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miR-190b通过PTEN/PI3K/AKT信号通路对肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖、迁移和凋亡的影响 被引量:5
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作者 张剑春 陶涛 刘俊启 《郑州大学学报(医学版)》 CAS 北大核心 2021年第2期226-231,共6页
目的:探讨miR-190b通过PTEN/PI3K/AKT信号通路对肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR法检测miR-190b在肾母细胞瘤和相应的癌旁正常组织(n=20)中的表达,免疫组化法检测组织中PTEN、PI3K、p-AKT蛋白的表达。T... 目的:探讨miR-190b通过PTEN/PI3K/AKT信号通路对肾母细胞瘤细胞SK-NEP-1增殖、迁移和凋亡的影响。方法:采用qRT-PCR法检测miR-190b在肾母细胞瘤和相应的癌旁正常组织(n=20)中的表达,免疫组化法检测组织中PTEN、PI3K、p-AKT蛋白的表达。TargetScan预测miR-190b与PTEN是否具有靶向关系,并采用双荧光素酶报告实验进行验证。SK-NEP-1细胞分为4组:空白对照组,不进行任何处理;miR-对照(NC)组,转染miR-NC质粒;miR-190b模拟物组,转染miR-190b模拟物质粒;miR-190b抑制剂组,转染miR-190b抑制剂质粒;48 h后,qRT-PCR法检测细胞中miR-190b的表达;细胞集落形成实验检测细胞增殖能力;Transwell小室法检测各组细胞的侵袭、迁移能力;Annexin V-FITC/PI染色法检测细胞凋亡;Western blot法检测细胞中PTEN、PI3K、AKT、p-AKT蛋白表达。结果:与癌旁正常组织相比,肾母细胞瘤组织中miR-190b表达上调,PTEN阳性细胞百分比下降,PI3K和p-AKT阳性细胞百分比上升(P<0.05)。miR-190b可靶向负调节PTEN的表达。与空白对照组和miR-NC组相比,miR-190b模拟物组中miR-190b表达水平上升,细胞增殖、迁移和侵袭能力提高,凋亡率下降(P<0.05);miR-190b抑制剂组中miR-190b的表达水平下降,增殖能力、迁移和侵袭能力下降,凋亡率上升(P<0.05)。与空白对照组和miR-NC组相比,miR-190b模拟物组中PTEN蛋白表达下调,而PI3K和p-AKT/AKT上调(P<0.05);miR-190b抑制剂组PTEN蛋白表达上调,PI3K和p-AKT/AKT下调(P<0.05)。结论:miR-190b通过调控PTEN/PI3K/AKT信号通路影响肾母细胞瘤细胞的增殖、迁移和凋亡。 展开更多
关键词 mir-190b PTEN/PI3K/AKT信号通路 肾母细胞瘤 SK-NEP-1细胞 增殖 迁移 凋亡
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长链非编码RNA PVT1通过靶向miR-190对宫颈癌HeLa细胞生存及转移的影响 被引量:2
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作者 邓永红 张力 +1 位作者 王璟 颜爱华 《中国临床解剖学杂志》 CSCD 北大核心 2020年第4期414-420,共7页
目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)PVT1通过靶向miR-190对宫颈癌细胞生存及转移的影响。方法qRT-PCR鉴定宫颈癌细胞与正常宫颈细胞中lncRNA PVT1和miR-190的表达水平;生物信息学软件预测lncRNA PVT1和miR-190之间的靶... 目的探究长链非编码RNA(long non-coding RNA,LncRNA)PVT1通过靶向miR-190对宫颈癌细胞生存及转移的影响。方法qRT-PCR鉴定宫颈癌细胞与正常宫颈细胞中lncRNA PVT1和miR-190的表达水平;生物信息学软件预测lncRNA PVT1和miR-190之间的靶向关系。MTT检测细胞增殖,克隆形成实验检测细胞生长,Hoechst染色和流式细胞术鉴定细胞凋亡,Transwell检测细胞侵袭,划痕实验检测细胞迁移;Western Blot验证体系中增殖、凋亡和上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition,EMT)相关分子表达。宫颈癌HeLa细胞经过sh-PVT1处理后进行裸鼠皮下移植瘤接种,检测肿瘤体积及肿瘤组织中增殖和凋亡相关分子表达。结果与正常宫颈细胞相比,lncRNA PVT1在各宫颈癌细胞中高表达,干扰PVT1后,miR-190表达量显著上调,经生物信息学和荧光素酶报告系统验证lncRNA PVT1和miR-190有较强结合性。sh-PVT1可有效抑制宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,促进凋亡发生(P<0.01);lncRNA PVT1可有效抑制EMT相关分子表达,降低宫颈癌细胞向EMT转化;miR-190抑制后可有效逆转上述现象(P<0.01)。体内实验证实PVT1敲降可以有效降低肿瘤细胞增殖,促进细胞凋亡(P<0.01)。结论lncRNA PVT1在宫颈癌中高表达,PVT1敲降后可有效解除PVT1对miR-190的抑制效果,从而降低宫颈癌细胞增殖、侵袭和迁移,并促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 长链非编码RNA PVT1 小RNA190 宫颈癌 上皮间质转化 增殖 凋亡
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茶黄素通过调控miR-190表达对LPS诱导的结肠上皮细胞炎症损伤的影响 被引量:12
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作者 左灵妮 刘康 +1 位作者 马晓勤 杨雅丽 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第17期2087-2092,共6页
目的:研究茶黄素是否通过调控miR-190表达影响脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞炎症损伤。方法:采用LPS诱导结肠上皮细胞NCM460损伤,并给予16、32、64μmol/L浓度的茶黄素。ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,流式细胞术评估细... 目的:研究茶黄素是否通过调控miR-190表达影响脂多糖(LPS)诱导的结肠上皮细胞炎症损伤。方法:采用LPS诱导结肠上皮细胞NCM460损伤,并给予16、32、64μmol/L浓度的茶黄素。ELISA检测炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α表达,流式细胞术评估细胞凋亡,Western blot分析Bcl-2和Bax蛋白表达,qRT-PCR测定miR-190表达。在结肠上皮细胞中转染miR-190 mimic并使用LPS处理;或转染miR-190 inhibitor,并使用LPS和64μmol/L茶黄素处理,通过上述方法检测其对结肠上皮细胞炎症损伤的影响。结果:LPS诱导的结肠上皮细胞IL-6、IL-1β、TNF-α表达、凋亡率和Bax蛋白表达增加,Bcl-2蛋白和miR-190表达水平降低(P<0.05)。不同浓度的茶黄素明显降低LPS诱导的结肠上皮细胞中炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达水平、凋亡率、Bax蛋白表达水平,并显著提高Bcl-2蛋白、miR-190表达水平,且其作用效果随浓度增加而逐渐增强(P<0.05)。miR-190过表达明显减少LPS诱导的结肠上皮细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α的表达水平、细胞凋亡率、Bax蛋白表达水平,显著增加Bcl-2蛋白的表达水平(P<0.05)。抑制miR-190表达后,茶黄素对LPS诱导的结肠上皮细胞中IL-6、IL-1β、TNF-α表达、细胞凋亡率、Bax蛋白表达的抑制作用,以及对Bcl-2蛋白表达的促进作用被逆转。结论:茶黄素通过调控miR-190表达,改善LPS诱导的结肠上皮细胞炎症因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达和抑制细胞凋亡,从而保护LPS诱导的结肠上皮细胞炎症损伤。 展开更多
关键词 茶黄素 结肠上皮细胞 LPS mir-190 炎症 凋亡
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基于miR-190b/PHLPP1/AKT/FOXO3a通路探究补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎模型小鼠海马神经元异常自噬的影响
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作者 刘晓炜 高天舒 《中华中医药学刊》 2025年第12期60-67,I0038-I0041,共12页
目的 基于miR-190b/Pleckstrin同源结构域和富亮氨酸重复蛋白磷酸酶(Pleckstrin homology domain leucine-rich repeat protein phosphatase, PHLPP1)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)/叉形头转录因O亚型3a(Forkhead BoxO3a, FOXO3a)... 目的 基于miR-190b/Pleckstrin同源结构域和富亮氨酸重复蛋白磷酸酶(Pleckstrin homology domain leucine-rich repeat protein phosphatase, PHLPP1)/蛋白激酶B(Protein kinase B,AKT)/叉形头转录因O亚型3a(Forkhead BoxO3a, FOXO3a)通路探究补中益气汤对自身免疫性甲状腺炎(Autoimmune thyroiditis, AIT)模型小鼠海马神经元异常自噬的影响。方法 50只雌性NOD.H-2~(h4)小鼠随机分为空白对照组(CG组)、模型组(MG组)、补中益气汤低、中、高剂量组(BG-1、BG-2、BG-3组),每组10只。通过猪甲状腺球蛋白诱导法建立AIT模型,造模成功后,BG-1、BG-2、BG-3组分别予2.73、8.19、24.57 g/kg·d补中益气汤中药灌胃,CG组、MG组予等量蒸馏水灌胃,每灌胃6 d休息1 d,连续8周。Morris水迷宫实验检测小鼠空间学习记忆能力;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)检测小鼠血清三碘甲腺原氨酸(Triiodothyronine, T_(3))、四碘甲状腺原氨酸(Tetraiodothyronine, T_(4))、促甲状腺激素(Thyroid stimulating hormone, TSH)、甲状腺球蛋白抗体(Thyroglobulin antibody, TgAb)水平;苏木素伊红(Hematoxylin eosin, HE)染色法观察小鼠甲状腺组织形态变化;透射电子显微镜观察小鼠海马神经元超微结构;免疫荧光染色法观察小鼠脑组织海马CA1区LC3阳性表达;逆转录聚合酶链式反应(Reverse transcription polymerase chain reaction, RT-PCR)法检测小鼠海马组织miR-190b-5p、PHLPP1 mRNA表达;Wes全自动蛋白印迹定量分析系统检测小鼠海马组织Beclin1、LC3、P62、PHLPP1、AKT、p-AKT、FOXO3a、p-FOXO3a蛋白水平;双荧光素酶报告基因实验验证miR-190b-5p与PHLPP1靶向关系。结果 与CG组比较,MG组小鼠逃避潜伏期明显延长(P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间均显著降低(P<0.01);血清TgAb含量显著升高(P<0.01);甲状腺滤泡大小不等,滤泡内间质有大量淋巴细胞浸润;海马神经元结构受损,出现自噬小体;海马CA1区LC3平均荧光强度增加(P<0.01);海马组织Beclin1、LC3、PHLPP1、FOXO3a蛋白表达水平增高,P62、p-AKT/AKT、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达水平降低(P<0.01);海马组织miR-190b-5p水平降低,PHLPP1 mRNA水平增高(P<0.01)。与MG组相比,中药各组可使小鼠逃避潜伏期显著缩短(P<0.05,P<0.01),穿越平台次数和目标象限停留时间增加(P<0.01);血清TgAb水平显著降低(P<0.01);甲状腺滤泡上皮细胞结构较为完整,淋巴细胞浸润情况明显缓解;海马神经元细胞形态结构恢复,自噬小体减少;海马CA1区LC3平均荧光强度均降低(P<0.01);小鼠海马组织Beclin1、LC3、PHLPP1、FOXO3a蛋白表达水平降低,P62、p-AKT/AKT、p-FOXO3a/FOXO3a蛋白表达水平升高(P<0.05,P<0.01);海马组织miR-190b-5p水平升高,PHLPP1 mRNA水平显著降低(P<0.05,P<0.01)。双荧光素酶实验证实PHLPP1是miR-190b-5p的靶向调控分子。结论 补中益气汤可能通过调控miR-190b/PHLPP1/AKT/FOXO3a信号通路改善AIT小鼠海马神经元异常自噬,从而减轻海马神经元损伤,缓解认知功能损伤。 展开更多
关键词 自身免疫性甲状腺炎 认知损伤 补中益气汤 自噬 mir-190b PHLPP1/AKT/FOXO3a
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MicroRNA-190调控衰老相关的脂肪能量代谢稳态 被引量:2
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作者 彭丹丹 李言 《南京医科大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2021年第12期1728-1734,共7页
目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-190在衰老相关的能量代谢紊乱中的作用和潜在分子机制。方法:利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative-polymerase chain reaction,RT-PCR),对衰老小鼠脂肪组织中miR-190的表达水平进... 目的:探究微小RNA(microRNA,miR)-190在衰老相关的能量代谢紊乱中的作用和潜在分子机制。方法:利用实时荧光定量PCR(real-time fluorescent quantitative-polymerase chain reaction,RT-PCR),对衰老小鼠脂肪组织中miR-190的表达水平进行检测;构建细胞衰老模型,利用RT-PCR检测脂肪细胞中miR-190的变化;利用RT-PCR检测转染miR-190的脂肪细胞中产热基因的变化;用双荧光素酶报告基因实验验证miR-190的靶基因;利用antagomir注射抑制衰老小鼠脂肪中产生miR-190,检测代谢表征。结果:衰老进程中,脂肪组织中miR-190表达升高;衰老细胞模型中,miR-190的表达同样上调;脂肪细胞中过表达miR-190会导致产热基因的表达降低;产热关键基因PRDM16是miR-190的直接靶基因;抑制衰老小鼠中miR-190的产生,可以有助于改善衰老小鼠的能量代谢稳态。结论:miR-190可能通过靶向PRDM16影响脂肪组织产热,继而影响能量代谢稳态,加速衰老。 展开更多
关键词 mir-190 衰老 脂肪组织 产热 能量代谢 PRDM16
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