物学作用。结果表明:过表达pma-miR-200c-3p的斑马鱼胚胎中,与心脏发育相关的标志性bmp4、bmp5、smad1、gata5、tbx2b和notch1a基因的表达水平极显著上调(P<0.01),同时BMP/Smad通路中BMP4、Smad1、GATA5蛋白表达水平也明显升高;细胞试验表明,cdx1b基因可能是pma-miR-200c-3p的一个靶基因。研究表明,pma-miR-200c-3p可能通过抑制cdx1b基因的表达,参与BMP/Smad通路以促进心脏发育。 展开更多

关键词 海七鳃鳗 mir-200c-3p 斑马鱼 心脏发育 cdx1b

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miR-200b-3p/NBR1轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响 被引量：2

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作者 蒋雪梅 易瑛 +1 位作者 陈宇 杨诚诚 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第12期1259-1266,共8页

目的miR-200b-3P靶向NBR1调控乳腺癌自噬的作用仍未完全探索,文章旨在探讨miR-200b-3p是否靶向NBR1影响乳腺癌细胞自噬及生长。方法介绍些分组选择人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)为研究对象,分为阴性对照组(转染mimic NC或inhibitor NC)、miR... 目的miR-200b-3P靶向NBR1调控乳腺癌自噬的作用仍未完全探索,文章旨在探讨miR-200b-3p是否靶向NBR1影响乳腺癌细胞自噬及生长。方法介绍些分组选择人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)为研究对象,分为阴性对照组(转染mimic NC或inhibitor NC)、miR-20Ob-3p mimic组(转染miR-200b-3p模拟物)、miR-200b-3p inhibitor组(转染miR-200b-3p抑制剂),采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Tmnswell实验检测细胞侵袭能力;透射电镜观察细胞超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-200b-3p mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Beclin-1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、NBR1蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-200b-3p与NBR1之间的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示,与mimic NC组(1.000±0.069)比较,miR-200b-3p mimic组miR-200b-3p mRNA表达(1.314±0.093)明显升高;与inhibitor NC组(1.009±0.055)比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达(0.581±0.031)明显降低(P<0.05);与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达明显降低(P<0.05)。细胞侵袭结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组穿过基膜的细胞数明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p in-hibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.0l),与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.05)。细胞周期阻滞结果显示,与mimic NC组比较,miR-200h-3p mimic组细胞在G2/M期、S期均明显减少,G1/G0期细胞均明显增多,与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p inhihitor组细胞在G2/M期、S期均明显增多(P<0.05),G1/G0期细胞均明显减少(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显升高,P62蛋白表达明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-20Ob-3p inhibitor组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显降低,P62蛋白表达明显升高(P<0.01)。Weatem blot检测结果显示NBR1蛋白表达于转染miR-200b-3p mimic后明显降低,转染miR-200b-3p inhibitor后明显升高(P<0.01)。结论miR-200b-3p mimic可能通过靶向NBR1表达抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡及自噬。 展开更多

关键词 乳腺癌 自噬 mir-200b-3p 细胞侵袭

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二烯丙基二硫对非小细胞肺癌细胞miR-200b表达的影响及意义

11

作者 罗卫民 罗湘玉 +2 位作者 郭家龙 林称意 刘越峰 《山东医药》 CAS 北大核心 2016年第44期33-35,共3页

目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人非小细胞肺癌A549(A549细胞)miR-200b表达的影响及意义。方法常规培养A549细胞、人支气管上皮16HBE细胞,连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量;将A549细胞分别与终浓度为0、25、50、100、20... 目的探讨二烯丙基二硫(DADS)对人非小细胞肺癌A549(A549细胞)miR-200b表达的影响及意义。方法常规培养A549细胞、人支气管上皮16HBE细胞,连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量;将A549细胞分别与终浓度为0、25、50、100、200、400μmol/L的DADS共培养,连续培养48 h时采用RT-PCR法检测miR-200b相对表达量。将常规培养的A549细胞随机分为五组,scramble组转染miR-200b无关序列,miR-200b组转染miR-200b模拟物,空白组仅加培养液常规培养,DADS组加入200μmol/L DADS处理,DADS+miR-200b组转染miR-200b模拟物的同时加入200μmol/L DADS处理,各组均连续培养48 h时,采用MTT法检测细胞增殖情况(OD值)。结果 16HBE细胞miR-200b相对表达量为1.364±0.031,高于A549细胞的0.673±0.023(P<0.05);0、25、50、100、200、400μmol/L DADS处理A549细胞48 h时miR-200b相对表达量分别为0.673±0.023、0.752±0.019、0.805±0.011、1.041±0.049、1.176±0.046、1.342±0.051,各浓度间比较P均<0.05。scramble组、miR-200b组、空白组、DADS组、DADS+miR-200b组OD值分别为0.740±0.027、0.552±0.024、0.735±0.021、0.561±0.027、0.462±0.026,miR-200b组、DADS组、DADS+miR-200b组OD值均低于scramble组及空白组,DADS+miR-200b组均低于DADS组及miR-200b组,组间比较P均<0.05。结论 DADS能够上调A549细胞miR-200b表达,进而抑制细胞增殖,发挥抗肿瘤作用。 展开更多

关键词 非小细胞肺癌 二烯丙基二硫 mir-200b

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miR-200c和miR-429靶向调节绵羊皮下脂肪细胞中SCD1表达的研究 被引量：4

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作者 王书芳 潘洋洋 +4 位作者 任端阳 赵艳艳 李宝钧 乔利英 刘文忠 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第7期1347-1357,共11页

旨在预测并验证调节绵羊皮下脂肪细胞中SCD1基因表达的关键miRNAs。本研究利用4个生物信息学软件TargetScan、mirDB、StarBase和miRanda预测与该基因具有靶标关系的关键miRNAs;利用双荧光素酶报告系统验证SCD1基因与miRNAs的靶标关系;... 旨在预测并验证调节绵羊皮下脂肪细胞中SCD1基因表达的关键miRNAs。本研究利用4个生物信息学软件TargetScan、mirDB、StarBase和miRanda预测与该基因具有靶标关系的关键miRNAs;利用双荧光素酶报告系统验证SCD1基因与miRNAs的靶标关系;利用荧光定量PCR和Western-blotting技术,分别在mRNA和蛋白水平上检测miRNAs对SCD1 mRNA和蛋白质表达的影响。预测结果表明,miR-200c和miR-429是调控SCD1基因表达的关键miRNAs;双荧光素酶报告系统检测证明,2个miRNAs与SCD1基因都具有靶标关系;荧光定量PCR显示,miR-200c和miR-429显著抑制SCD1 mRNA的表达(P<0.05),且miR-200c作用更大;Western-blotting显示,miR-200c和miR-429极显著抑制SCD1蛋白质的表达(P<0.01);显微镜观察发现,miR-200c和miR-429抑制绵羊皮下脂肪细胞脂滴生成。由此证明,miR-200c和miR-429均靶向抑制SCD1基因的表达,进而抑制绵羊脂肪生成。 展开更多

关键词 mir-200C mir-429 SCD1 miRNA预测 脂肪代谢

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绵羊miR-200b对卵泡颗粒细胞周期和凋亡的影响 被引量：3

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作者 宋鹏琰 锡建中 +4 位作者 张振红 付强 岳巧娴 张配颖 周荣艳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期3471-3479,共9页

旨在揭示miR-200b在绵羊卵泡颗粒细胞的作用。本研究利用在线工具(TargetScan、miRTarBase及miRDB)预测miR-200b的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分为4组,分别转染miR-200b mimic、mimi... 旨在揭示miR-200b在绵羊卵泡颗粒细胞的作用。本研究利用在线工具(TargetScan、miRTarBase及miRDB)预测miR-200b的靶基因,并利用KOBAS对其进行GO和KEGG通路富集分析。将分离培养的绵羊卵泡颗粒细胞分为4组,分别转染miR-200b mimic、mimic NC、miR-200b inhibitor和inhibitor NC,每组6个重复。采用CCK8法分别检测转染24、48和72 h颗粒细胞的存活率;采用荧光定量PCR检测miR-200b、CDK 4、CDK 6、CCND 1、CCND 2、Bax和Bcl-2基因的表达水平。利用3种在线工具预测到25个miR-200b的共同靶基因,GO和KEGG通路富集分析发现这些基因富集在细胞的增殖分化、细胞周期及生殖发育过程;转染miR-200b mimic、miR-200b inhibitor和NC后,颗粒细胞存活率随时间延长呈“V”型趋势降低,且48 h达最低(P<0.01);miR-200b inhibitor与inhibitor NC组相比,miR-200b表达量无显著差异(P>0.05);与mimic NC相比,miR-200b mimic组极显著促进miR-200b表达(P<0.001),显著下调CDK 4(P<0.01)、CDK 6(P<0.001)和CCND 1(P<0.001)、CCND 2(P<0.05)和Bcl-2(P<0.01)基因表达水平,Bax表达并无显著变化(P>0.05),且极显著下调Bcl-2与Bax比值(P<0.001)。综上所述,miR-200b抑制绵羊卵泡颗粒细胞细胞周期和增殖并促进其凋亡。 展开更多

关键词 mir-200b 细胞周期 凋亡 颗粒细胞 绵羊

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miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响及其机制探讨 被引量：2

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作者 伍菲菲 谭志琴 +2 位作者 唐云云 谢黎明 张志伟 《山东医药》 CAS 2013年第32期1-3,共3页

目的观察miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响,并探讨其是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶(DNMT3B)表达发挥作用。方法采用MTT法检测miR-200c对人胃癌MGC-803细胞生长增殖能力的影响;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素... 目的观察miR-200c对人胃癌细胞增殖能力的影响,并探讨其是否通过靶向调控DNA甲基化转移酶(DNMT3B)表达发挥作用。方法采用MTT法检测miR-200c对人胃癌MGC-803细胞生长增殖能力的影响;构建DNMT3B 3'UTR-荧光素酶报告载体,通过荧光素酶报告载体系统观察miR-200c对DNMT3B 3'UTR-荧光素酶活性的影响;将miR-200c mimics转染胃癌细胞MGC-803,采用Western blot检测DNMT3B表达水平。结果 MTT结果显示,在转染miR-200c mimics 24、48、72 h后,细胞增殖活性OD值分别为0.31±0.01、0.47±0.01、0.53±0.02,与对照组的0.44±0.03、0.62±0.01、0.87±0.01比较,P均<0.05;荧光素报告载体系统证实,DNMT3B是miR-200c直接调控的靶基因。Western blot结果显示,miR-200c可抑制DNMT3B蛋白的表达。结论 miR-200c通过靶向调控DNMT3B的表达而抑制胃癌细胞生长增殖能力。 展开更多

关键词 胃癌 微小RNA mir-200C 细胞增殖 DNA甲基化转移酶

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IgA肾病患者血清miR-200家族水平检测及临床意义 被引量：2

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作者 胡豪飞 何永成 +1 位作者 万启军 齐东丽 《中国中西医结合肾病杂志》 2017年第4期309-315,共7页

目的:探讨IgA肾病(IgAN)患者血清microRNA-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429)表达及其与临床、病理及预后等指标的相关关系,进而探讨血清miR-200家族作为反映IgAN进展及预后的生物学标志物可行性。方法:收集新... 目的:探讨IgA肾病(IgAN)患者血清microRNA-200家族(miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429)表达及其与临床、病理及预后等指标的相关关系,进而探讨血清miR-200家族作为反映IgAN进展及预后的生物学标志物可行性。方法:收集新发33例IgA肾病患者血清标本(IgAN组),来自于15例健康志愿者血清(健康对照组),用荧光实时定量PCR行血清miR-200家族检测,比较两组间其表达差异性及相关性。结果:与对照组相比,IgAN组血清miR-200a、miR-141、miR-429表达上调(P<0.05)。IgAN患者血清miR-200b、miR-141、miR-429表达与尿蛋白水平(r=0.413,P=0.021;r=0.452,P=0.014;r=0.370,P=0.040)呈正相关关系;血清miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429表达与e GFR呈负相关关系(r=-0.403,P=0.020;r=-0.517,P=0.002;r=-0.398,P=0.024;r=-0.350,P=0.046);血清miR-200a、miR-200c、miR-429与血尿程度呈正相关(r=0.361,P=0.036;r=0.367,P=0.033;r=0.397,P=0.020);血清miR-200b、miR-429与肾小球硬化程度呈正相关(r=0.377,P=0.034;r=0.335,P=0.047)。IgAN血清miR-200a、miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429之间呈明显正相关关系(P<0.001)。随访进展至透析患者,其基线血清miR-200b与miR-200c水平较未进入透析组偏高(P<0.05);随访尿蛋白完全缓解的患者,其基线血清miR-200a、miR-200b及miR-429水平较未完全缓解组患者偏低(P<0.05)。预后分析提示,在IgAN中,低表达水平的血清miR-200a、miR-200b水平可预测较好的尿蛋白缓解情况(P<0.05);高表达水平的血清miR-200c可预测进展至透析的肾功能情况(P=0.042)。结论:IgAN患者血清miR-200a、miR-141、miR-429表达增加。血清miR-200b、miR-141、miR-429与尿蛋白排泄密切相关,血清miR-200b、miR-200c、miR-141、miR-429水平与IgAN患者肾功能密切相关。血清miR-200a、miR-200c、miR-429水平与IgAN患者肾脏病变活动密切相关,而血清miR-200b、miR-429同时与肾小球硬化程度密切相关。IgAN患者血清miR-200家族表达的高度一致性,可能作为IgAN患者肾小管间质纤维化的生物学标记物。预后分析表明,血清miR-200c水平可预测IgAN患者肾功能进展及预后。血清miR-200a、miR-200b水平可预测IgAN患者尿蛋白缓解情况的预后。 展开更多

关键词 IGA肾病 mir-200家族 肾小管间质纤维化

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miR-200c通过下调TUBB3基因表达逆转老年肺癌患者顺铂耐药性的机制 被引量：2

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作者 赵云龙 李少军 +1 位作者 陈平 刘阳 《中华老年多器官疾病杂志》 2020年第6期433-438,共6页

目的探讨miR-200c逆转肺癌细胞顺铂耐药性的作用机制。方法miR-200c模拟物转染肺癌A549细胞后,采用实时定量PCR法检测miR-200c的表达;采用细胞活力测定(MTS)法检测miR-200c对肺癌A549细胞顺铂耐受性的影响。采用流式细胞术(FCM)检测肿... 目的探讨miR-200c逆转肺癌细胞顺铂耐药性的作用机制。方法miR-200c模拟物转染肺癌A549细胞后,采用实时定量PCR法检测miR-200c的表达;采用细胞活力测定(MTS)法检测miR-200c对肺癌A549细胞顺铂耐受性的影响。采用流式细胞术(FCM)检测肿瘤细胞凋亡率的变化。采用Western blotting检测肿瘤细胞耐药蛋白survivin和Bcl-2蛋白的表达。通过生物信息学分析发现miR-200c下游靶分子TUBB3表达存在差异后,构建TUBB33′UTR的野生型和突变型荧光素酶报告载体,然后利用双荧光素酶活性分析miR-200c对TUBB3基因表达的结合位点和调控作用。通过Western blotting检测miR-200c对TUBB3蛋白表达的调控作用以及Bcl-2蛋白和肿瘤细胞耐药蛋白survivin的表达。采用SPSS 19.0统计软件分析实验数据。结果与对照组相比,miR-200c转染肺癌细胞株后,肺癌细胞对顺铂的敏感性呈明显增加趋势[IC50分别为(37.3±3.1)和(15.3±3.3)μmol/L,P<0.01]。过表达miR-200c的A549/DDP组的细胞凋亡率明显高于NC组(P<0.01)。而肿瘤耐药相关基因Bcl-2和survivin蛋白表达降低。转染miR-200c mimics的A549/DDP细胞中TUBB3蛋白和mRNA的表达均下调(P<0.01)。双荧光素酶活性分析显示miR-200c对TUBB3基因表达具有调控作用(P<0.01)。这些结果均证实TUBB3为miR-200c的下游靶基因。pcDNA-TUBB3质粒转染后,过表达miR-200c的A549/DDP细胞株survivin和Bcl-2蛋白表达较miR-200c mimics组上调。结论miR-200c可通过下调TUBB3基因的表达逆转肺癌顺铂耐药细胞的耐药性。 展开更多

关键词 mir-200C TUBB3基因表达 调控机制

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miR-200b-3p与DNA甲基转移酶-3a在骨关节炎软骨细胞中的表达及作用机制 被引量：5

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作者 商安全 王微微 +2 位作者 陆文英 胡丽庆 李冬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第8期617-623,共7页

目的探讨mi R-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 RT-PCR法检测mi R-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证mi R-200b-3p和DNMT3A之间的靶... 目的探讨mi R-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 RT-PCR法检测mi R-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证mi R-200b-3p和DNMT3A之间的靶向关系;构建过表达的mi R-200b-3p和DNMT3A真核细胞载体;q RT-PCR和western bolt检测MMPs和COLⅡm RNA及蛋白质在稳定转染的软骨细胞中的表达;通过细胞活力测定(MTS法)、团块培养、Hoechst 33342染色法评估细胞的增殖与凋亡情况。结果 q RT-PCR法及western bolt结果显示,mi R-200b-3p和COLⅡ在骨关节炎软骨组织中呈低表达,而DNMT3A和MMPs呈高表达;双荧光素酶和western bolt证实mi R-200b-3p和DNMT3A之间存在靶向关系;MTS法、团块培养及Hoechst 33342染色法结果证实,在mi R-200b-3p过表达的软骨细胞中,DNMT3A和MMPs的表达水平明显下调,COLⅡ的表达水平则明显上调,且细胞的生存能力增强,凋亡率降低(P均<0.05);在过表达DNMT3A的软骨细胞中,MMPs的表达水平明显上调,COLⅡ的表达水平明显下调,且细胞的生存能力减弱,凋亡率增加(P均<0.05)。结论 mi R-200b-3p可以抑制MMPs分泌和促进COLⅡ合成,并且可以通过抑制DNMT3A的表达来增强骨关节炎软骨细胞的生长与增殖。 展开更多

关键词 骨关节炎 软骨细胞 mir-200b-3p DNA甲基转移酶-3a

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miR-200c在甲状腺癌中的研究进展 被引量：1

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作者 张艳 吴晨光 《中国医药导报》 CAS 2019年第9期56-58,63,共4页

mi RNA是一类内源性的非编码小分子RNA,具有高度保守性,参与多种人类肿瘤的发生、发展,其中也包括甲状腺癌。与分化型甲状腺癌比较,未分化型甲状腺癌的预后较差,这可能与其有较高比例的肿瘤干细胞有关。mi R-200c作为一个新发现的抑癌因... mi RNA是一类内源性的非编码小分子RNA,具有高度保守性,参与多种人类肿瘤的发生、发展,其中也包括甲状腺癌。与分化型甲状腺癌比较,未分化型甲状腺癌的预后较差,这可能与其有较高比例的肿瘤干细胞有关。mi R-200c作为一个新发现的抑癌因子,可抑制甲状腺癌细胞的增殖,促进其凋亡,并可通过转化生长因子-β(TGF-β)通路、表皮生长因子受体(EGFR)通路等对上皮-间充质转化过程进行调控,而近期的研究发现,上皮-间充质转化是肿瘤干细胞形成的驱动力。因此,mi R-200c可能成为难治性甲状腺癌治疗上的一个潜在靶点。本文就mi R-200c在甲状腺癌的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 mir-200C 甲状腺癌 上皮-间充质转化 肿瘤干细胞

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绵羊miR-200b启动子鉴定及其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响

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作者 宋鹏琰 王思伟 +3 位作者 岳巧娴 张寅梁 陈晓勇 周荣艳 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第12期5066-5076,共11页

旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;... 旨在鉴定绵羊miR-200b的启动子区并研究其对卵泡颗粒细胞线粒体功能的影响。本研究体外分离培养绵羊卵泡颗粒细胞,通过构建包含3个不同长度启动子区重组质粒,利用生物信息软件和双荧光素酶报告试验预测并鉴定绵羊miR-200b核心启动子区;利用在线工具预测转录因子NR4A1的结合位点;通过双荧光素酶报告试验和qRT-PCR检测过表达NR 4A1基因对miR-200b启动子活性和表达水平的影响;通过转染miR-200b mimic和mimic NC,分别检测颗粒细胞线粒体形态和数量、线粒体膜电位、ROS水平、ATP和线粒体呼吸链复合物Ⅰ的浓度,并检测线粒体氧化磷酸化相关基因表达水平。结果表明,miR-200b-P1(-159/+36 nt)活性最高,确定该区域为miR-200b核心启动子区;预测出核心启动子存在1个NR4A1的结合位点,且过表达NR 4A1基因显著上调miR-200b启动子活性和miR-200b的表达水平(P<0.01)。与mimic NC组相比,转染miR-200b mimic导致颗粒细胞平均光密度显著降低(P<0.01),细胞长度显著缩短(P<0.01)、线粒体膜电位下降(P<0.05)、ATP(P<0.05)和线粒体呼吸链体复合物Ⅰ(P<0.01)的浓度降低、ROS水平升高(P<0.01),同时下调ATP 6V1G1和NDUFV 1的表达(P<0.01),上调NOX 4的表达水平(P<0.01)。该研究确定了绵羊miR-200b的核心启动子区(-159/+36 nt),NR4A1正向调控miR-200b的转录,且miR-200b能够影响线粒体氧化磷酸化过程,诱导颗粒细胞线粒体损伤。该研究结果为进一步揭示miR-200b调控绵羊卵泡发育的机制提供了理论依据。 展开更多

关键词 绵羊 mir-200b 启动子 卵泡颗粒细胞 线粒体

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miR-200b和miR-200c在结肠癌组织中的表达及其临床病理学意义 被引量：3

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作者 窦维佳 王景杰 刘震雄 《山西医科大学学报》 CAS 2018年第1期11-14,共4页

目的观察miR-200b以及miR-200c在结肠癌及相应癌旁组织中的表达,探讨miR-200b以及miR-200c与结肠癌组织临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测64例结肠癌组织及其癌旁组织中miR-200b以及miR-200c的表达,并分析结肠... 目的观察miR-200b以及miR-200c在结肠癌及相应癌旁组织中的表达,探讨miR-200b以及miR-200c与结肠癌组织临床病理特征的关系。方法采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测64例结肠癌组织及其癌旁组织中miR-200b以及miR-200c的表达,并分析结肠癌组织中miR-200b以及miR-200c的表达与其临床病理特征之间的关系。结果 miR-200b以及miR-200c在结肠癌组织中的表达水平均显著低于相应的癌旁组织(miR-200b,P<0.01;miR-200c,P<0.05)。在结肠癌中miR-200b以及miR-200c表达与肿瘤分化程度、TNM分期、淋巴转移均显著相关(均P<0.05),而与患者年龄、性别无明显相关性(均P>0.05),并且miR-200b表达与miR-200c表达之间具有相关性。结论 miR-200b以及miR-200c在结肠癌中呈低表达,并发挥抑癌基因功能,并有可能成为结肠癌治疗的潜在靶点。 展开更多

关键词 结肠癌 mir-200b mir-200C

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