替米沙坦联合羟苯磺酸钙通过miR-19b-3p/SOCS1轴调节自发性高血压主动脉的抗炎作用

1

作者 田春辉 胡威威 +3 位作者 娄满 胡晓英 田心怡 高春燕 《医学研究与战创伤救治》 CAS 北大核心 2024年第3期254-260,共7页

目的探讨替米沙坦联合羟苯磺酸钙在自发性高血压中对主动脉的保护作用及作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠及其WKY大鼠随机分为(n=6):对照组(WKY)、SHR+NC组(未经处理的SHR大鼠)、SHR+替米沙坦组(替米沙坦治疗的SHR大鼠)、SHR+CAD... 目的探讨替米沙坦联合羟苯磺酸钙在自发性高血压中对主动脉的保护作用及作用机制。方法将自发性高血压(SHR)大鼠及其WKY大鼠随机分为(n=6):对照组(WKY)、SHR+NC组(未经处理的SHR大鼠)、SHR+替米沙坦组(替米沙坦治疗的SHR大鼠)、SHR+CAD组(CAD治疗的SHR大鼠)、替米沙坦+CAD组(替米沙坦和CAD联合治疗的SHR大鼠),每组6只。利用苏木精-伊红染色观察治疗前后主动脉血管的变化情况;利用ELISA检测炎症因子的表达水平。利用TargetScan预测miR-19b-3p的下游靶基因,利用双荧光素酶实验验证miR-19b-3p以及下游靶基因之间的结合关系。细胞分组:control组,替米沙坦+NC组,NC+CAD组及替米沙坦+CAD组。随后为了验证替米沙坦与羟苯磺酸钙与miR-19b-3p/SOCS1信号轴的调节关系,利用替米沙坦、羟苯磺酸钙单独处理或者联合对VSMC细胞进行处理。细胞分组:空白组、miR-19b-3p inhibitoror组、miR-19b-3p inhibitor+替米沙坦+NC组、miR-19b-3p inhibitor+NC+CAD组、miR-19b-3p inhibitoror+替米沙坦+CAD组。利用qRT-PCR检测miR-19b-3p和SOCS1的表达水平。从自发性高血压大鼠主动脉中分离血管平滑肌细胞(VSMC),利用CCK-8、Transwell小室实验、qRT-PCR以及Western blot方法验证替米沙坦和羟苯磺酸钙对细胞增殖、迁移表型分型以及炎症因子表达的影响。结果与对照组相比,SHR+NC组大鼠的主动脉管壁厚度明显增厚,管腔内壁降低;经SHR+替米沙坦和SHR+CAD组的SHR大鼠胸主动脉管壁厚度降低,管腔半径增加。ELISA结果显示,与对照组相比,SHR+NC组大鼠血液中IL-1β、TNF-α、IL-6的表达水平显著增加(P<0.05),SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组的大鼠体内炎症因子的表达水平较SHR+NC组显著降低(P<0.05)。与对照组主动脉中miR-19b-3p的表达水平相比,SHR+NC组显著升高,SHR+替米沙坦和SHR+TAD组显著降低(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与对照组SOCS1的表达水平相比,SHR+NC组显著降低,SHR+替米沙坦、SHR+CAD组、替米沙坦+CAD组较SHR+NC组显著上调(P<0.05)。qRT-PCR结果显示,与control组相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组VSMC细胞中α-SMA、SM22α的表达水平显著增高,OPN的表达水平显著下降(P<0.05)。transwell小室实验结果显示,与control组VSMC细胞的迁移相比,替米沙坦+NC组、NC+CAD组和替米沙坦+CAD组显著降低(P<0.05)。与空白组相比,miR-19b-3p inhibitor组IL-1β、TNF-α的表达水平显著降低,进一步添加替米沙坦与羟苯磺酸钙处理后能增强这一结果(P<0.05)。结论替米沙坦与羟苯磺酸钙联用可以通过调节miR-19b-3p/SOCS1信号轴改善自发性高血压大鼠主动脉损伤,抑制炎症因子的表达。 展开更多

关键词 替米沙坦 羟苯磺酸钙 mir-19b-3p 细胞因子信号传导抑制蛋白1 自发性高血压 炎症反应

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芒柄花素调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路影响卵巢癌细胞的增殖、迁移、侵袭和凋亡 被引量：10

2

作者 牛永莉 贾晓波 王艳 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第10期1068-1075,共8页

目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓... 目的研究芒柄花素对卵巢癌细胞增殖、迁移侵袭、凋亡的影响,并分析其机制是否与调控miR-19b-3p/转化生长因子-β(transforming growth factor-beta,TGF-β)/Smad2信号通路相关。方法采用噻唑蓝法、transwell实验、流式细胞术分析不同浓度(35、70、140μmol·L^(-1))的芒柄花素对卵巢癌细胞SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。实时定量PCR分析miR-19b-3p表达。采用上述方法检测过表达或抑制miR-19b-3p对SKOV3增殖活力、迁移侵袭和凋亡的影响。免疫印迹法检测TGF-β和Smad2蛋白表达量。结果35、70、140μmol·L^(-1)的芒柄花素处理显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调miR-19b-3p表达。过表达miR-19b-3p显著增加SKOV3细胞活力、迁移和侵袭数量,降低细胞凋亡率,上调TGF-β和Smad2蛋白表达量。抑制miR-19b-3p表达显著抑制SKOV3细胞活力,减少迁移和侵袭数量,增加细胞凋亡率,下调TGF-β和Smad2蛋白表达量。140μmol·L^(-1)的芒柄花素显著抑制TGF-β和Smad2蛋白表达量。过表达miR-19b-3p可显著减弱芒柄花素处理对SKOV3细胞增殖、迁移侵袭、凋亡以及TGF-β和Smad2蛋白表达的影响。结论芒柄花素可抑制卵巢癌细胞SKOV3增殖、迁移和侵袭,诱导细胞凋亡,其抗肿瘤作用可能与调控miR-19b-3p/TGF-β/Smad2信号通路有关。 展开更多

关键词 芒柄花素 卵巢癌 细胞增殖 迁移侵袭 凋亡 mir-19b-3p TGF-β/Smad2

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荣筋拈痛方通过LncRNA H19/miR-675-3p促进软骨细胞增殖防治膝骨关节炎

3

作者 罗清清 郑若曦 +3 位作者 戴雨婷 吴广文 付长龙 陈俊 《江西中医药》 2025年第1期53-58,共6页

目的:探究荣筋拈痛方通过调控LncRNA H19/miR-675-3p对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞基质代谢及增殖的影响。方法:30只大鼠分为空白血清组和荣筋拈痛方含药血清组,每组15只,分别给予等量生理盐水和荣筋拈痛方药液灌胃,制备空白血清和荣... 目的:探究荣筋拈痛方通过调控LncRNA H19/miR-675-3p对膝骨关节炎(KOA)大鼠软骨细胞基质代谢及增殖的影响。方法:30只大鼠分为空白血清组和荣筋拈痛方含药血清组,每组15只,分别给予等量生理盐水和荣筋拈痛方药液灌胃,制备空白血清和荣筋拈痛方含药血清。提取原代软骨细胞并采用Ⅱ型胶原免疫细胞化学法和甲苯胺蓝染色进行鉴定。采用IL-1β10 ng/mL干预24 h构建软骨细胞退变模型,分为空白组、模型组和荣筋拈痛方组。观察各组软骨细胞中lncRNA H19、miR-675-3p、CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因相对表达水平,CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA蛋白表达情况,EdU细胞增殖试剂盒检测各组软骨细胞增殖情况。结果:原代软骨细胞成簇生长,胞核清晰可辨,胞浆丰富,软骨细胞活力随传代次数的增加而下降。软骨细胞细胞外基质中的CollagenⅡ被染成棕黄色,苏木素将细胞核染成蓝色;甲苯胺蓝染色后细胞整体呈现蓝紫色。与空白组比较,模型组中LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组LncRNA H19、miR-675-3p基因相对表达水平上升(P<0.05)。与空白组比较,模型组CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均下降(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA基因和蛋白相对表达水平均上升(P<0.05)。与空白组比较,模型组中软骨细胞EdU阳性细胞率降低(P<0.05);与模型组比较,荣筋拈痛方组EdU阳性细胞率上升(P<0.05)。结论:荣筋拈痛方可通过上调LncRNA H19/miR-675-3p促进CollagenⅡ、Aggrecan、PCNA表达,抑制细胞外基质降解,促进软骨细胞增殖,起到治疗KOA的作用。 展开更多

关键词 膝骨关节炎 荣筋拈痛方 LncRNA H19 mir-675-3p 软骨细胞增殖

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弥漫性大B细胞淋巴瘤组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义探究

4

作者 贾光明 《当代医药论丛》 2024年第2期30-32,共3页

目的:探讨分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义。方法:选取DLBCL患者76例(纳入DLBCL组)及淋巴结反应性增生(RHL)患者70例(纳入RHL组),采用实时荧光定量PCR法检测所有患者淋巴组织中miR-193... 目的:探讨分析弥漫性大B细胞淋巴瘤(DLBCL)组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达量及临床意义。方法:选取DLBCL患者76例(纳入DLBCL组)及淋巴结反应性增生(RHL)患者70例(纳入RHL组),采用实时荧光定量PCR法检测所有患者淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平,并分析二者的表达水平与DLBCL临床特征的关系。结果:miR-193a-3p及miR-146b-5p在DLBCL组中的表达水平均低于RHL组(P<0.05),二者的表达水平与Ann-Arbo分期、国际预后指数(IPI)评分有关。miR-193a-3p、miR-146b-5p的表达水平与DLBCL的临床分期呈负相关,随着miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平的降低,DLBCL临床分期越高(P<0.05)。淋巴组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达下调是DLBCL临床高分期的危险因子(OR>1,P<0.05)。结论:DLBCL组织中miR-193a-3p、miR-146b-5p表达水平下调,可能参与了DLBCL的发生、发展,二者的表达水平与DLBCL的临床分期有关,可作为DLBCL临床诊治的重要参考依据。 展开更多

关键词 弥漫性大B细胞淋巴瘤 mir-193a-3p mir-146b-5p 抑癌基因

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原发性肝癌精准肝切除术临床效果观察及患者血清miR-199a/b-3p水平变化 被引量：8

5

作者 张树彬 吕海涛 +3 位作者 刘三光 王文斌 段佳悦 刘建华 《山东医药》 CAS 2019年第5期68-70,共3页

目的观察原发性肝癌精准肝切除术的临床效果及患者血清miR-199a/b-3p水平变化。方法将108例肝癌患者按随机数字表法分为两组各54例,观察组行精准肝切除术治疗,对照组行传统肝切除术治疗。比较两组肝门阻断率、术中出血量、手术时间、术... 目的观察原发性肝癌精准肝切除术的临床效果及患者血清miR-199a/b-3p水平变化。方法将108例肝癌患者按随机数字表法分为两组各54例,观察组行精准肝切除术治疗,对照组行传统肝切除术治疗。比较两组肝门阻断率、术中出血量、手术时间、术后住院时间、总住院费用,检测血清肝功能(ALT、TBIL、AST、ALB)、miR-199a/b-3p,记录术后并发症及术后1年复发情况。结果与对照组比较,观察组肝门阻断率低、术中出血量少、手术时间长、术后住院时间短、总住院费少(P均<0. 05);两组术前肝功能及血清miR-199a/b-3p比较差异无统计学意义,术后观察组ALT、TBIL、AST低于对照组而ALB、miR-199a/b-3p高于对照组(P均<0. 05);观察组术后并发症发生率、术后1年复发率均低于对照组(P均<0. 05)。结论肝癌患者行精准肝切除术治疗,可有效降低肝门阻断率、减少术中出血量、减轻肝功能损害,提高血清miR-199a/b-3p水平,降低术后并发症发生率及肝癌复发率,减轻患者的经济负担。 展开更多

关键词 肝癌 精准肝切除术 mir-199a/b-3p 传统肝切除术 肝功能

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基于lncRNA H19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的干预效应及机制 被引量：1

6

作者 薛春霞 梁建庆 +6 位作者 张媛媛 靳银霞 李尚 章溥 杨楠 李金田 李娟 《中国中医药信息杂志》 CAS CSCD 2024年第8期90-96,共7页

目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂... 目的基于lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴探讨归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠的抑瘤作用及机制。方法60只SPF级雄性C57BL/6小鼠随机取10只作为空白组,其余50只皮下接种Lewis肺癌细胞复制肺癌小鼠模型。将成模小鼠随机分为模型组、顺铂组和中药低、中、高剂量联合顺铂组,每组10只,顺铂组予顺铂5 mg/kg腹腔注射,中药低、中、高剂量联合顺铂组予归芪益元膏1.75、3.5、7.0 g/kg灌胃联合顺铂5mg/kg腹腔注射,空白组和模型组予等体积生理盐水灌胃,连续14d。观察小鼠一般状况,测量小鼠瘤质量并计算抑瘤率、脾脏指数和胸腺指数,HE染色观察肿瘤组织病理形态,检测肿瘤组织丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、过氧化氢(H2O_(2))、亚铁离子(Fe^(2+))含量,免疫组化和Western blot检测肿瘤组织核因子E2相关因子2(Nrf2)、谷胱甘肽过氧化物酶4(GPX4)、铁蛋白重链1(FTH1)、溶质载体家族7成员11(SLC7A11)蛋白表达,实时荧光定量PCR检测肿瘤组织lncRNAH19、miR-19b3p mRNA表达。结果与空白组比较,模型组小鼠体质量、脾脏指数和胸腺指数均降低(P<0.05)。与模型组比较,各给药组小鼠一般状况不同程度改善,瘤质量减少(P<0.05),脾脏指数及胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤细胞溶解、破裂、数量减少,肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、GPX4、FTH1、SLC7A11蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3pmRNA表达升高(P<0.05);与顺铂组比较,中药高剂量联合顺铂组小鼠瘤质量减少(P<0.05),体质量、脾脏指数和胸腺指数升高(P<0.05),肿瘤组织MDA、H2O_(2)、Fe^(2+)含量升高(P<0.05),GSH含量降低(P<0.05),Nrf2、FTH1、SLC7A11、GPX4蛋白表达降低(P<0.05),lncRNAH19 mRNA表达降低(P<0.05),miR-19b3p mRNA表达升高(P<0.05)。结论归芪益元膏联合顺铂对Lewis肺癌小鼠具有明显抑瘤作用,其作用机制可能与调节lncRNAH19/miR-19b3p/FTH1轴相关铁死亡分子表达有关。 展开更多

关键词 肺癌 归芪益元膏 顺铂 小鼠 lncRNAH19/mir-19b3p/FTH1轴

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miR-29b-3p靶向PTEN在先天性心脏病中的作用及其机制 被引量：4

7

作者 刘萍 杨麦巧 +5 位作者 杨也天 王一婷 刘丽丽 马元平 王芳 何川 《西安交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第6期868-874,共7页

目的探究miR-29b-3p在先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)中的作用及其机制。方法 RT-qPCR检测CHD患者和健康志愿者外周血及细胞中miR-29b-3p表达水平;二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)诱导P19细胞分化为心肌样细胞,West... 目的探究miR-29b-3p在先天性心脏病(congenital heart disease, CHD)中的作用及其机制。方法 RT-qPCR检测CHD患者和健康志愿者外周血及细胞中miR-29b-3p表达水平;二甲基亚砜(dimethyl sulfoxide, DMSO)诱导P19细胞分化为心肌样细胞,Western blotting检测分化相关基因及磷酸酶和张力蛋白同源物(phosphatase and tensin homolog,PTEN)表达;CCK-8和Transwell实验检测转染后各组P19细胞增殖和迁移能力;双荧光素酶报告基因实验验证miR-29b-3p和PTEN之间的靶向关系。结果 miR-29b-3p在CHD患者外周血中表达显著低于健康志愿者;miR-29b-3p在分化晚期表达高于早期,敲降miR-29b-3p抑制P19细胞心肌样分化;敲降miR-29b-3p显著抑制心肌样细胞增殖和迁移;PTEN为miR-29b-3p靶基因;敲降miR-29b-3p可通过靶向上调PTEN抑制P19细胞分化及心肌样细胞增殖和迁移。结论 miR-29b-3p通过靶向调控PTEN影响P19细胞心肌样分化及心肌样细胞的增殖和迁移。 展开更多

关键词 mir-29b-3p 先天性心脏病 靶向调控

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miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6促进肝细胞癌生长和转移 被引量：3

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作者 张雷 王宇锋 +5 位作者 王亮 韩少山 殷国志 姚德茂 鲜瑶 李瑞祥 《山西医科大学学报》 CAS 2019年第5期543-550,共8页

目的探讨miR-130b-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及生物学功能,并初步探讨整合因子复合体亚基6(integrator complex subunit 6,INTS6)是否是其潜在的作用靶点。方法收集65例HCC组织和对应的癌旁组... 目的探讨miR-130b-3p在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)中的表达水平、临床意义及生物学功能,并初步探讨整合因子复合体亚基6(integrator complex subunit 6,INTS6)是否是其潜在的作用靶点。方法收集65例HCC组织和对应的癌旁组织标本,用real-time PCR检测miR-130b-3p在HCC组织和癌旁组织中的表达;用real-time PCR检测miR-130b-3p在人正常肝细胞(LO2)与肝癌细胞系中的表达; GEO数据库(GSE36915)分析miR-130b-3p在HCC和癌旁组织中的表达;分析miR-130b-3p的表达水平与HCC临床病理特征的相关性;分别应用miR-130b-3p类似物(miR-130b-3p mimics)和miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)上调和下调MHCC-97L细胞中miR-130b-3p的表达,实验分组包括miR-130b-3p类似物组和相应的对照组以及miR-130b-3p抑制剂组和相应的阴性对照组。Transwell迁移和侵袭实验检测miR-130b-3p对HCC细胞迁移与侵袭能力的影响; MTT实验检测miR-130b-3p对HCC细胞增殖能力的影响;生物信息学工具预测INTS6是否是miR-130b-3p的下游靶点,用荧光素酶报告基因实验以及Western blot分析miR-130b-3p对潜在靶点INTS6的调节作用。结果与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中的表达明显升高(P <0. 001);与正常肝细胞相比,miR-130b-3p在HCC细胞系中的表达明显升高; GEO数据库(GSE36915)数据显示与癌旁组织相比,miR-130b-3p在HCC组织中表达显著上调(P=0. 035 6); miR-130b-3p的表达水平与肿瘤大小(P=0. 015)、静脉侵犯(P=0. 028)以及TNM分期(P=0. 045)显著相关;下调或者上调MHCC-97L细胞的miR-130b-3p表达后,细胞的迁移、侵袭和增殖能力显著被抑制或者增强;生物信息学分析发现,INTS6可能是miR-130b-3p的作用靶点;荧光素酶报告基因实验显示,miR-130b-3p能够负向调节INTS6-3'UTR的荧光素酶活性;此外,miR-130b-3p抑制剂(miR-130b-3p inhibitors)和miR-130b-3p类似物(miR-130b-3pmimics)分别能上调或者下调MHCC-97L细胞中INTS6的表达水平。结论 miR-130b-3p通过靶向作用于INTS6增强HCC细胞的迁移、侵袭及增殖能力,进而促进HCC的发生发展。 展开更多

关键词 肝细胞癌 mir-130b-3p INTS6 细胞迁移 细胞侵袭 细胞增殖

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CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞顺铂耐药性的影响

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作者 边浩鹏 董英辉 +2 位作者 张静 潘静 孙远 《中国现代普通外科进展》 CAS 2023年第5期348-353,共6页

目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组... 目的:探究CircNRIP1调节miR-193b-3p/STMN1轴对胃癌细胞AGS顺铂(DDP)耐药的影响。方法:培养AGS与AGS/DDP细胞,比较两种细胞增殖抑制率以及CircNRIP1、mi R-193b-3p、STMN1表达情况;将AGS/DDP细胞分为AGS/DDP组、sh NC组、sh CircNRIP1组、sh CircNRIP1+inhibitor NC组、sh CircNRIP1+mi R-193b-3p inhibitor组,测定各组AGS/DDP细胞增殖抑制率、凋亡率、侵袭能力以及STMN1蛋白水平;测定mi R-193b-3p与CircNRIP1、STMN1靶向关系。结果:与AGS细胞比较,AGS/DDP细胞CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白水平升高,细胞增殖抑制率、miR-193b-3p降低(P<0.05);与AGS/DDP组相比,sh CircNRIP1组细胞增殖抑制率、凋亡率、mi R-193b-3p升高,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白减少(P<0.05);与sh CircNRIP1组相比,sh CircNRIP1+miR-193b-3p inhibitor组细胞增殖抑制率、凋亡率、miR-193b-3p降低,侵袭细胞数、CircNRIP1、STMN1 m RNA与蛋白升高(P<0.05);miR-193b-3p与CircNRIP1、STMN1均存在靶向关系。结论:沉默AGS/DDP细胞中CircNRIP1表达,可靶向mi R-193b-3p/STMN1抑制AGS/DDP细胞增殖、侵袭,促进AGS/DDP细胞凋亡,实现AGS/DDP细胞对DDP耐药的逆转。 展开更多

关键词 CircNRIp1 mir-193b-3p/STMN1 顺铂 胃癌细胞

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miR-15b-5p调控PI3K/AKT/mTOR信号通路对肾癌细胞凋亡及氧化应激反应的影响 被引量：6

10

作者 秦丽丽 张东成 仲思 《中国中西医结合肾病杂志》 2022年第2期149-153,共5页

目的:探讨miR-15b-5p是否调控磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/mTOR信号通路影响肾癌细胞(A-498)凋亡和氧化应激反应。方法:运用实时定量PCR分析肾癌组织中miR-15b-5p表达水平。流式细胞术分析抑制或过表达miR-15b-5p对A-498... 目的:探讨miR-15b-5p是否调控磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/mTOR信号通路影响肾癌细胞(A-498)凋亡和氧化应激反应。方法:运用实时定量PCR分析肾癌组织中miR-15b-5p表达水平。流式细胞术分析抑制或过表达miR-15b-5p对A-498细胞凋亡的影响。试剂盒分析丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)水平。免疫印迹法分析磷脂酰肌醇-3-羟激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)/雷帕霉素靶蛋白(mTOR)相关蛋白表达水平。结果:肾癌组织中miR-15b-5p表达水平显著升高(P<0.05)。抑制miR-15b-5p表达显著促进A-498细胞凋亡,增加MDA含量,降低SOD和CAT水平,并下调p-p85、p-Akt和p-p70S6K1蛋白表达水平(P<0.05),而过表达miR-15b-5p具有相反作用(P<0.05)。PI3K/AKT/mTOR信号通路抑制剂GNE-477显著促进A-498细胞凋亡,增加MDA含量,降低SOD和CAT水平(P<0.05)。GNE-477还可减弱miR-15b-5p过表达对A-498细胞凋亡和氧化应激反应的影响(P<0.05)。结论:肾癌中miR-15b-5p表达显著增加。抑制miR-15b-5p表达通过抑制PI3K/AKT/mTOR信号通路可促进肾癌细胞凋亡和氧化应激损伤。 展开更多

关键词 mir-15b-5p 肾癌 细胞凋亡 氧化应激 pI3K/AKT/MTOR

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miR-200b-3p/NBR1轴对乳腺癌细胞自噬及生长的影响 被引量：2

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作者 蒋雪梅 易瑛 +1 位作者 陈宇 杨诚诚 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2021年第12期1259-1266,共8页

目的miR-200b-3P靶向NBR1调控乳腺癌自噬的作用仍未完全探索,文章旨在探讨miR-200b-3p是否靶向NBR1影响乳腺癌细胞自噬及生长。方法介绍些分组选择人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)为研究对象,分为阴性对照组(转染mimic NC或inhibitor NC)、miR... 目的miR-200b-3P靶向NBR1调控乳腺癌自噬的作用仍未完全探索,文章旨在探讨miR-200b-3p是否靶向NBR1影响乳腺癌细胞自噬及生长。方法介绍些分组选择人乳腺癌细胞(MDA-MB-453)为研究对象,分为阴性对照组(转染mimic NC或inhibitor NC)、miR-20Ob-3p mimic组(转染miR-200b-3p模拟物)、miR-200b-3p inhibitor组(转染miR-200b-3p抑制剂),采用CCK-8法和克隆形成实验检测各组细胞增殖;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期;Tmnswell实验检测细胞侵袭能力;透射电镜观察细胞超微结构;实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测miR-200b-3p mRNA表达;蛋白质印迹法(Western blot)检测Beclin-1、P62、LC3Ⅱ/Ⅰ、NBR1蛋白表达;双荧光素酶报告实验验证miR-200b-3p与NBR1之间的靶向关系。结果qRT-PCR检测结果显示,与mimic NC组(1.000±0.069)比较,miR-200b-3p mimic组miR-200b-3p mRNA表达(1.314±0.093)明显升高;与inhibitor NC组(1.009±0.055)比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达(0.581±0.031)明显降低(P<0.05);与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组miR-200b-3p mRNA表达明显降低(P<0.05)。细胞侵袭结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组穿过基膜的细胞数明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p in-hibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.0l),与miR-200b-3p mimic组比较,miR-200b-3p inhibitor组穿过基膜的细胞数明显升高(P<0.05)。细胞周期阻滞结果显示,与mimic NC组比较,miR-200h-3p mimic组细胞在G2/M期、S期均明显减少,G1/G0期细胞均明显增多,与inhibitor NC组比较,miR-200b-3p inhihitor组细胞在G2/M期、S期均明显增多(P<0.05),G1/G0期细胞均明显减少(P<0.05)。Western blot法检测结果显示,与mimic NC组比较,miR-200b-3p mimic组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显升高,P62蛋白表达明显降低(P<0.01),与inhibitor NC组比较,miR-20Ob-3p inhibitor组细胞中Beclin-1、LC3II/I蛋白水平明显降低,P62蛋白表达明显升高(P<0.01)。Weatem blot检测结果显示NBR1蛋白表达于转染miR-200b-3p mimic后明显降低,转染miR-200b-3p inhibitor后明显升高(P<0.01)。结论miR-200b-3p mimic可能通过靶向NBR1表达抑制乳腺癌MDA-MB-453细胞增殖、侵袭,促进细胞凋亡及自噬。 展开更多

关键词 乳腺癌 自噬 mir-200b-3p 细胞侵袭

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缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值 被引量：3

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作者 徐丽 毛居旦·阿不力孜 杨丽 《临床误诊误治》 CAS 2021年第7期95-100,共6页

目的探讨缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值。方法选取2019年1月-2020年6月收治的缺血性脑卒中136例,根据颅内外动脉是否狭窄将其分为狭窄组(95例)和对照组(41例)两组,根据颅内外动脉... 目的探讨缺血性脑卒中患者血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平及其对中重度颅内外动脉狭窄预测价值。方法选取2019年1月-2020年6月收治的缺血性脑卒中136例,根据颅内外动脉是否狭窄将其分为狭窄组(95例)和对照组(41例)两组,根据颅内外动脉狭窄程度将狭窄组分为轻度狭窄组(28例)、中度狭窄组(31例)和重度狭窄组(36例)3个亚组。比较狭窄组、对照组及轻度狭窄组、中度狭窄组、重度狭窄组临床资料(一般资料、一般实验室指标和血清miR-17-5p、miR-27b-3p水平),绘制受试者工作特征(ROC)曲线分析血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值。结果狭窄组血清尿酸、总胆固醇(TC)、低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)、miR-17-5p和miR-27b-3p水平均高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。血清尿酸、TC、LDL-C、miR-17-5p和miR-27b-3p水平轻度狭窄组和中度狭窄组低于重度狭窄组,轻度狭窄组低于中度狭窄组,差异均有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。ROC曲线分析结果显示,对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值的曲线下面积血清miR-17-5p和miR-27b-3p及二者联合检测分别为0.677、0.688和0.804,血清miR-17-5p和miR-27b-3p二者联合检测明显高于单独检测(P<0.05)。结论血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平与缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄密切相关;缺血性脑卒中患者颅内外动脉狭窄程度越高,血清miR-17-5p和miR-27b-3p水平越高。血清miR-17-5p和miR-27b-3p联合检测对缺血性脑卒中患者中重度颅内外动脉狭窄预测价值高于血清miR-17-5p和miR-27b-3p单独检测。 展开更多

关键词 卒中 颅内外动脉狭窄 mir-17-5p mir-27b-3p 预测

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舒尼替尼耐药肾癌细胞中circTMBIM6表达变化及其与miR-19a-3p/PPARα轴的调控关系 被引量：1

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作者 艾尼瓦尔·艾木都拉 张骥驰 +1 位作者 张瑞丽 阿不来提·买买提明 《山东医药》 CAS 2022年第26期6-11,共6页

目的观察舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达变化,并探讨其与miR-19a-3p/PPARα轴的关系。方法取舒尼替尼耐药的肾癌细胞A498、Caci-1、780-O,采用qRT-PCR法检测细胞中TMBIM6表达。采用Star⁃base、Targetscan数据库,分别预测miR-19... 目的观察舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达变化,并探讨其与miR-19a-3p/PPARα轴的关系。方法取舒尼替尼耐药的肾癌细胞A498、Caci-1、780-O,采用qRT-PCR法检测细胞中TMBIM6表达。采用Star⁃base、Targetscan数据库,分别预测miR-19a-3p与circTMBIM6 mRNA的3'非翻译区(3'UTR)和PPARαmRNA的3'UTR是否存在互补结合。构建包含结合位点的野生型和突变型circTMBIM6 mRNA 3'UTR双荧光报告质粒。将circTMBIM6-WT、circTMBIM6-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞。同时将PPARα-WT,PPARα-MUT与miR-19a-3p mimics或miR-NC阴性对照共转染至786-O细胞,构建野生型和突变型的PPARαmRNA 3'UTR双荧光报告质粒,检测miR-19a-3p对circTMBIM63'UTR和PPARαmRNA 3'UTR荧光素酶报告基因活性的影响。si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC阴性对照共转染至A498、Caci-1、780-O细胞,将3种肾癌细胞分为抑表达组、对照组,分别转染si-circTMBIM6和si-NC+miR-NC,采用qPCR法检测三种细胞中miR-19a-3p表达。将三种细胞分为miR-19a-3p过表达组、miR-19a-3p抑表达组和对照组,分别转染miR-19a-3p mimics、miR-19a-3p inhibitor及si-NC+miR-NC阴性对照,采用qRT-PCR法和Westernblotting法检测PPARαmRNA和蛋白表达。将三种肾癌细胞分成阴性对照组、miR-19a-3p抑制组、circTMBIM6抑制组,分别转染si-NC+miR-NC阴性对照、si-NC+miR-19a-3p inhibitor和si-circTMBIM,采用RT-PCR法和Westernblotting法分别检测PPARαmRNA和蛋白表达,进一步验证circTMBIM6通过miR-19a-3p调控PPARα的表达。采用CCK-8实验检测各组细胞增殖抑制率,观察肾癌细胞舒尼替尼耐药中circTMBIM6与miR-19a-3p/PPARα轴的调控作用。结果与正常肾癌细胞相比,舒尼替尼耐药的肾癌细胞circTMBIM6表达均升高(P均<0.01)。生物信息学分析预测显示,miR-19a-3p分别与circTMBIM6的3'UTR以及PPARαmRNA的3'UTR具有潜在互补结合位点。双荧光素酶报告基因活性检测显示,在circTMBIM6野生型3'UTR中,miR-19a-3p mimics组荧光素酶活性低于miR-NC组(P<0.05),但在circTMBIM6突变型3'UTR中,两组荧光素酶活性无明显变化。在三种肾癌细胞A498、Caci-1、780-O中,si-circTMBIM6组miR-19a-3p表达均高于si-NC+miR-NC组(P均<0.05)。三种细胞中,miR-19a-3p抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组升高;circTM⁃BIM6抑制组PPARαmRNA和蛋白表达较阴性对照组降低(P均<0.05)。CCK-8实验显示,circTMBIM6抑制组细胞增殖抑制率低于阴性对照组,miR-19a-3p抑制组细胞增殖抑制率高于阴性对照组(P均<0.05)。结论舒尼替尼耐药的肾癌细胞中circTMBIM6表达升高;circTMBIM6通过海绵吸收miR-19a-3p调控PPARα表达,降低RCC对舒尼替尼的敏感性,导致耐药的发生。 展开更多

关键词 肾肿瘤 舒尼替尼耐药 circTMBIM6 mir-19a-3p ppARΑ

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MiR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用 被引量：1

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作者 李洋 梁瑜 《皖南医学院学报》 CAS 2015年第2期117-121,共5页

目的:探讨miR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用。方法:通过对多药敏感的膀胱癌细胞株5637及多药耐受的膀胱癌细胞株H-bc进行microRNA测序分析,miR-29b-3p作为表达差异较为明显的候选microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染mi... 目的:探讨miR-29b-3p在膀胱癌化疗耐受机制中的作用。方法:通过对多药敏感的膀胱癌细胞株5637及多药耐受的膀胱癌细胞株H-bc进行microRNA测序分析,miR-29b-3p作为表达差异较为明显的候选microRNA被挑选进行下一步研究。分别合成并转染miR-29b-3p的mimic或antagomiR序列以提高或抑制其细胞中的表达水平。应用MTT法检测膀胱癌细胞中miR-29b-3p及其下游基因DNMT3A表达水平改变后对于多种化疗药物杀伤敏感性的改变。结果:qRT-PCR验证表明miR-29b-3p在5637中表达水平低于H-bc(1.00∶4.41)。5637细胞中转染mimic提高其表达后,细胞对于丝裂霉素诱发的死亡比例上升了37%,而H-bc细胞中转染antagomiR后,对于IC50剂量的丝裂霉素诱发的死亡比例下降了19%。作为miR-29b-3p的下游基因,DNMT3A的表达抑制也可以受到miR-29b-3p的调控。在5637细胞中转染其siRNA抑制表达后,同样可以提高细胞对于丝裂霉素的耐受。结论:miR-29b-3p可能通过抑制其靶基因DNMT3A促进了膀胱癌对于丝裂霉素的耐受。 展开更多

关键词 DNMT3A mir-29b-3p 化疗耐受 膀胱癌

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circZNF292靶向miR-23b-3p/SIRT1轴调节人晶状体上皮细胞氧化应激损伤的机制分析 被引量：1

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作者 邢媛 鲍宁 《眼科新进展》 CAS 北大核心 2022年第7期514-519,共6页

目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及... 目的探究circZNF292在调节人晶状体上皮细胞(LECs)氧化应激损伤中的作用及可能的分子机制。方法收集单纯年龄相关性白内障(ARC)患眼的晶状体前囊膜组织(ARC组)和排除眼部疾病眼球捐献者的晶状体前囊膜组织(对照组)各3例,进行RNA提取及转录组学测序。应用qRT-PCR检测两组样本中circZNF292、miR-23b-3p和SIRT1 mRNA表达水平。利用双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性来验证circZNF292、miR-23b-3p、SIRT1之间的靶向关系。体外培养人永生化LECs细胞系HLE-B3,分为空白对照组、NC siRNA组、circZNF292 siRNA组、NC inhibitor组、miR-23b inhibitor组、NC mimics组、miR-23b mimics组、circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组。使用Lipo2000试剂转染,48 h后收获细胞。分别用MTT法、流式细胞术和荧光探针示踪法检测细胞活力、凋亡率及丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、活性氧(ROS)含量。结果ARC组和对照组晶状体前囊膜组织样本之间鉴定得到469个下调circRNA和1231个上调circRNA,对前10位变化最明显的circRNA进行qRT-PCR验证,最终确定circZNF292在ARC组样本中下调最明显;且circZNF292与miR-23b-3p表达、miR-23b-3p与SIRT1 mRNA表达均呈负相关(r=-0.935,-0.951,均为P<0.05)。NC siRNA组和空白对照组细胞活力、细胞凋亡率及ROS、MDA、SOD、GSH-Px含量比较,差异均无统计学意义(均为P>0.05)。应用H_(2)O_(2)刺激后,与NC siRNA组相比,NC siRNA组+H_(2)O_(2) HLE-B3细胞凋亡率及ROS、MDA含量均明显升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均明显降低(均为P<0.05);而circZNF292 siRNA组+H_(2)O_(2)细胞凋亡率及ROS、MDA含量则较NC siRNA组+H_(2)O_(2)均进一步升高(均为P<0.05),细胞活力及SOD、GSH-Px含量均进一步降低(均为P<0.05)。此外,circZNF292 siRNA+miR-23b inhibitor组上述指标较circZNF292 siRNA组则被逆转(均为P<0.05)。结论circZNF292可通过miR-23b-3p/SIRT1轴调节人LECs氧化应激损伤,从而有望为ARC提供新的治疗靶标。 展开更多

关键词 circZNF292 mir-23b-3p SIRT1基因 人晶状体上皮细胞 氧化应激损伤

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小鼠miR-487b-3p对C2C12增殖和分化调控作用的研究 被引量：2

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作者 凌笑笑 唐朋 +4 位作者 贾聪俊 梁春年 吴晓云 褚敏 阎萍 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期2371-2383,共13页

旨在研究miR-487b-3p对小鼠C2C12细胞增殖与分化的具体调控机制。本研究以小鼠成肌细胞系(C2C12)为研究对象,利用qRT-PCR检测miR-487b-3p在小鼠各组织和C2C12细胞增殖与分化过程中的表达情况;通过转染miR-487b-3p mimics和miR-487b-3p i... 旨在研究miR-487b-3p对小鼠C2C12细胞增殖与分化的具体调控机制。本研究以小鼠成肌细胞系(C2C12)为研究对象,利用qRT-PCR检测miR-487b-3p在小鼠各组织和C2C12细胞增殖与分化过程中的表达情况;通过转染miR-487b-3p mimics和miR-487b-3p inhibitor后,利用qRT-PCR检测转染效率,并采用qRT-PCR和Western blotting检测增殖标记基因PCNA和分化标记基因MYOD、MYOG和MYHC的表达差异;利用生物信息学软件对miR-487b-3p靶基因进行预测,利用qRT-PCR检测小鼠C2C12细胞增殖与分化过程中PITX2的表达情况,并检测过表达(抑制)miR-487b-3p后PITX2的表达差异,通过双荧光素酶报告系统验证miR-487b-3p和PITX2的靶标关系。结果表明,miR-487b-3p在小鼠骨骼肌中相对表达最高,在C2C12细胞增殖与分化的过程中miR-487b-3p的表达量整体上呈现上升趋势,推测miR-487b-3p参与调控骨骼肌发育。过表达miR-487b-3p后,极显著上调miR-487b-3p的表达(P<0.01),在转录和蛋白水平均极显著上调PCNA的表达(P<0.01),显著下调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达(P<0.05),同时显著下调MYHC(P<0.05)、MYOD(P<0.01)和MYOG蛋白(P<0.05)的表达;而抑制miR-487b-3p后,极显著下调miR-487b-3p的表达(P<0.01),显著下调PCNA基因的表达(P<0.05),极显著下调PCNA蛋白的表达(P<0.01),显著上调MYHC、MYOD和MYOG蛋白的表达(P<0.05),上调MYHC、MYOD和MYOG基因的表达,但未达显著水平(P>0.05)。在C2C12细胞增殖和分化过程中,PITX2与miR-487b-3p表达趋势相反;过表达miR-487b-3p能极显著下调PITX2mRNA的表达(P<0.01),相反,抑制miR-487b-3p的表达则极显著上调PITX2mRNA的表达(P<0.01);双荧光素酶报告系统验证PITX2是miR-487b-3p的直接靶基因。综上表明,miR-487b-3p通过靶向PITX2促进C2C12细胞增殖而抑制其分化。 展开更多

关键词 小鼠 mir-487b-3p 增殖 分化 pITX2

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lncRNA KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖诱导的人视网膜上皮细胞增殖与凋亡 被引量：5

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作者 张妮红 侯定善 +2 位作者 乔建治 付珂 王洪亮 《国际眼科杂志》 CAS 北大核心 2021年第12期2044-2052,共9页

目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。方法:运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARP... 目的:观察长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1通过miR-19a-3p/TSHZ3影响高糖(HG)诱导的人视网膜上皮细胞(ARPE-19)增殖、凋亡与氧化应激情况。方法:运用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测5、15、45、135mmol/L HG刺激的ARPE-19的细胞存活率。将ARPE-19细胞分为NC组、45mmol/L HG组、si-NC+45mmol/L HG组、si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、miR-NC+45mmol/L HG组、miR-19a-3p mimics+45mmol/L HG组、si-con+45mmol/L HG组、si-TSHZ3+45mmol/LHG组、pcDNA+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组、pcDNA-TSHZ3+si-lncRNA KCNQ1OT1+45mmol/L HG组。运用CCK-8检测细胞存活率,qRT-PCR检测lncRNA KCNQ1OT1、miR-19a-3p和TSHZ3 mRNA表达,Western Blot检测TSHZ3、活化-含半胱氨酸的天冬氨酸蛋白水解酶3(Cleaved-caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax)蛋白质的表达,酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测氧化应激指标活性氧(ROS)、丙二醛(MDA)水平。双荧光素酶活性检测lncRNA KCNQ1OT1和miR-19a-3p、miR-19a-3p和TSHZ3之间的靶向结合。结果:15、45、135mmol/L HG抑制ARPE-19细胞的存活率,后续选择细胞存活率约50%的HG浓度45mmol/L。45mmol/L HG提高ARPE-19细胞中lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3 mRNA、TSHZ3蛋白表达水平、凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平,降低miR-19a-3p表达水平、细胞存活率(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1、TSHZ3低表达或miR-19a-3p高表达提高HG诱导的ARPE-19细胞的存活率,降低凋亡率、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达、ROS和MDA水平(P<0.05)。lncRNA KCNQ1OT1靶向miR-19a-3p,miR-19a-3p靶向TSHZ3,lncRNA KCNQ1OT13通过miR-19a-3p调控TSHZ3的表达。lncRNA KCNQ1OT1低表达对HG诱导的ARPE-19细胞存活率、凋亡以及氧化应激的影响被TSHZ3过表达所逆转。结论:lncRNA KCNQ1OT13低表达通过miR-19a-3p/TSHZ3,促进HG诱导的ARPE-19,并抑制其凋亡和氧化应激。 展开更多

关键词 糖尿病视网膜病变 长链非编码RNA(lncRNA)KCNQ1OT1 mir-19a-3p TSHZ3 增殖 凋亡 氧化应激

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靶向激活miR-148b-3p对缺血性脑卒中小鼠脑功能的影响及机制 被引量：1

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作者 李明 刘勇 +4 位作者 董海 王彪 阎登富 刘磊 何仲春 《成都医学院学报》 CAS 2020年第4期432-437,共6页

目的观察激活miR-148b-3p对小鼠缺血性脑卒中的影响,探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴在该影响中的作用。方法将50只健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、栓塞模型组(M... 目的观察激活miR-148b-3p对小鼠缺血性脑卒中的影响,探讨硫氧还蛋白互作蛋白(TXNIP)/核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)轴在该影响中的作用。方法将50只健康雄性C57BL/6小鼠按照随机数字表法分为假手术组(Sham组)、栓塞模型组(MCAO组)、NLRP3抑制剂组(MCC950组)、miR阴性对照转染组(NC agomiR组)、miR-148b-3p激动剂转染组(miR-148b-3p agomiR组),每组10只。假手术组仅做手术损伤;其他各组小鼠采用线栓致大脑中动脉阻塞(MCAO)法建立小鼠缺血性脑卒中模型,使小鼠接受脑缺血1 h和再灌注72 h。MCC950组于手术后即刻腹腔注射50 mg/kg体重的NLRP3抑制剂MCC950。Sham组和MCAO组于手术后即刻腹腔注射同等容积的磷酸缓冲盐溶液(PBS)。NC agomiR组、miR-148b-3p agomiR组在手术前60 min通过侧脑室注射30 pmol/g体重的agomiR阴性对照品或miR-148b-3p agomiR。再灌注72 h后评估小鼠脑功能缺陷程度,氯化三苯基四氮唑染色法检测脑梗死灶体积百分数,RT-PCR法检测脑组织miR-148b-3p表达量,蛋白质印迹技术检测脑组织TXNIP、NLRP3蛋白表达量。另外,在小鼠神经瘤母细胞N2a细胞系上,采用双荧光素酶实验验证miR-148b-3p对TXNIP mRNA的靶向调节作用。结果与Sham组比较,MCAO组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显增大,缺血区脑组织miR-148b-3p表达量减少,TXNIP、NLRP3蛋白表达量增多;与miR转染阴性对照组比较,miR-148b-3p激动剂转染组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低,缺血区脑组织miR-148b-3p表达量增多,TXNIP、NLRP3蛋白表达量减少;与MCAO组比较,MCC950组小鼠脑功能缺陷评分和脑梗死灶体积百分数均明显降低。荧光素酶实验显示,TXNIP是miR-148b-3p的1个直接调节靶。结论内源性miR-148b-3p的表达下调可能与小鼠缺血性脑卒中发生相关;激活miR-148b-3p则对小鼠缺血性脑卒中有一定保护性作用,其机制与其抑制促炎性TXNIP/NLRP3信号轴有关。 展开更多

关键词 mir-148b-3p 缺血性脑卒中 硫氧还蛋白互作蛋白 核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3

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miR-200b-3p与DNA甲基转移酶-3a在骨关节炎软骨细胞中的表达及作用机制 被引量：5

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作者 商安全 王微微 +2 位作者 陆文英 胡丽庆 李冬 《临床检验杂志》 CAS CSCD 2018年第8期617-623,共7页

目的探讨mi R-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 RT-PCR法检测mi R-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证mi R-200b-3p和DNMT3A之间的靶... 目的探讨mi R-200b-3p靶向DNMT3A对骨关节炎软骨细胞增殖和凋亡的影响。方法 RT-PCR法检测mi R-200b-3p,DNMT3A,MMPs和COLⅡ在正常软骨组织和骨关节炎软骨组织中的表达;采用双荧光素酶和western bolt验证mi R-200b-3p和DNMT3A之间的靶向关系;构建过表达的mi R-200b-3p和DNMT3A真核细胞载体;q RT-PCR和western bolt检测MMPs和COLⅡm RNA及蛋白质在稳定转染的软骨细胞中的表达;通过细胞活力测定(MTS法)、团块培养、Hoechst 33342染色法评估细胞的增殖与凋亡情况。结果 q RT-PCR法及western bolt结果显示,mi R-200b-3p和COLⅡ在骨关节炎软骨组织中呈低表达,而DNMT3A和MMPs呈高表达;双荧光素酶和western bolt证实mi R-200b-3p和DNMT3A之间存在靶向关系;MTS法、团块培养及Hoechst 33342染色法结果证实,在mi R-200b-3p过表达的软骨细胞中,DNMT3A和MMPs的表达水平明显下调,COLⅡ的表达水平则明显上调,且细胞的生存能力增强,凋亡率降低(P均<0.05);在过表达DNMT3A的软骨细胞中,MMPs的表达水平明显上调,COLⅡ的表达水平明显下调,且细胞的生存能力减弱,凋亡率增加(P均<0.05)。结论 mi R-200b-3p可以抑制MMPs分泌和促进COLⅡ合成,并且可以通过抑制DNMT3A的表达来增强骨关节炎软骨细胞的生长与增殖。 展开更多

关键词 骨关节炎 软骨细胞 mir-200b-3p DNA甲基转移酶-3a

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黄芪多糖通过miR-10b-5p/AGPAT3分子轴调控结直肠癌细胞顺铂耐药性 被引量：6

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作者 陆曲折 罗永有 +2 位作者 王鑫 张莉莉 陈胜华 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期970-978,共9页

目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)通过miR-10b-5p/(1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 3;AGPAT3)分子轴调控结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞顺铂(cisdiammine dichloroplatinum;CDDP)耐药性的分子机... 目的探讨黄芪多糖(astragalus polysaccharide,APS)通过miR-10b-5p/(1-acylglycerol-3-phosphate-O-acyltransferase 3;AGPAT3)分子轴调控结直肠癌(colorectal cancer,CRC)细胞顺铂(cisdiammine dichloroplatinum;CDDP)耐药性的分子机制。方法采用RT-qPCR检测SW620及SW620/CDDP细胞miR-10b-5p表达水平;使用MTT法或Transwell法检测不同浓度的APS或不同浓度的顺铂处理SW620及SW620/CDDP细胞后的细胞活力;通过双荧光素酶报告基因系统检测miR-10b-5p与AGPAT3的靶向结合关系;使用Western blotting检测AGPAT3、E-cadherin、Vimentin、Ki-67及zinc finger E-box binding homeobox 1(Zeb1)的表达情况。结果miR-10b-5p在SW620/CDDP细胞中表达水平显著上调(P<0.01);经不同浓度的APS处理后,SW620/CDDP细胞增殖(P<0.05)及迁移(P<0.05)水平受到显著抑制,APS与顺铂联合使用,显著增加了SW620/CDDP细胞对顺铂的敏感性(P<0.05);双荧光素酶报告基因验证AGPAT3是miR-10b-5p的靶基因;Western blotting检测结果显示,过表达miR-10b-5p或敲降AGPAT3可显著抑制E-cadherin的表达(P<0.01),并上调Vimentin、Ki-67及Zeb1的表达水平(P<0.01)。结论APS通过miR-10b-5p/AGPAT3分子轴调控CRC细胞顺铂耐药性,APS可作为CRC的化疗辅助药物,调节细胞对化疗药物的敏感性。 展开更多

关键词 黄芪多糖 mir-10b-5p AGpAT3 结直肠癌 顺氯氨铂

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