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miR-15a-5p抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖与迁移 被引量:6
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作者 钱建升 李宇 窦建卫 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期344-348,352,共6页
目的:观察高表达的miR-15a-5p对人肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响。方法:化学合成加入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的miR-15a-5p寡聚核苷酸,并进行测序确认;利用pcDNA6.2-GW/EmGFP质粒构建miR-15a-5p真核表达载体,瞬时转染SMMC-7... 目的:观察高表达的miR-15a-5p对人肝细胞癌SMMC-7721细胞增殖和迁移能力的影响。方法:化学合成加入EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点的miR-15a-5p寡聚核苷酸,并进行测序确认;利用pcDNA6.2-GW/EmGFP质粒构建miR-15a-5p真核表达载体,瞬时转染SMMC-7721细胞,实时荧光定量PCR检测miR-15a-5p的表达;CCK-8法和台盼蓝染色活细胞计数检测SMMC-7721细胞的增殖能力,划痕实验检测细胞迁移能力的变化。结果:设计的miR-15a-5p序列与寡核苷酸测序结果匹配达100%;真核表达质粒瞬转后人肝癌SMMC-7721细胞miR-15a-5p的表达量与对照组相比显著增加(P<0.05);miR-15a-5p高表达SMMC-7721细胞的增殖能力与对照组相比均显著下降(P<0.05);miR-15a-5p高表达组细胞迁移速度低于对照组。结论:高表达的miR-15a-5p可抑制人肝癌SMMC-7721细胞的增殖和迁移能力。 展开更多
关键词 mir-15a-5p 肝细胞癌 细胞增殖 细胞迁移
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基于miR-15a-5p/P53信号通路探讨EMT与肺癌细胞阿霉素耐药的关系 被引量:3
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作者 魏东 辛运超 +3 位作者 刘博 容宇 李彦明 郝雁冰 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第7期1127-1133,共7页
目的探讨miR-15a-5p在肺癌细胞对阿霉素(DOX)耐药中的作用,并阐明其与DOX耐药之间的功能和机制联系。方法分别采用si-miR-15a-5p、miR-15a-5p模拟物转染A549、A549/DOX抗性细胞(A549/D)。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,... 目的探讨miR-15a-5p在肺癌细胞对阿霉素(DOX)耐药中的作用,并阐明其与DOX耐药之间的功能和机制联系。方法分别采用si-miR-15a-5p、miR-15a-5p模拟物转染A549、A549/DOX抗性细胞(A549/D)。采用MTT法测定细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western blots检测上皮间充质转化(EMT)相关蛋白及P53蛋白表达,qRT-PCR检测miR-15a-5p表达。通过生物信息学预测与双荧光素酶报告子分析miR-15a-5p潜在靶基因。采用A549/D细胞构建裸鼠移植瘤模型,分析miR-15a-5p过表达促进DOX的体内抗肿瘤作用。结果MTT分析结果显示,miR-15a-5p的敲低提高了A549细胞的细胞活力(IC 50值:8.86±0.32μmol/L),miR-15a-5p的过表达降低了A549/D细胞的细胞活力(IC 50值:1.92±0.11μmol/L)。并且在A549细胞中阻断miR-15a-5p减少凋亡(P<0.001),在A549/D细胞中增加miR-15a-5p表达促进凋亡(P<0.001)。Western blot分析显示转染si-miR-15a-5p逆转了DOX调节EMT的作用。生物信息学预测证明P53和miR-15a-5p之间存在特异性结合位点。在A549细胞中阻断miR-15a-5p减少P53蛋白表达(P<0.001),在A549/D细胞中增加miR-15a-5p表达增加P53蛋白表达(P<0.01)。体内实验显示,miR-15a-5p agomir联合DOX可降低肿瘤体积和N-cadherin的表达水平,同时增强了P53、E-cadherin蛋白的表达水平。结论miR-15a-5p过表达可能通过靶向P53抑制EMT过程,增强肺癌细胞对DOX治疗的敏感性。 展开更多
关键词 mir-15a-5p p53 上皮间充质转化 非小细胞性肺癌 耐药
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lncRNA FGD5-AS1靶向miR-15a-5p调控LPS诱导的脓毒症细胞损伤 被引量:2
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作者 王春枝 武百强 +4 位作者 吴威 赵艳庚 张娜 唐海霞 杨冬松 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第6期666-670,675,共6页
目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a... 目的:探讨长链非编码RNA FGD5-AS1(lncRNA FGD5-AS1)对LPS诱导的脓毒症细胞损伤的影响及分子机制。方法:500 ng/ml脂多糖(LPS)诱导THP-1细胞损伤。THP-1细胞分为对照组、LPS组、pcDNA组、pcDNA-FGD5-AS1组、anti-miR-NC组、anti-miR-15a-5p组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-NC组、pcDNA-FGD5-AS1+miR-15a-5p组。RT-qPCR检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p表达;流式细胞术检测细胞凋亡;Western blot法检测蛋白表达;ELISA检测IL-6、IL-1β、TNF-α水平。双荧光素酶报告实验检测lncRNA FGD5-AS1和miR-15a-5p的靶向关系。结果:与对照组相比,经LPS诱导的THP-1细胞中,lncRNA FGD5-AS1表达降低,miR-15a-5p表达升高(P<0.05)。过表达lncRNA FGD5-AS1和下调miR-15a-5p均能够显著降低细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α表达(P<0.05)。lncRNA FGD5-AS1靶向调控miR-15a-5p表达,上调miR-15a-5p能逆转过表达lncRNA FGD5-AS1对LPS诱导的THP-1细胞凋亡以及炎症细胞因子IL-6、IL-1β、TNF-α的影响(P<0.05)。结论:过表达lncRNA FGD5-AS1通过靶向下调miR-15a-5p表达减轻LPS诱导的THP-1细胞损伤。 展开更多
关键词 lncRNA FGD5-AS1 mir-15a-5p LpS THp-1 细胞损伤
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LncRNA MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA/B介导结直肠癌细胞免疫逃逸
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作者 李鸷 吴迪 +2 位作者 田飞 刘洁 谢兴明 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第6期1217-1221,1127,共6页
目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋... 目的:探究长链非编码RNA母系表达基因8(LncRNA MEG8)通过靶向miR-15a-5p调控MHCⅠ类相关蛋白A/B(MICA/B)介导的结直肠癌(CRC)细胞免疫逃逸机制。方法:RT-qPCR、Western blot检测CRC组织和细胞系MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平;双荧光素酶实验验证MEG8对miR-15a-5p的调控关系;采用脂质体转染法将NC、MEG8、miR-NC、miR-15a-5p分别或共转染至SW480、SW620细胞,记为NC组、MEG8组、MEG8+miR-NC组、MEG8+miR-15a-5p组;将NK细胞分别与SW480、SW620细胞共培养;ELISA检测共培养液中TNF-α、IFN-γ水平;CCK-8、EdU染色、Transwell实验检测细胞增殖、迁移和侵袭能力;RT-qPCR、Western blot检测细胞MEG8、miR-15a-5p、MICA、MICB、NKG2D蛋白水平。结果:与癌旁组织或正常结肠上皮细胞相比,CRC组织和细胞系中MEG8、MICA、MICB、NKG2D mRNA和蛋白水平降低,miR-15a-5p水平升高(P<0.05)。MEG8靶向调控miR-15a-5p。共培养体系中,与NC组相比,MEG8组细胞MICA、MICB、NKG2D蛋白水平、共培养上清液中TNF-α、IFN-γ水平明显升高,培养1 d、2 d、3 d后,OD值、EdU阳性率、迁移和侵袭细胞数明显降低(P<0.05);过表达miR-15a-5p能部分逆转过表达MEG8对细胞MICA、MICB、NKG2D、TNF-α、IFN-γ水平和增殖、侵袭转移能力的影响(P<0.05)。结论:MEG8通过靶向miR-15a-5p调控MICA、MICB表达,促进NK细胞活性,抑制CRC细胞免疫逃逸。 展开更多
关键词 长链非编码RNA母系表达基因8 mir-15a-5p 结直肠癌 免疫逃逸 MHCⅠ类相关蛋白A/B
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LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p负向调控子宫颈癌细胞的增殖和侵袭 被引量:3
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作者 卢豪 占稳稳 +5 位作者 熊国平 吴汝芳 胡晓继 韩迎燕 李莉 张庆华 《临床与实验病理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期514-519,共6页
目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p调控子宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测SLC16A1-AS1在子宫颈癌组织、癌旁组织、人正常子宫颈上皮细胞(H8)及子宫颈癌细胞株(HeLa、HCC94、SiHa、C33A)中的表达水... 目的探讨LncRNA SLC16A1-AS1通过靶向miR-15a-5p调控子宫颈癌细胞增殖和侵袭的作用机制。方法采用qRT-PCR法检测SLC16A1-AS1在子宫颈癌组织、癌旁组织、人正常子宫颈上皮细胞(H8)及子宫颈癌细胞株(HeLa、HCC94、SiHa、C33A)中的表达水平。选择SLC16A1-AS1表达最少的子宫颈癌细胞株,分别转染阴性质粒和SLC16A1-AS1过表达质粒,标记为NC组和SLC16A1-AS1组。应用MTT法和Transwell实验分别检测过表达SLC16A1-AS1对子宫颈癌细胞增殖和侵袭能力的影响。生物信息学网站预测及双荧光素酶报告基因实验,验证SLC16A1-AS1与靶基因的靶向关系。qRT-PCR和Western blot法检测靶基因及相关蛋白的表达。结果子宫颈癌组织中SLC16A1-AS1的表达水平显著低于癌旁组织(P<0.01)。与H8细胞相比,HeLa、HCC94、SiHa、C33A细胞中SLC16A1-AS1的表达水平降低(P<0.05)。与NC组相比,过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞增殖能力降低(P<0.05),过表达SLC16A1-AS1的C33A细胞侵袭数下降(P<0.01)。生物信息学网站预测显示,SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p有特异性结合位点。双荧光素酶报告基因实验结果证实SLC16A1-AS1可与miR-15a-5p直接结合(P<0.01)。SLC16A1-AS1可负向调控miR-15a-5p的表达(P<0.01)。与NC组相比,SLC16A1-AS1组细胞增殖表型蛋白(如PCNA、Ki-67)和细胞侵袭表型蛋白(如N-cadherin、Slug)表达均降低。结论SLC16A1-AS1在子宫颈癌中低表达,SLC16A1-AS1通过靶向下调miR-15a-5p的表达,抑制子宫颈癌细胞C33A的增殖和侵袭。 展开更多
关键词 子宫颈肿瘤 细胞增殖 细胞侵袭 SLC16A1-AS1 mir-15a-5p
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沙格列汀通过miR-15a-5p/INSR轴缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制研究 被引量:6
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作者 吴美芬 潘海燕 +2 位作者 黄兴丽 刘裕晓 武革 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2021年第7期1082-1088,共7页
目的探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(INSR)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制。方法以INSR为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向INSR的miRNA并取交集。随后荧光素酶实验... 目的探讨沙格列汀通过miR-15a-5p/胰岛素受体(INSR)轴缓解2型糖尿病大鼠胰岛素抵抗的机制。方法以INSR为常用转录本ENST00000341500为输入,分别获取TargetScan、miRDB和miRWalk数据库中可能靶向INSR的miRNA并取交集。随后荧光素酶实验验证靶向关系。构建胰岛素抵抗2型糖尿病(IR-T2DM)模型。随后对IR-T2DM大鼠进行阴性对照、miR-15a-5p mimic、miR-15a-5p inhibitor转染或沙格列汀处理,8周后处死大鼠获取股四头肌及外周血。对各组大鼠血压、血糖、脂代谢相关指标进行测定,同时测定稳态模型评估(HOMA)胰岛素抵抗指数(IRI)和胰岛素敏感指数(ISI)。定量-PCR检测各组大鼠骨骼肌中交集miRNA、INSR、IRS-1和GLUT4 mRNA的表达。Western blot检测各组大鼠骨骼肌中INSR、p-IRS-1和GLUT4蛋白表达。结果miR-15a-5p被选定为INSR的靶向miRNA。与阴性对照组相比,IR-T2DM大鼠经miR-15a-5p inhibitor或沙格列汀处理后骨骼肌中INSR、IRS-1和GLUT4表达、外周血中HDL-C浓度、BW、ISI升高(均P<0.05),但外周血中糖化血红蛋白(HbA1c)、三酰甘油(TG)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)浓度、收缩压(SP)、舒张压(DP)和IRI在上述组中降低(均P<0.05)。上述指标的趋势在miR-15a-5p mimic组中与miR-15a-5p inhibitor及沙格列汀组完全相反(均P<0.05)。此外,与沙格列汀或miR-15a-5p inhibitor单独处理比较,两者联合处理能更有效地缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗(均P<0.05)。结论沙格列汀能通过下调miR-15a-5p来上调INSR表达从而缓解糖尿病大鼠胰岛素抵抗。 展开更多
关键词 沙格列汀 mir-15a-5p INSR 2型糖尿病 胰岛素抵抗
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lncRNA FGD5-AS1调节miR-133a-3p/SPAG5轴对胃癌细胞迁移和侵袭的影响 被引量:1
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作者 陈远航 何朗 +2 位作者 谭卯 徐毅 李霞 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第5期401-406,共6页
目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节miR-133a-3p/SPAG5轴对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。方法用实时定量PCR检测胃癌组织和邻近非肿瘤组织、正常人胃上皮细胞系GES-1及胃癌细胞系(MKN-28和NCI-N87、HGC-27、AGS)中FGD5-AS1、miR-1... 目的探讨长链非编码RNA(lncRNA)FGD5-AS1调节miR-133a-3p/SPAG5轴对胃癌细胞迁移和侵袭的影响。方法用实时定量PCR检测胃癌组织和邻近非肿瘤组织、正常人胃上皮细胞系GES-1及胃癌细胞系(MKN-28和NCI-N87、HGC-27、AGS)中FGD5-AS1、miR-133a-3p、SPAG5 mRNA表达水平;用CCK-8法、EdU染色检测细胞增殖;用Transwell实验检测细胞侵袭;用划痕实验检测细胞迁移能力;用Western blotting检测增殖蛋白Ki-67、SPAG5、迁移侵袭增强子因子1(MIEN1)、基质金属蛋白酶(MMP)-9蛋白表达水平;用双萤光素酶实验验证miR-133a-3p与FGD5-AS1、SPAG5的关系。结果在胃癌组织及胃癌细胞系中,FGD5-AS1、SPAG5 mRNA表达水平明显升高,miR-133a-3p则明显降低(P<0.05)。干扰FGD5-AS1可上调miR-133a-3p表达,下调SPAG5表达,抑制MKN-28细胞恶性行为;抑制miR-133a-3p表达逆转了干扰FGD5-AS1对MKN-28细胞恶性行为的作用。结论干扰lnc-RNA FGD5-AS1通过上调miR-133a-3p/SPAG5轴抑制胃癌细胞迁移和侵袭。 展开更多
关键词 长链非编码RNA FGD5-AS1 mir-133a-3p/SpAG5 胃癌 迁移 侵袭
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益气养阴化浊通络方通过调控miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导 的线粒体自噬减轻糖尿病肾病小鼠的足细胞损伤 被引量:1
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作者 郭克磊 李颖利 +6 位作者 宣晨光 侯紫君 叶松山 李林运 陈丽平 韩立 卞华 《南方医科大学学报》 北大核心 2025年第1期27-34,共8页
目的探讨益气养阴化浊通络方(YYHT)对高糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的保护作用及潜在机制。方法大鼠分别灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理盐水1周制备低、中、高浓度含药血清和空白血清。体外培养MPC5,分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+... 目的探讨益气养阴化浊通络方(YYHT)对高糖诱导小鼠肾足细胞(MPC5)损伤的保护作用及潜在机制。方法大鼠分别灌胃19、38、76 g/kg YYHT及生理盐水1周制备低、中、高浓度含药血清和空白血清。体外培养MPC5,分为对照组(5.5 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、模型组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-inhibitor-NC+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+NC+高浓度含药血清)、miR-21a-5p抑制剂组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pinhibitor+空白血清)。qRT-PCR检测miR-21a-5p表达及FoxO1、PINK1、Parkin的mRNA表达,Western blotting检测足细胞标志蛋白(Nephrin、Podocin)及FoxO1、PINK1、Parkin蛋白表达,MDC染色检测自噬荧光。将MPC5分为阴性对照组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-NC+空白血清)、miR-21a-5p-mimic组(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+空白血清)、YYHT-L(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+低浓度含药血清)、YYHT-M(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5pmimic+中浓度含药血清)、YYHT-H(30 mmol/L D-葡萄糖+miR-21a-5p-mimic+高浓度含药血清),荧光素酶报告基因实验检测miR-21a-5p/FoxO1转录调控,RIP检测miR-21a-5p与靶基因FoxO1结合。结果与对照组相比,模型组miR-21a-5p表达升高(P<0.05),FoxO1、PINK1、Parkin mRNA表达降低(P<0.05),FoxO1、PINK1、Parkin、Nephrin、Podocin蛋白表达及自噬荧光降低(P<0.05);与模型组相比,不同剂量YYHT含药血清及miR-21a-5p-inhibitor促进Nephrin及Podocin蛋白表达(P<0.05),抑制miR-21a-5p表达(P<0.05),增强FoxO1、PINK1、Parkin的mRNA和蛋白表达及自噬荧光(P<0.05)。与miR-21a-5p-NC组相比,miR-21a-5p-mimic组抑制FoxO1转录(P<0.05),促进miR-21a-5p与FoxO1的结合(P<0.05);与miR-21a-5p组相比,YYHT含药血清组促进FoxO1转录(P<0.05),抑制miR-21a-5p与FoxO1的结合(P<0.05)。结论益气养阴化浊通络方可能通过调节miR-21a-5p/FoxO1/PINK1介导的线粒体自噬,减轻高糖诱导的小鼠肾足细胞损伤。 展开更多
关键词 糖尿病肾病 益气养阴化浊通络方 线粒体自噬 足细胞损伤 mir-21a-5p/FoxO1/pINK1
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miR-15b-5p通过USP9X影响PIK3CA/AKT1通路缓解哮喘气道炎症
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作者 周宇洋 王知广 +4 位作者 朴艺花 韩雪 宋艺兰 延光海 朴红梅 《细胞与分子免疫学杂志》 北大核心 2025年第3期193-203,共11页
目的 研究miR-15b-5p是否能通过负调控泛素特异性肽酶9X(USP9X)下调磷脂酰肌醇4, 5-二磷酸3-激酶催化亚基α/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(PIK3CA/AKT1)通路的表达,从而缓解哮喘气道炎症。方法 通过在线数据库(miRWalk)预测USP9X可能是miR-15b... 目的 研究miR-15b-5p是否能通过负调控泛素特异性肽酶9X(USP9X)下调磷脂酰肌醇4, 5-二磷酸3-激酶催化亚基α/AKT丝氨酸/苏氨酸激酶1(PIK3CA/AKT1)通路的表达,从而缓解哮喘气道炎症。方法 通过在线数据库(miRWalk)预测USP9X可能是miR-15b-5p的直接靶点,并进行了荧光素酶报告基因检测验证。通过免疫共沉淀(CO-IP)验证了USP9X与PIK3CA之间能否直接结合以及USP9X和其小分子抑制剂WP1130在PIK3CA的去泛素化中作用。取C57小鼠,随机分为Control组、 OVA组、 OVA联合NC组以及miR-15b-5p agomir治疗组,每组10只。BEAS-2B细胞用白细胞介素13(IL-13)诱导,并用miR-15b-5p mimic治疗。进行了HE、 Masson、 PAS、免疫组织化学、免疫荧光染色及流式细胞术、 Western blot法、实时定量PCR检测。结果 发现给予miR-15b-5p agomir和mimic后能够减少支气管周围炎性细胞,改善气道炎症,并且miR-15b-5p能靶向负调控USP9X。USP9X能够与PIK3CA直接结合,以蛋白酶体依赖性方式调节PIK3CA水平,并且USP9X对K29连接的PIK3CA蛋白起去泛素化作用,下调USP9X会使PIK3CA的泛素化水平增加。USP9X的小分子抑制剂WP1130与敲低USP9X作用一致,均能够增加PIK3CA的泛素化水平,使PIK3CA的蛋白水平降低。结论 miR-15b-5p/USP9X/PIK3CA/AKT1信号通路可能为哮喘提供潜在的治疗靶点。 展开更多
关键词 mir-15b-5p USp9X pIK3CA AKT1 泛素化 哮喘
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精浆外泌体miR-26a-5p靶向PTEN调控特发性畸形精子症的分子机制及诊断价值
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作者 刘春辉 吴瑞鹏 +2 位作者 王志强 陕文生 李少君 《实用医学杂志》 北大核心 2025年第20期3256-3266,共11页
目的探讨精浆外泌体miR-26a-5p及其靶基因在特发性畸形精子症中的作用机制,揭示其调控精子形态异常的通路,为临床诊断和靶向干预提供依据。方法采用病例对照研究设计,纳入154例男性受试者(畸形精子症组TZS 84例,正常对照组NC 70例)。通... 目的探讨精浆外泌体miR-26a-5p及其靶基因在特发性畸形精子症中的作用机制,揭示其调控精子形态异常的通路,为临床诊断和靶向干预提供依据。方法采用病例对照研究设计,纳入154例男性受试者(畸形精子症组TZS 84例,正常对照组NC 70例)。通过精浆外泌体分离,筛选差异表达miRNA,分析预测靶基因及信号通路。利用双荧光素酶报告基因实验验证miR-26a-5p与PTEN的直接结合作用,通过实时荧光定量PCR、Western blot检测miRNA及蛋白表达水平。采用Spearman相关性分析评估miR-26a-5p、PTEN与精子形态参数的关系,并通过ROC曲线分析诊断效能。结果精浆外泌体miRNA测序共鉴定出11种差异表达miRNA,其中miR-26a-5p在TZS组显著上调(P<0.05),且与TZS组的正常形态精子占比呈负相关(r=-0.762,P<0.05)。PTEN为miR-26a-5p的直接靶基因,其表达在TZS组显著降低(P<0.05),并与TZS组的精子正常形态率呈正相关(r=0.821,P<0.05)。miR-26a-5p与PTEN呈负相关(r=-0.878,P<0.05)。双荧光素酶实验证实miR-26a-5p可特异性抑制PTEN 3'UTR活性(荧光素酶活性降低45%,P<0.05)。功能富集分析显示,miR-26a-5p-PTEN轴通过调控PI3K/AKT/mTOR、p53、Wnt/β-catenin及NF-κB通路,加剧氧化应激、DNA损伤及精子细胞分裂异常。ROC曲线分析表明,miR-26a-5p与PTEN对畸形精子症的诊断效能分别为AUCROC=0.785(灵敏度78.9%,特异度71.3%)和AUCROC=0.754(灵敏度73.3%,特异度75.1%)。结论miR-26a-5p通过靶向抑制PTEN,激活PI3K/AKT/mTOR等通路并抑制DNA修复功能,导致氧化应激积累及精子形态异常。精浆外泌体miR-26a-5p高表达与PTEN低表达的组合模式显示出对特发性畸形精子症的诊断潜力,其分子机制为标志物开发提供了理论依据。靶向沉默miR-26a-5p或联合AKT/mTOR抑制剂及抗氧化治疗,可能成为改善精子形态的新策略。 展开更多
关键词 精浆外泌体 畸形精子症 mir-26a-5p pTEN 分子机制
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中等强度运动诱导海马外泌体miR-126a-5p改善2型糖尿病小鼠认知功能障碍
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作者 赖思洁 马亦潇 +2 位作者 孙建婷 康正鸿 柳华 《中国生物化学与分子生物学报》 北大核心 2025年第9期1320-1331,共12页
2型糖尿病相关认知功能障碍(diabetes-related cognitive impairment,DCI)是糖尿病的重要并发症,而运动在缓解DCI中起重要作用,但其作用机制尚不清晰。本研究旨在探讨外泌体miR-126a-5p在运动改善DCI中的作用及其机制。将24只16周龄雄性... 2型糖尿病相关认知功能障碍(diabetes-related cognitive impairment,DCI)是糖尿病的重要并发症,而运动在缓解DCI中起重要作用,但其作用机制尚不清晰。本研究旨在探讨外泌体miR-126a-5p在运动改善DCI中的作用及其机制。将24只16周龄雄性db/db小鼠按照随机数字表法分为糖尿病组(n=12;DM)和运动干预组(n=12;DE)。对照组为同周龄雄性m/m小鼠(n=12;CON)。DE组进行为期8周中等强度跑台训练(10 m/min,每周5 d)。MWM实验发现,与CON组相比,DM组小鼠逃避潜伏期延长(P<0.01),游泳速度和目标象限时间下降(P<0.001),海马组织及其外泌体miR-126a-5p表达水平下降(P<0.001)。运动干预后,DE组小鼠逃避潜伏期减少(P<0.05),游泳速度和目标象限时间均显著提高(P<0.05),同时海马组织及其外泌体miR-126a-5p表达升高(P<0.001)。形态学染色发现DM组小鼠较于CON组,在CA1、CA3区海马神经元的数量和NeuN荧光强度表达下降以及胶质细胞的表达上升(P<0.05),而DE组小鼠则提高神经元的数量和NeuN荧光强度(P<0.05)。Western印迹结果显示,与CON组相比,DM组海马组织中β淀粉样蛋白(amyloidβ,Aβ)、靶蛋白高迁移率族蛋白B1(protein high-mobility group box 1,Hmgb1)、蛋白核因子κB(nuclear factor kappa-B,NF-κB)、肿瘤坏死因子-α(tumour necrosis factor-alpha,TNF-α)和白细胞介素-1β(interleukin-1 beta,IL-1β)的表达均显著上调(P<0.05),运动干预后DM组表达水平均下降(P<0.05)。在体外细胞实验中,过表达miR-126a-5p的外泌体可显著降低HG诱导的HT22细胞表达淀粉样前体蛋白(amyloid precursor protein,APP)、NF-κB、Hmgb1和上清液TNF-α、IL-1β的含量(P<0.05)。相反,抑制外泌体中miR-126a-5p表达则增加APP、Hmgb1、NF-κB、TNF-α、IL-1β水平(P<0.05)。综上所述,8周跑台改善db/db小鼠的认知功能,其机制可能与EXs-miR-126/HMGB1/NF-κB通路减轻海马组织炎症反应有关。 展开更多
关键词 有氧运动 2型糖尿病 mir-126a-5p 外泌体 炎症 海马组织
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miR-26a-5p通过靶向PTEN基因调控山羊卵巢颗粒细胞的增殖
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作者 王尧悦 史倩倩 +4 位作者 罗琪 高林娜 吴浩 张建丽 丁强 《中国畜牧兽医》 北大核心 2025年第8期3715-3725,共11页
[目的]颗粒细胞的增殖受miRNA等多种因素的调控,其中,miR-26a-5p在山羊生长卵泡中显著富集,或与卵泡生长发育相关。试验旨在研究miR-26a-5p在山羊颗粒细胞增殖作用机制,以期丰富卵泡发育中分子调控网络。[方法]采用实时荧光定量PCR分析m... [目的]颗粒细胞的增殖受miRNA等多种因素的调控,其中,miR-26a-5p在山羊生长卵泡中显著富集,或与卵泡生长发育相关。试验旨在研究miR-26a-5p在山羊颗粒细胞增殖作用机制,以期丰富卵泡发育中分子调控网络。[方法]采用实时荧光定量PCR分析miR-26a-5p在不同大小山羊卵泡中的表达情况;体外培养鉴定卵巢颗粒细胞,并在颗粒细胞中分别过表达和抑制miR-26a-5p。利用EdU增殖和MTT试验检测颗粒细胞转染后的增殖情况;利用双荧光素酶报告系统和Western blotting验证miR-26a-5p与靶基因PTEN间的互作关系。通过Western blotting分析颗粒细胞过表达或干扰miR-26a-5p表达后PI3K/Akt信号通路中相关蛋白的表达情况。[结果]在不同大小的山羊卵泡中均检测到miR-26a-5p的表达,miR-26a-5p在卵母细胞中也有表达,其中,与其他直径卵泡(<2、4~5和>5 mm)的颗粒细胞相比,miR-26a-5p在中小卵泡(直径2~3 mm)颗粒细胞中显著富集(P<0.05)。在体外培养的颗粒细胞中,过表达miR-26a-5p组增殖细胞比例显著高于NC mimics组(P<0.05);转染miR-26a-5p inhibitor的颗粒细胞与转染NC inhibitor相比增殖比例显著减少(P<0.05)。双荧光素酶报告试验结果显示,与突变组相比,miR-26a-5p靶向PTEN基因3'-UTR的种子序列显著降低了荧光素酶活性(P<0.05)。Western blotting结果显示,与转染NC mimics组相比,颗粒细胞中过表达miR-26a-5p可显著降低PTEN蛋白的表达(P<0.05),过表达miR-26a-5p 96 h仍可检测到磷酸化蛋白p-AKT的表达上调及p-AKT/AKT比例增加(P<0.05)。[结论]卵巢颗粒细胞中miR-26a-5p通过直接靶向抑制PTEN基因的表达来活化AKT蛋白,激活PI3K/Akt信号通路,促进颗粒细胞增殖。 展开更多
关键词 mir-26a-5p pTEN基因 颗粒细胞增殖 pI3K/Λkt信号通路
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血清miR-196b-5p和miR-199a-3p水平对非小细胞肺癌的诊断价值
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作者 张福全 曹津铭 吴雪杰 《华中科技大学学报(医学版)》 北大核心 2025年第5期702-709,725,共9页
目的探究血清miR-196b-5p和miR-199a-3p水平对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的诊断价值。方法回顾性选取2022年1月至2024年3月于南通市第一人民医院就诊的202例NSCLC患者作为研究对象,另选取同期健康体检者195例作为... 目的探究血清miR-196b-5p和miR-199a-3p水平对非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)的诊断价值。方法回顾性选取2022年1月至2024年3月于南通市第一人民医院就诊的202例NSCLC患者作为研究对象,另选取同期健康体检者195例作为对照。收集所有受试者一般基线资料及NSCLC患者临床病理资料。采用qRT-PCR定量分析血清miR-196b-5p和miR-199a-3p表达水平。采用Pearson检验分析miR-196b-5p、miR-199a-3p表达水平与细胞角蛋白19片段抗原21-1(cytokeratin 19 fragment antigen 21-1,Cyfra21-1)浓度的相关性。根据miR-196b-5p和miR-199a-3p表达水平的均值将NSCLC患者分为高、低表达组,分析不同组别患者的临床基线资料与病理特征的差异。绘制ROC曲线分析血清Cyfra21-1、miR-196b-5p、miR-199a-3p以及后两者联合对NSCLC患者的诊断效能。结果与对照组相比,NSCLC患者血清miR-196b-5p表达水平升高,miR-199a-3p表达水平降低;与Ⅰ/Ⅱ期患者相比,Ⅲ/Ⅳ期患者血清中miR-196b-5p相对表达水平明显升高,miR-199a-3p相对表达水平明显降低(均P<0.01)。NSCLC患者血清中miR-196b-5p水平与Cyfra21-1水平显著正相关,miR-199a-3p水平与Cyfra21-1水平显著负相关(均P<0.01)。miR-196b-5p、miR-199a-3p表达差异与NSCLC患者病理分期、肿瘤大小、Cyfra21-1水平及淋巴结转移等相关(均P<0.05)。血清miR-196b-5p水平诊断NSCLC的AUC为0.882(灵敏度为75.25%,特异度为95.38%),血清miR-199a-3p水平诊断NSCLC的AUC为0.857(灵敏度为68.32%,特异度为88.21%);传统生物标志物Cyfra21-1诊断NSCLC的AUC为0.818(灵敏度为63.86%,特异度为87.18%);血清miR-196b-5p和miR-199a-3p联合检测对早期(Ⅰ/Ⅱ期)NSCLC患者的诊断效能显著高于血清Cyfra21-1(P<0.01)、miR-196b-5p(P<0.01)、miR-199a-3p(P<0.01)单独检测。结论NSCLC患者血清miR-196b-5p表达水平显著升高,miR-199a-3p表达水平降低,二者联合检测对NSCLC具有较高的诊断效能。 展开更多
关键词 非小细胞肺癌 mir-196b-5p mir-199a-3p 诊断
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miR-193a-5p在脂多糖诱导的奶牛乳腺上皮细胞炎性反应中的作用
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作者 李宇航 虎喜敏 +2 位作者 罗仍卓么 王正兴 王兴平 《华南农业大学学报》 北大核心 2025年第6期872-882,共11页
【目的】本研究通过构建脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)炎性反应模型,旨在探究miR-193a-5p对奶牛乳腺炎的作用。【方法】检测LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应模型中miR-193a-5p的表达水平。通过在MAC-T细胞中过表达miR-193a-5p... 【目的】本研究通过构建脂多糖(LPS)诱导的奶牛乳腺上皮细胞系(MAC-T)炎性反应模型,旨在探究miR-193a-5p对奶牛乳腺炎的作用。【方法】检测LPS诱导的MAC-T细胞炎性反应模型中miR-193a-5p的表达水平。通过在MAC-T细胞中过表达miR-193a-5p,使用qPCR、CCK-8和EdU等技术,检测炎症因子、增殖和凋亡相关基因的表达变化,以及细胞活力和增殖情况。利用生物信息学方法预测miR-193a-5p的候选靶基因,并通过GO和KEGG分析揭示其潜在的作用机制。【结果】在LPS诱导MAC-T细胞3、6和12 h时,miR-193a-5p表达水平显著下调(P<0.01)。过表达miR-193a-5p后能够促进炎症细胞因子(IL-1β和IL-8)和凋亡基因(CASP9)的表达,抑制增殖基因(BCL2和PCNA)的表达,同时抑制细胞活力和增殖。共预测到44个miR-193a-5p的候选靶基因,这些基因富集在真核生物核糖体发生、黏附连接、NF-κB信号通路、Wnt信号通路和阿尔兹海默症等信号通路,主要参与细胞分化的调控和细胞因子生成的调控等生物学过程。【结论】miR-193a-5p在LPS诱导的MAC-T细胞中表达下调,过表达miR-193a-5p可能通过NF-κB和Wnt信号通路促进炎症反应、抑制增殖并促进凋亡,表明其在奶牛乳腺炎发生中的潜在调控作用。 展开更多
关键词 奶牛 LpS 乳腺上皮细胞 mir-193a-5p 乳腺炎 炎性反应
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miR-181a-5p过表达慢病毒载体构建及其对OSCC细胞侵袭和迁移的影响
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作者 薛瑞 续国强 +3 位作者 杨钧婷 杨一言 吴学海 宋国华 《实用口腔医学杂志》 北大核心 2025年第2期193-199,共7页
目的:构建过表达miR-181a-5p的口腔鳞状细胞癌(OSCC)稳转细胞株,观察miR-181a-5p对OSCC细胞生物学行为的影响并探讨其潜在机制。方法:构建miR-181a-5p和对照慢病毒载体,分别转染CAL-27细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染miR-181a-5p的细胞株... 目的:构建过表达miR-181a-5p的口腔鳞状细胞癌(OSCC)稳转细胞株,观察miR-181a-5p对OSCC细胞生物学行为的影响并探讨其潜在机制。方法:构建miR-181a-5p和对照慢病毒载体,分别转染CAL-27细胞,嘌呤霉素筛选获得稳定转染miR-181a-5p的细胞株(OE)和对照细胞株(NC);运用激光共聚焦显微镜观察稳转细胞株荧光;qRT-PCR检测稳转株中miR-181a-5p和Bcl-2的表达、Western blot检测靶蛋白Bcl-2的表达;运用细胞划痕、Transwell实验和克隆形成实验检测稳转株的侵袭、迁移和增殖能力;使用qRT-PCR检测细胞侵袭和迁移关键因子的表达。结果:OE细胞中miR-181a-5p的表达量显著高于NC和未转染的空白对照组(Control)(P<0.01),OE组中Bcl-2的表达显著降低;同时,OE细胞的侵袭、迁移和增殖能力降低。此外,OE细胞中MMP2、MMP9、Vimentin和Ki67表达水平降低,而E-cadherin升高(P<0.01)。结论:miR-181a-5p过表达可显著抑制口腔癌的增殖、侵袭和迁移。 展开更多
关键词 mir-181a-5p 稳转细胞株 口腔癌 侵袭 迁移
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miR-10a-5p通过调控Apaf1逆转膀胱癌T24细胞顺铂耐药
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作者 张鹰 李鹏 +1 位作者 欧阳慧 刘嵩 《中国医科大学学报》 北大核心 2025年第5期448-454,共7页
目的探讨下调miR-10a-5p表达对人膀胱癌T24细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并阐明其分子机制。方法采用实时定量PCR检测人膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP及其亲本T24细胞中miR-10a-5p的表达水平。将T24/DDP细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-1... 目的探讨下调miR-10a-5p表达对人膀胱癌T24细胞顺铂(DDP)耐药的影响,并阐明其分子机制。方法采用实时定量PCR检测人膀胱癌DDP耐药细胞株T24/DDP及其亲本T24细胞中miR-10a-5p的表达水平。将T24/DDP细胞分为对照组、inhibitor NC组、miR-10a-5p inhibitor组、miR-10a-5p inhibitor+si-NC组和miR-10a-5p inhibitor+si-Apaf1组,分别给予不同浓度DDP处理24 h。用MTT法检测各组细胞增殖活性,并计算耐药指数;用流式细胞术检测各组细胞凋亡水平;用Western blotting检测各组细胞中Apaf1、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及胞质中细胞色素C(Cyt C)等蛋白的表达水平;用双萤光素酶报告基因实验验证miR-10a-5p与Apaf1的靶向结合关系。结果与亲本T24细胞比较,T24/DDP细胞中miR-10a-5p表达水平升高(P<0.05)。与inhibitor NC组比较,miR-10a-5p inhibitor组T24/DDP细胞对DDP的敏感性增强,耐药指数降低,凋亡水平升高,且细胞中Apaf1、cleaved caspase-9、cleaved caspase-3及胞质Cyt C等蛋白表达水平升高(均P<0.05)。与miR-10a-5p inhibitor+si-NC组比较,miR-10a-5p inhibitor+si-Apaf1组T24/DDP细胞对DDP敏感性降低,耐药指数升高,凋亡水平降低(均P<0.05)。双萤光素酶报告基因实验结果显示,Apaf1是miR-10a-5p下游靶基因。结论miR-10a-5p敲低可靶向上调Apaf1,从而逆转T24/DDP细胞对DDP的耐药性。 展开更多
关键词 膀胱癌 mir-10a-5p Apaf1 顺铂 耐药
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LINC01224、miR-193a-5p、ELMOD3 c.512A>G在感音神经性耳聋患者中的筛查分析
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作者 王喜悦 温馨 +2 位作者 周逸云 张彩虹 孙捷 《中华耳科学杂志》 北大核心 2025年第8期928-934,共7页
目的通过对感音神经性耳聋(sensorineural hearing loss,SNHL)患者外周血中LINC01224、miR-193a-5p的表达检测及ELMOD3 c.512A>G突变位点的筛查,分析LINC01224、miR-193a-5p、ELMOD3 c.512A>G与感音神经性耳聋疾病的相关性及其在... 目的通过对感音神经性耳聋(sensorineural hearing loss,SNHL)患者外周血中LINC01224、miR-193a-5p的表达检测及ELMOD3 c.512A>G突变位点的筛查,分析LINC01224、miR-193a-5p、ELMOD3 c.512A>G与感音神经性耳聋疾病的相关性及其在临床中的筛查意义.方法利用TargetScan、RNAInter和miRDB数据库预测可能调控ELMOD3的miRNA,运用韦恩图进行交集分析;结合starBase网站预测潜在的lncRNA、miRNA/ELMOD3通路;通过双荧光素酶报告实验验证预测的lncRNA、miRNA与ELMOD3的靶向结合关系;选取2023年1月至2024年1月中山大学附属第八医院耳鼻咽喉头颈外科收治的SNHL患者24例为感音神经性耳聋组(SNHL组),另选取听力正常志愿者12名为对照组(CON组).采用SYBR Green法实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测SNHL组及CON组外周血中预测的lncRNA、miRNA的表达水平,通过Sanger测序筛查ELMOD3 c.512A>G突变位点,以2-ΔΔCt法计算相对表达量并统计学分析其差异性.结果综合3个数据库结果分析,鉴定出31个ELMOD3相关高置信度miRNA,结合starBase网站预测结果及既往研究基础筛选LINC01224、miR-193a-5p为核心分子;双荧光素酶报告实验分别验证LINC01224、ELMOD3与miR-193a-5p存在靶向结合关系;SNHL组LINC01224表达显著高于CON组(P<0.001);miR-193a-5p表达显著下调(P<0.0001),SNHL组和CON组中均未检测出ELMOD3 c.512A>G突变位点.结论生物信息学网站预测LINC01224、miR-193a-5p可能是ELMOD3上游调控基因;在SNHL患者及听力正常志愿者外周血中LINC01224、miR-193a-5p的表达具有显著差异性(LINC01224↑/miR-193a-5p↓),提示其表达可能与SNHL的发病相关,有进一步研究二者作为诊断SNHL血清标志物的价值;本研究SNHL患者中均未检测到ELMOD3 c.512A>G突变位点,需进一步扩大样本量及ELMOD3基因全外显子检测新的突变位点,验证其是否作为感音神经性耳聋患者的热点基因及位点. 展开更多
关键词 感音神经性耳聋 ELMOD3 LINC01224 mir-193a-5p
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miR-518a-5p/HDAC6轴参与卵巢癌SKOV3细胞DNA氧化损伤的作用机制
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作者 朱玲 蔡伟莉 +3 位作者 刘超 许国莹 张苗 叶耘峰 《中国比较医学杂志》 北大核心 2025年第3期71-81,共11页
目的 探讨miR-518a-5p/组蛋白去乙酰酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)轴参与卵巢癌(ovarian cancer, OC)SKOV3细胞DNA氧化损伤的作用机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测OC组织和不同癌细胞(A2780、SKOV3、CAOV3)中miR-518a... 目的 探讨miR-518a-5p/组蛋白去乙酰酶6(histone deacetylase 6,HDAC6)轴参与卵巢癌(ovarian cancer, OC)SKOV3细胞DNA氧化损伤的作用机制。方法 实时荧光定量逆转录PCR(qRT-PCR)检测OC组织和不同癌细胞(A2780、SKOV3、CAOV3)中miR-518a-5p、HDAC6 mRNA表达,将SKOV3细胞分为Control组、miR-NC组、miR-518a-5p mimics组、miR-518a-5p mimics+pcDNA-NC组、miR-518a-5p mimics+pc-HDAC6组。利用平板克隆与Hoechst33258染色分析细胞增殖与凋亡情况;免疫荧光法检测磷酸化组蛋白H2AX(phosphorylated histone H2AX,γ-H2AX)表达;流式细胞仪分析活性氧(reactive oxygen species, ROS)水平;Western blot法分析HDAC6、Bcl-2相关X蛋白(Bcl-2-associated X protein, Bax)、B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2,Bcl-2)表达;双荧光素酶分析miR-518a-5p与HDAC6的调节关系。通过异种移植肿瘤模型研究miR-518a-5p对OC细胞DNA氧化损伤的影响及机制。结果 OC组织和A2780、SKOV3、CAOV3细胞中miR-518a-5p表达降低,HDAC6表达升高(P<0.001);SKOV3细胞中miR-518a-5p表达最低,HDAC6表达最高,故选择SKOV3细胞进行后续实验。与miR-NC组比较,miR-518a-5p mimics组miR-518a-5p表达、细胞凋亡率、γ-H2AX阳性细胞数、ROS相对荧光强度、Bax表达升高,HDAC6 mRNA及蛋白表达、Bcl-2表达、集落形成数降低(P<0.001);与miR-518a-5p mimics+pcDNA-NC组比较,miR-518a-5p mimics+pc-HDAC6组HDAC6 mRNA及蛋白表达、集落形成数、Bcl-2表达升高,细胞凋亡率、γ-H2AX阳性细胞数、ROS相对荧光强度、Bax表达降低(P<0.001);HDAC6与miR-518a-5p存在靶向调控关系。体内实验结果显示,过表达miR-518a-5p降低移植瘤体积、重量及肿瘤组织HDAC6蛋白表达,增高γ-H2AX阳性表达(P<0.001);在过表达miR-518a-5p的基础上上调HDAC6表达后,移植瘤体积、重量及HDAC6蛋白表达升高,γ-H2AX阳性表达下降(P<0.05)。结论 OC组织和细胞中miR-518a-5p表达降低,HDAC6表达升高,过表达miR-518a-5p可通过抑制HDAC6表达,诱导SKOV3细胞DNA氧化损伤,进而抑制细胞增殖,促进细胞凋亡。 展开更多
关键词 mir-518a-5p 组蛋白去乙酰酶6 卵巢癌 DNA氧化损伤 细胞凋亡
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LncRNA MALAT1/miR-15b-5p调控Wnt/β-catenin通路对脂多糖诱导软骨细胞损伤的影响
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作者 赵志 刘梦鲲 +2 位作者 查日飞 张汀葆 王珵 《安徽医科大学学报》 北大核心 2025年第7期1231-1240,共10页
目的探讨骨关节炎中长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)/微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)调控Wnt/β-catenin通路在脂多糖(LPS)诱导软骨损伤中的分子机制。方法以5 mg/L LPS处理ATDC5细胞形成骨关节炎细胞损伤模型,RT-qPCR检测细胞... 目的探讨骨关节炎中长链非编码RNA转移相关肺腺癌转录物1(MALAT1)/微小RNA-15b-5p(miR-15b-5p)调控Wnt/β-catenin通路在脂多糖(LPS)诱导软骨损伤中的分子机制。方法以5 mg/L LPS处理ATDC5细胞形成骨关节炎细胞损伤模型,RT-qPCR检测细胞中MALAT1和miR-15b-5p的表达。MTT、流式细胞术、茜素红染色和ELISA检测MALAT1和miR-15b-5p对LPS诱导的软骨细胞损伤的影响。双荧光素酶报告基因实验检验MALAT1和miR-15b-5p的调控关系。Western blot检测相关蛋白的表达情况。结果在LPS诱导的ATDC5细胞中,MALAT1表达降低(P<0.05)。与Control组比较,LPS组细胞活性降低,凋亡率升高,肿瘤坏死因子-α、白细胞介素-6、白细胞介素-1β水平升高,钙化结节增多,MMP13、ADAMTS5蛋白表达水平升高,CollagenⅡ、Aggrecan蛋白表达水平降低,Wnt1和β-catenin蛋白表达水平升高(P<0.05)。MALAT1过表达可消减LPS对软骨细胞活性、凋亡、炎症反应、成骨分化、细胞外基质降解和Wnt/β-catenin通路的影响(P<0.05);而miR-15b-5p过表达增强了LPS对软骨细胞的作用(P<0.05)。结论MALAT1在LPS诱导的软骨细胞中低表达,其通过靶向miR-15b-5p抑制Wnt/β-catenin通路减轻LPS诱导的软骨细胞损伤。 展开更多
关键词 MALAT1 mir-15b-5p 软骨细胞 WNT/Β-CATENIN信号通路 骨关节炎 炎症反应 成骨分化 细胞外基质
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血浆外泌体miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病中的表达及诊断价值 被引量:5
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作者 冯真 张博 +5 位作者 邓思齐 叶国敏 张辉 张万江 吴江东 李卫民 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第12期1979-1984,共6页
目的研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对... 目的研究miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病血浆外泌体中的表达差异性及其诊断价值。方法通过生物信息学网站筛选结核病外泌体中具有差异性表达的miRNAs(miR-26a-5p和miR-151a-3p)。再以70例结核病患者(结核病组),58例体检健康者(健康对照组)样本进行临床验证:采用差速离心法提取血浆外泌体,透射电子显微镜,粒径分析,Western blot对其鉴定,采用RT-qPCR检测血浆外泌体中miR-26a-5p和miR-151a-3p在结核病组和对照组中的表达水平,并通过ROC曲线评价二者在结核病中诊断价值。结果透射电镜、粒径分析、Western blot鉴定到典型的外泌体特性,即成功提取到血浆外泌体。在临床验证中,以内参和外参同时校准,结核组患者血浆外泌体中miR-26a-5p表达水平低于对照组(P<0.0001),结核组患者血浆外泌体中miR-151a-3p表达水平高于对照组(P<0.0001),与生物信息学结果一致。作为诊断标记,以内参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的曲线下面积(AUC)分别为0.872、0.709,两者联合诊断结核病的AUC为0.915(P<0.0001);以外参为基准,血浆外泌体miR-26a-5p、miR-151a-3p鉴别结核病的AUC分别为0.829、0.854,两者联合诊断结核病的AUC为0.911(P<0.0001)。结论结核患者血浆外泌体来源miR-26a-5p表达水平降低,miR-151a-3p表达水平升高,且两者临床诊断效能较高,可能是诊断结核病潜在的生物标志物。 展开更多
关键词 肺结核 外泌体 mir-26a-5p mir-151a-3p 验证
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