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Vasa基因在斑马鱼不同发育时期的mRNA表达分析 被引量:5
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作者 孙冬捷 王晨 严继舟 《广东农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第13期132-134,160,F0002,共5页
Vasa基因在果蝇中首次报道后,作为不同物种早期原始生殖细胞(PGC)标记基因被普遍接受。但对其研究都集中于早期胚胎,对性腺分化及成熟时期的Vasa表达及功能少有研究。RT-PCR结果显示,Vasa基因在整个发育阶段的表达量先上升再下降。荧光... Vasa基因在果蝇中首次报道后,作为不同物种早期原始生殖细胞(PGC)标记基因被普遍接受。但对其研究都集中于早期胚胎,对性腺分化及成熟时期的Vasa表达及功能少有研究。RT-PCR结果显示,Vasa基因在整个发育阶段的表达量先上升再下降。荧光定量PCR结果显示,在同一发育时期,精巢、卵巢表达量基本一致,卵巢略高于精巢。mRNA原位杂交显示,Vasa基因早期在斑马鱼生殖干细胞特异表达,随后在精巢表达于精原细胞和初级精母细胞,在卵巢表达于Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ时相卵母细胞。研究结果有助于鉴定斑马鱼生殖干细胞和进一步研究性分化和逆转的细胞机制。 展开更多
关键词 VASA基因 斑马鱼 mrna表达分析
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长江鲟org基因的克隆和表达分析 被引量:1
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作者 叶欢 武梦斌 +5 位作者 危起伟 岳华梅 阮瑞 杜浩 冷小茜 李创举 《水生生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2021年第5期958-965,共8页
为了研究卵子发生相关基因org基因在长江鲟(Acipenser dabryanus)卵子发生过程的作用,克隆得到长江鲟org基因(命名为Adorg)的全长cDNA序列,该序列为1031 bp,编码233个氨基酸。氨基酸序列比对分析发现,长江鲟AdOrg与斑马鱼(Danio rerio)Z... 为了研究卵子发生相关基因org基因在长江鲟(Acipenser dabryanus)卵子发生过程的作用,克隆得到长江鲟org基因(命名为Adorg)的全长cDNA序列,该序列为1031 bp,编码233个氨基酸。氨基酸序列比对分析发现,长江鲟AdOrg与斑马鱼(Danio rerio)ZOrg蛋白序列的一致性最高,为49.5%。荧光定量PCR研究发现,长江鲟Adorg mRNA特异地表达于性腺,其在卵巢大量表达,在精巢微量表达,而在其他组织(肝、肠、脾、肾、心、肌肉、鳃、垂体和下丘脑)均未检测到其表达;胚胎发育过程的动态表达分析表明,Adorg为母源表达,在原肠胚之前均具有较高的表达水平,随后其表达量急剧下降;进一步研究其在卵子发生的表达模式,发现Adorg基因在未分化性腺中的表达量极低,随着卵母细胞的生长发育,其mRNA表达水平急剧上升,且维持在非常高的水平,在Ⅱ期卵巢中的表达量最高。性腺切片RNA原位杂交实验结果表明,Adorg特异地在生殖细胞表达;在卵巢中,Adorg在卵原细胞的信号较弱,但在初级卵母细胞中,其信号急剧增强且分布在卵母细胞的胞质,且随着初级卵母细胞的生长发育,其信号也逐渐增强;在精巢中,发现Adorg mRNA在A型和B型精原细胞中表达,而在初级和次级精母细胞中未发现阳性信号。上述结果表明,Adorg基因可能在长江鲟性别分化和卵子发生过程中都起重要作用,有待通过基因敲降或敲除技术来进一步阐明其功能。 展开更多
关键词 长江鲟 org基因 mrna表达分析 卵子发生
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三角鲂foxl2基因克隆和时空表达特征及EE2对其表达的影响 被引量:1
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作者 唐红 关文志 +4 位作者 许晓军 牛宝龙 楼宝 沈小明 顾志敏 《浙江农业学报》 CSCD 北大核心 2024年第8期1789-1799,共11页
为探究foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在三角鲂(Megalobrama terminalis,M.terminalis)性腺发育过程中的功能,该研究克隆了三角鲂foxl2基因的开放阅读框(open reading frame, ORF),分析了其编码蛋白的结构特征,检测... 为探究foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在三角鲂(Megalobrama terminalis,M.terminalis)性腺发育过程中的功能,该研究克隆了三角鲂foxl2基因的开放阅读框(open reading frame, ORF),分析了其编码蛋白的结构特征,检测了其在胚胎发育不同时期和成体不同组织中的表达情况,并研究了腹腔注射性激素17α-乙炔基雌二醇(17α-ethinylestradiol, EE2)对foxl2表达的影响。结果表明:三角鲂foxl2基因ORF为921 bp,共编码306个氨基酸,具有保守的叉头(forkhead, FH)结构域,与斑马鱼(Danio rerio)FOXL2的同源性较高达到96%。三角鲂FOXL2蛋白与鲤科鱼类亲缘关系较近,而与人类和小鼠相距较远。qRT-PCR结果显示,foxl2 mRNA在三角鲂整个胚胎发育过程中均表达,在受精后24、48、60 h表达量较高(P<0.05);在卵巢中的表达量显著高于精巢和其他组织(P<0.05),在肌肉、皮肤、脾、肾和肠组织中弱表达或不表达,表达具有组织特异性。腹腔注射EE2对三角鲂foxl2 mRNA表达调控结果显示,在脑组织中,雌鱼foxl2 mRNA在注射24 h达到峰值且显著高于对照组和雄鱼(P<0.05);在性腺组织中,foxl2 mRNA在注射24 h后的卵巢和精巢中表达量最高,且在36 h的卵巢中持续高表达(P<0.05),表明EE2能够明显促进三角鲂脑和卵巢foxl2 mRNA的表达。研究表明,foxl2基因在三角鲂性腺中呈性别二态性表达,推测其在卵巢发育和功能维持方面起重要作用,foxl2可能是与性类固醇激素相互作用来调节三角鲂性腺发育和功能维持。该研究可为三角鲂性腺发育及性别调控机制提供基础资料。 展开更多
关键词 三角鲂 FOXL2 性腺发育 EE2 mrna表达分析
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斑鳢叉头框转录因子基因Foxl2的克隆表达及性类固醇激素刺激下的表达响应 被引量:5
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作者 吴燕铎 欧密 +4 位作者 高丹丹 陈昆慈 罗青 刘海洋 赵建 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第1期49-60,共12页
为探究叉头框转录因子Foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在斑鳢Channa maculata性腺发育过程中的作用,采用RT-PCR和RACE技术克隆出斑鳢Foxl2基因,利用qRT-PCR解析Foxl2基因在雌雄斑鳢1龄成鱼组织、不同发育时期性腺中的... 为探究叉头框转录因子Foxl2基因(forkhead transcription factor gene 2)在斑鳢Channa maculata性腺发育过程中的作用,采用RT-PCR和RACE技术克隆出斑鳢Foxl2基因,利用qRT-PCR解析Foxl2基因在雌雄斑鳢1龄成鱼组织、不同发育时期性腺中的表达情况,以及外源性激素诱导后雌雄斑鳢性腺中Foxl2的表达变化,通过酶联免疫法测定性腺不同发育时期雌雄斑鳢血清中的雌性激素(estrogen,E)总含量,并利用免疫组化技术检测性腺中Foxl2蛋白表达的细胞类型。结果表明:克隆获得斑鳢Foxl2 cDNA序列全长为1939 bp,开放阅读框(ORF)为921 bp,共编码306个氨基酸;组织表达分析显示,Foxl2在卵巢中表达量最高且极显著高于精巢(P<0.01),但在鳃和脑组织中雄鱼表达量显著高于雌鱼(P<0.05);性腺发育时期表达分析显示,Foxl2在卵巢中表达量高于精巢,且在孵化出膜后105 d时,卵巢中表达量达到最高,精巢中表达量最低,两者表达量存在极显著性差异(P<0.01),血清中雌激素总含量变化与之相似;免疫组织化学检测显示,Foxl2蛋白表达于斑鳢卵巢成熟卵母细胞周围的颗粒细胞,精巢中未检测到Foxl2表达信号;经外源性类固醇激素17α-乙炔基雌二醇(17α-ethynylestradio,EE2)和17α-甲睾酮(17α-methyltestosterone,MT)处理后,卵巢中Foxl2的表达均受到抑制,但精巢中表达水平被EE2上调,被MT下调。研究表明,Foxl2基因在斑鳢性腺中呈现明显的性别二态性表达,推测其参与卵巢的发育和维持,通过外源激素诱导,Foxl2可能响应性类固醇激素的调节,本研究从mRNA和蛋白层面初步揭示了Foxl2在斑鳢性腺发育中的重要作用,为深入研究其性别分化机制及性别控制技术提供了科学参考。 展开更多
关键词 斑鳢 Foxl2基因 克隆 性类固醇激素 mrna表达分析
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尼罗罗非鱼TIRAP基因克隆、组织表达及其在无乳链球菌、脂多糖和聚肌胞苷酸刺激下的免疫应答 被引量:3
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作者 刘洁 高风英 +5 位作者 卢迈新 陈刚 曹建萌 刘志刚 王淼 韩雪晴 《大连海洋大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期857-865,共9页
为研究包含TIR结构域的接头蛋白(TIR domain-containing adaptor protein,TIRAP)基因在TLR信号介导的先天免疫中的调控作用,通过反转录-聚合酶链式反应和分段扩增获得了尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus TIRAP基因的cDNA全长,并对其生... 为研究包含TIR结构域的接头蛋白(TIR domain-containing adaptor protein,TIRAP)基因在TLR信号介导的先天免疫中的调控作用,通过反转录-聚合酶链式反应和分段扩增获得了尼罗罗非鱼Oreochromis niloticus TIRAP基因的cDNA全长,并对其生物信息学进行分析,利用RT-qPCR法分析TIRAP在健康鱼各组织中的表达情况,以及在无乳链球菌Streptococcus agalactiae、脂多糖(LPS)和聚肌胞苷酸(Poly I:C)刺激后不同组织不同时间点的表达量变化。结果表明:TIRAP cDNA全长2900 bp,开放阅读框为816 bp,可编码291个氨基酸;系统进化分析显示,尼罗罗非鱼与快乐东方鲷Astatotilapia calliptera TIRAP的亲缘关系较近;TIRAP在尼罗罗非鱼11个组织(肝、皮肤、心脏、肾、胃、鳃、脑、脾、肠、血液和肌肉)中均有表达,其中肌肉中表达量最高(P<0.05),胃中表达量相对较低;人工感染无乳链球菌引起TIRAP基因在肠和肾中上调表达,均在注射后1 d时表达量达到最大值;LPS和Poly I:C刺激引起TIRAP基因在肝、脾和肾中上调表达,但在肠中表达量均低于对照组(0 h)。研究表明,无乳链球菌、LPS和Poly I:C均能诱导TIRAP基因表达,TIRAP基因参与了尼罗罗非鱼免疫应答反应,暗示TIRAP在先天免疫中发挥作用。 展开更多
关键词 尼罗罗非鱼 包含TIR结构域的接头蛋白(TIRAP) 克隆 mrna表达分析
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