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载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A蛋白在宫颈癌进化发育中的研究进展
1
作者 贺海威 徐明娟 《海军军医大学学报》 北大核心 2025年第6期798-802,共5页
载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A(APOBEC3A)突变是宫颈癌的一个主要驱动因素。APOBEC3A与人乳头瘤病毒(HPV)关系密切:一方面可以有效抑制HPV感染,另一方面又可以促进HPV DNA整合入宫颈角质细胞。本文综述了HPV与APOBEC3A错综复杂的相... 载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3A(APOBEC3A)突变是宫颈癌的一个主要驱动因素。APOBEC3A与人乳头瘤病毒(HPV)关系密切:一方面可以有效抑制HPV感染,另一方面又可以促进HPV DNA整合入宫颈角质细胞。本文综述了HPV与APOBEC3A错综复杂的相互作用,并分析了其所涉及的病毒机制和细胞信号通路。大量研究证实,APOBEC3A基因可以有效诱导包括宫颈癌在内的多种恶性肿瘤的进化发育,而在临床样本中,癌细胞中APOBEC3A蛋白的表达水平却并不太高。本文还展望了宫颈癌中的APOBEC3A活性的意义以及潜在的治疗价值。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽样3A 宫颈肿瘤 进化 发育
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人天然免疫蛋白载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)的克隆表达及活性鉴定
2
作者 成珊 曹丽妍 +2 位作者 杜娟 王文勇 郭晏海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期179-184,共6页
目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性。方法构建APOBEC3A真核表达载体pc DNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和Hep G2细胞。Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免... 目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3A(APOBEC3A)表达载体,真核细胞表达APOBEC3A并鉴定其胞嘧啶脱氨酶活性。方法构建APOBEC3A真核表达载体pc DNA3.0-APOBEC3A,转染HEK293T细胞和Hep G2细胞。Western blot法鉴定APOBEC3A蛋白表达,免疫荧光细胞化学染色确定APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞的定位,利用组蛋白(His)标签蛋白纯化方法富集纯化APOBEC3A蛋白,荧光偏振技术检测APOBEC3A脱氨酶活性。结果 DNA测序证实pc DNA3.0-APOBEC3A插入长600 bp的APOBEC3A基因序列;该质粒能在HEK293T细胞和Hep G2细胞表达APOBEC3A,APOBEC3A在HEK293T细胞中主要分布于胞质,在Hep G2细胞中胞质和胞核均匀分布;纯化获得的APOBEC3A对单链DNA中TTCA序列具有胞嘧啶脱氨基活性。结论成功构建APOBEC3A真核表达载体,APOBEC3A在HEK293T细胞和Hep G2细胞定位不同,表达的APOBEC3A具有胞嘧啶脱氨基活性。 展开更多
关键词 固有免疫 载脂蛋白b mrna编辑酶催化亚基3A(apobec3A) 胞嘧啶脱氨酶 克隆表达
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宫颈癌组织APOBEC3A蛋白的表达与高危型HPV感染的相关性研究 被引量：10
3
作者 陈姗 狄娜 +4 位作者 秦君璞 郑婷婷 李丹 周莉 张帝开 《中国病理生理杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期845-849,共5页
目的:探讨宫颈癌组织中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变(CIN)I～III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使... 目的:探讨宫颈癌组织中载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样蛋白3A(APOBEC3A)表达与高危型人乳头瘤病毒(HPV)感染的关系。方法:采用免疫组化法检测26例宫颈癌、27例宫颈上皮内瘤变(CIN)I～III和22例正常宫颈组织APOBEC3A蛋白的表达,同时使用凯普分型检测试剂盒对3组样品分别进行高危HPV16/HPV18分型检测。以脂质体法转染APOBEC3A质粒进入HeLa细胞,RT-qPCR与Western blotting验证APOBEC3A对高危型HPV18 E6 mRNA以及蛋白表达的影响。结果:宫颈癌组织、CIN组织以及正常宫颈组织中APOBEC3A蛋白表达的阳性率分别为46.2%、92.6%和86.4%,宫颈癌组织中APOBEC3A蛋白表达较正常宫颈组织明显下降(P<0.01)。宫颈癌组织、CIN及正常宫颈组织中HPV16感染阳性率分别为92.3%、77.8%和54.5%;HPV18感染阳性率分别为80.8%、51.8%和68.2%;APOBEC3A蛋白表达与HPV18感染阳性率呈负相关(P<0.05)。增加HeLa细胞中APOBEC3A的表达明显降低了HPV18 E6 mRNA以及蛋白的表达。结论:在宫颈癌组织中APOBEC3A高表达可以对抗HPV18感染,并抑制HPV18 E6的转录和表达。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽样蛋白3A 人乳头状瘤病毒 宫颈肿瘤
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APOBEC3G基因多态性与慢性乙型肝炎易感性的关系 被引量：2
4
作者 游志毅 周福元 +4 位作者 王雄虎 陈楚明 周军华 赵德坚 胡贵方 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第5期769-771,共3页
目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因rs185983011位点在人群中的多态性分布,并研究其与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法分别收集186例HBsAg和HBeAg皆阴性的健康者、159例慢性乙型肝炎患者的血液样本。应用Sanger测序... 目的探讨载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3G(APOBEC3G)基因rs185983011位点在人群中的多态性分布,并研究其与慢性乙型肝炎易感性的关系。方法分别收集186例HBsAg和HBeAg皆阴性的健康者、159例慢性乙型肝炎患者的血液样本。应用Sanger测序方法检测该研究对象APOBEC3G基因rs185983011位点的多态性,确定其基因型及等位基因分布情况。并将该位点的多态性与慢性乙型肝炎的易感性之间的关系进行统计学分析。结果 SNP rs1 8598301 1位点存在于检测人群中的基因型只有C/C和C/T,其中以C/C为主(97.7%)。SNP rs185983011位点的基因型频率和等位基因频率在慢性乙型肝炎患者组和健康者组中的分布无统计学差异(P>0.05)。结论研究人群APOBEC3G基因中rs185983011位点的基因型主要是C/C,未发现该位点的多态性与慢性乙型肝炎易感性存在相关性。 展开更多
关键词 多态性分布 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽3G 慢性乙型肝炎 单核苷酸多态性
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APOBEC3F的真核表达及其抗猪繁殖与呼吸综合征病毒作用的分析 被引量：2
5
作者 胡璇 田浪 +5 位作者 王怡然 温贵兰 陈启青 陈佳琪 叶泥 龚新勇 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第8期829-836,共8页
为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构... 为研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽样3F(APOBEC3F)对猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)增殖的影响,本研究根据GenBank中登录的猪源APOBEC3F基因序列(EU871586)设计引物,经PCR从苏太猪外周血单个核淋巴细胞中扩增APOBEC3F基因,经测序后构建系统进化树分析其遗传进化特性。结果显示,猪源APOBEC3F基因编码区(CDS)长1257 bp,编码418个氨基酸,与其他物种该基因的同源性在60%~70%。利用扩增的APOBEC3F基因构建真核表达载体pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F经菌液PCR和测序鉴定正确后,转染Marc-145细胞,采用间接免疫荧光试验(IFA)和western blot鉴定重组APOBEC3F蛋白的表达。IFA结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的Marc-145细胞质中出现特异性红色荧光;western blot结果显示,转染pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F的细胞样品在44 ku处有特异性条带,表明猪源APOBEC3F在Marc-145细胞中获得了表达。在Marc-145细胞中转染不同剂量的pcDNA3.1(+)5'Flag-APOBEC3F或不同剂量的针对APOBEC3F的siRNA,过表达或抑制APOBEC3F表达后感染PRRSV,通过RT-qPCR检测PRRSV N基因mRNA的转录水平,采用western blot检测细胞中PRRSV N蛋白的表达水平,采用TCID50测定PRRSV滴度。结果显示,在Marc-145细胞中过表达的APOBEC3F可以显著抑制PRRSV N基因mRNA转录水平(P<0.01)和N蛋白的表达水平,降低PRRSV滴度(P<0.01、P<0.001),表明APOBEC3F具有抑制PRRSV增殖的作用,且抑制效率与重组质粒的转染剂量呈正相关。在Marc-145细胞中抑制APOBEC3F的表达后,PRRSV N基因的mRNA转录水平(P<0.01)、N蛋白的表达水平与PRRSV滴度(P<0.05、P<0.001)均显著升高,表明抑制APOBEC3F的表达具有促进PRRSV增殖的作用,且该促进效率与针对APOBEC3F的siRNA转染剂量呈正相关。本研究首次证明APOBEC3F对PRRSV在Marc-145细胞中的增殖有抑制作用,为研究APOBEC3F功能提供实验依据,也为研究抗PRRSV相关机制的研究提供参考。 展开更多
关键词 猪繁殖与呼吸综合征病毒 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽样3F MARC-145细胞
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APOBEC3蛋白与HPV及宫颈癌的研究进展 被引量：5
6
作者 魏智(综述) 赵洪波 +2 位作者 张涛 冯璇 杜琰(审校) 《复旦学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2021年第2期271-276,共6页
宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,AP... 宫颈癌是严重威胁女性健康的恶性肿瘤之一,已知人乳头瘤病毒(human papilloma virus,HPV)感染是宫颈癌的主要病因,但具体机制尚不明确。人载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽(apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide,APOBEC)家族是一组能够编辑DNA或RNA序列的胞苷脱氨酶。APOBEC3成员是固有免疫系统的重要成员,在抗病毒感染防御过程中扮演重要角色。APOBEC3与多种肿瘤的发生发展密切相关,可能与HPV感染以及宫颈癌的关系尤为密切。APOBEC3B可能通过“协助”HPV病毒使抑癌蛋白失活及促进HPV病毒癌蛋白的突变,从而促进癌症的发生。本文就APOBEC3与HPV清除、突变和宫颈癌发生方面的研究进行综述。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑催化多肽3(apobec3) 宫颈癌 人乳头瘤病毒(HPV)
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干扰素-α诱导HepG2 2.2.15细胞APOBEC3G的表达及其机制
7
作者 王鲁文 陈辉 +2 位作者 褚小刚 严少南 龚作炯 《中国感染控制杂志》 CAS 2009年第3期155-159,共5页
目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子... 目的探讨干扰素（IFN）-α刺激HepG2 2．2．15细胞后，对载脂蛋白BmRNA编辑酶催化多肽样3G（apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G，APOBEC3G）表达的影响，以及初步探讨Janus激酶-信号传导和转录激活子OAK—STAT）信号通道是否参与APOBEC3G基因转录调控。方法对HepG2 2．2．15细胞给予不同剂量（0、1、10^1、10^2、10^3、10^4 U／mL）IFN-α刺激8h时，以及10^3 U／mL IFN-α刺激2、4、6、8、10、12h时，收集细胞或培养上清液。应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及Western blot检测HepG22．2．15细胞APOBEC3G、STAT-1 mRNA及蛋白的表达水平。应用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测细胞培养上清液中乙型肝炎表面抗原与e抗原（HBsAg与HBeAg）水平，应用实时荧光定量PCR及RT-PCR分别检测上清液中HBVDNA水平以及细胞中HBVmRNA水平。结果无IFN-α（0 U／mL）刺激时，HepGa2．2．15细胞APOBEC3G表达水平很低。随着IFN-a浓度的升高，APOBEC3GmRNA及蛋白水平逐步升高，IFN-α浓度为10^4 U／mL时，APOBEC3G表达量最高，并且STAT-1分子mRNA及蛋白的表达量亦逐步升高，与APOBEC3G表达量呈现平行相关。随着IFN-a刺激时间的延长，APOBEC3G表达量明显升高，8h时达到最高，其后逐渐下降。10^4 U／mL IFN-α刺激8h时，HepG2 2．2．15细胞培养上清液中HBsAg、HBeAg、HBVDNA及细胞中HBVmR-NA水平均明显低于无IFN-α刺激的HepG22．2．15细胞。结论WN-a能诱导HepG22．2．15细胞表达APO—BEC3G，在一定范围内，APOBEC3G的表达与IFN—d的剂量、作用时间呈正相关；IFN-α诱导APOBEC3G的表达可能是其发挥抗病毒作用的机制之一；IFN-α是否经JAK-STAT信号通道刺激APOBEC3G的表达，二者之间的关系及其机制尚待进一步研究。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽样3G 干扰素-Α HEPG2 2.2.15细胞 STAT-1 肝炎 乙型
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APOBEC3B调控葡萄膜黑色素瘤复制应激的研究
8
作者 宗春燕 何杰 +2 位作者 张哲 贾仁兵 沈键锋 《上海交通大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期1034-1044,共11页
目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响。方法·应用免疫组织化学... 目的·研究载脂蛋白B mRNA编辑酶催化亚基3B(apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic subunit 3B,APOBEC3B)在葡萄膜黑色素瘤(uveal melanoma,UM)中的生物学功能以及对药物治疗敏感性的影响。方法·应用免疫组织化学染色和Western blotting,分别检测眼部黑色素瘤[UM和结膜黑色素瘤(conjunctival melanoma,CM)]组织和细胞中APOBEC3B蛋白的表达水平。通过检索癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas,TCGA)数据库,分析UM中APOBEC3B表达水平与预后的关联。使用CRISPR-Cas9质粒APOBEC3B-sgRNA敲除UM细胞系OMM2.3中APOBEC3B基因,构建APOBEC3B敲除的OMM2.3稳转细胞系sgAPOBEC3B以及对照细胞系Vector;并通过克隆形成实验,探索APOBEC3B敲除对OMM2.3细胞增殖的影响。同时,通过APOBEC3B-shRNA和空载质粒建立APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞shAPOBEC3B和对照细胞shCtrl,对其进行转录组测序(RNA sequencing,RNA-seq),检测差异基因,并通过基因集富集分析(gene set enrichment analysis,GSEA)揭示APOBEC3B调控的下游通路。通过免疫荧光染色鉴定下游通路的关键蛋白。通过应用通路靶向药物处理,检测APOBEC3B对UM药物治疗敏感性的影响。结果·免疫组织化学染色结果表明眼部黑色素瘤(UM和CM)组织相较于良性色素痣组织APOBEC3B表达更高。Western blotting也表明包括OMM2.3细胞在内的大多数眼部黑色素瘤细胞相较于正常对照细胞(视网膜色素上皮细胞)APOBEC3B蛋白表达水平更高。并且TCGA数据库分析表明,APOBEC3B高表达的UM患者总生存期(P=0.032)和无病生存期(P=0.000)更短。然而APOBEC3B敲除并不影响OMM2.3细胞克隆形成的能力,APOBEC3B敲低也没有造成细胞周期的显著改变。shAPOBEC3B和shCtrl细胞系的RNA-seq差异基因富集分析结果显示,APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞的复制应激相关通路,并且热图分析也显示APOBEC3B敲低后DNA复制应激相关通路基因表达发生改变。免疫荧光染色结果显示,APOBEC3B敲低后复制应激通路关键靶标磷酸化的复制蛋白A 32 kDa亚基(replication protein A 32 kDa subunit,RPA32)水平降低。在对APOBEC3B敲低的OMM2.3细胞和对照细胞的药物敏感性实验中,发现相较于shAPOBEC3B细胞,shCtrl细胞对细胞周期检测点激酶1(cell cycle checkpoint kinase 1,CHK1)抑制剂的敏感性更高。结论·APOBEC3B参与调控OMM2.3细胞复制应激相关通路,且APOBEC3B表达的OMM2.3细胞对CHK1抑制剂的处理更为敏感。 展开更多
关键词 载脂蛋白b mrna编辑酶催化亚基3b(apobec3b) 葡萄膜黑色素瘤 复制应激 细胞周期检测点激酶1(CHK1)抑制剂
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APOBEC3A-HBc融合蛋白的表达及活性鉴定
9
作者 杜娟 成珊 +2 位作者 白换换 纪奇峰 郭晏海 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1521-1528,共8页
目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的... 目的构建载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3A(APOBEC3A)与不同长度和序列的乙型肝炎病毒核心蛋白(HBc)的融合蛋白真核表达载体,研究其表达能力及融合蛋白的细胞内定位及胞嘧啶脱氨基活性。方法采用In-Fusion重组克隆方法,将含有APOBEC3A的PCR产物分别和含有全长HBc、四种C端截短体HBc的PCR扩增片段连接克隆入真核表达载体pc DNA3.0。将重组载体分别转染HEK293 T细胞,用免疫荧光细胞化学染色法检测融合蛋白在HEK293 T细胞中的定位,Western blot法检测融合蛋白的表达水平;尿素变性PAGE法分析融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性。结果构建的五种融合蛋白表达载体,可在HEK293T细胞中表达五种融合蛋白,4种含HBc截短体编码的融合蛋白表达载体比含全长HBc编码的融合蛋白载体的表达能力强;含全长HBc的融合蛋白APOBEC3A-HBc主要定位于细胞质,而含HBc截短体的融合蛋白APOBEC3AHBc144 S、APOBEC3 A-HBc144 E、APOBEC3 A-HBc144 AAA和APOBEC3 A-HBc144 A均主要定位于细胞核中;HBc截短体融合蛋白的胞嘧啶脱氨基活性高于全长HBc融合蛋白。结论成功构建APOBEC3A与不同长度和序列HBc的融合蛋白真核表达载体,APOBEC3A与全长HBc及截短体HBc的融合蛋白在表达能力、细胞内定位以及胞嘧啶脱氨基活性具有明显差异。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒核心蛋白(Hbc) 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽3A(apobec3A) 脱氨基活性
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表达A3C的HBV载体质粒抑制HBV的研究
10
作者 李东 王宇明 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期2044-2047,2050,共5页
目的观察表达人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)的复制缺损型HBV载体质粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法利用PCR技术和基因重组方法构建表达A3C和人绿色荧光蛋白(hrGFP)的HBV载体质粒pCH-LJ3-A3C、pCH-LJ3-hrGFP,分别与野生... 目的观察表达人类载脂蛋白B mRNA编辑酶催化多肽3C(A3C)的复制缺损型HBV载体质粒抑制乙型肝炎病毒(HBV)的作用。方法利用PCR技术和基因重组方法构建表达A3C和人绿色荧光蛋白(hrGFP)的HBV载体质粒pCH-LJ3-A3C、pCH-LJ3-hrGFP,分别与野生型HBV质粒pCH-3093共转染HepG2细胞,提取细胞裂解液及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA进行Southern blot检测;提取细胞裂解液中核心蛋白相关的HBV DNA,PCR扩增,克隆,测序。结果pCH-LJ3-A3C对细胞浆及细胞培养上清液中病毒颗粒DNA具有抑制作用,使细胞浆内HBV DNA减少31%,使上清液中子代病毒颗粒HBV DNA减少40%;对HBV DNA具有编辑作用,50个克隆测定HBV DNA序列,36克隆出现G-A突变,G-A突变总数量982位点。结论pCH-LJ3-A3C可以抑制HBV复制,pCH-LJ3-A3C对HBV DNA的编辑作用是其发挥作用的主要原因,pCH-LJ3-A3C可以作为一种新型的抗病毒制剂治疗HBV感染。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 重组乙肝病毒载体 基因治疗 HEPG2细胞 载脂蛋白b mrna编辑酶催化多肽 3C
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