采用超滤方法从鲜王浆中提取王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs),先就水料比、pH、离子强度3种单因素对MRJPs提取率的影响进行单因素分析,然后通过正交试验对MRJPs的超滤提取工艺进行优化,最后对MRJPs分离产物冻干粉和滤后...采用超滤方法从鲜王浆中提取王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs),先就水料比、pH、离子强度3种单因素对MRJPs提取率的影响进行单因素分析,然后通过正交试验对MRJPs的超滤提取工艺进行优化,最后对MRJPs分离产物冻干粉和滤后液进行成分测定.结果表明:最佳提取工艺为水料体积质量比5:1(mL/g),pH 7.0,离子强度0.5 mol/L.在最佳工艺条件下,MRJPs的提取率为82.63%,冻干粉含可溶性蛋白91.00%、水分0.01%、总糖15.22%、王浆酸2.00%,超滤副产物——滤后液中王浆酸和总糖的回收率分别为3.60%和2.11%.超滤工艺具有无溶剂污染、王浆成分可回收利用,适合规模化生产的优点,为MRJPs分离提取提供了新的工艺方法,为王浆深加工和MRJPs蛋白产品开发提供了科学依据.展开更多
文摘为建立精准的蜂王浆新鲜度检测方法,利用超高效液相色谱-串联四极杆飞行时间质谱(ultra-high performance liquid chromatography-tandem quadrupole-time-of-flight mass spectrometry,UPLC-Q-TOF/MS)对经胰蛋白酶酶解的蜂王浆中王浆主蛋白(major royal jelly proteins,MRJPs)进行定性分析,并通过蛋白质组学分析平台比对,鉴定出8种王浆主蛋白(MRJP1~7和MRJP9)的一级序列数据,然后按同时具备高易酶解性与酶解后高稳定性的标准筛选得到3个特异性标志多肽,包括MRJP1多肽YNGVPSSLNVISK、MRJP2多肽TLQMIAGMK、MRJP3多肽LTVAGESFTVK。分别合成MRJP1~3的3条特异性标志多肽标准品及其同位素标志肽,建立蜂王浆中MRJP1~3的超高效液相色谱-串联三重四极杆质谱(ultra-high performance liquid chromatography-triple quadrupole tandem mass spectrometry,UPLC-TQMS)定量检测方法。采用UPLC-TQMS分别检测蜂王浆样品中MRJP1~3含量发现,MRJP1多肽在10~1 600 ng/mL范围内具有良好的线性关系,MRJP2和MRJP3多肽在10~600 ng/mL范围内均具有良好的线性关系,决定系数(R~2)均大于0.99。最后,通过分析蜂王浆中MRJP1~3随加温老化时间的降解程度,证实MRJP1~3的降解率均与老化时间(40℃)呈正相关(R~2>0.9)。说明本研究所建立的MRJP1~3检测方法具有高度特异性,可为蜂王浆质量评价提供技术支撑。
