微生物低温碱性蛋白酶的研究进展 被引量：17

1

作者 杨胜远 陆兆新 《食品与发酵工业》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期93-98,共6页

综述了微生物源低温碱性蛋白酶的研究状况 ,包括酶的微生物来源、生产菌株的选育、酶学特性、酶的结构及人工进化和安全性评价 。

关键词 低温碱性蛋白酶 微生物来源 生产菌株 选育 酶学特性 安全性评价

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海洋微生物低温碱性脂肪酶的纯化与性质研究 被引量：16

2

作者 董宏伟 孙谧 +1 位作者 王跃军 于建生 《海洋与湖沼》 CAS CSCD 北大核心 2004年第4期376-383,共8页

以海洋微生物通过发酵制备的脂肪酶为材料 ,对该酶的分离纯化条件及理化性质进行了研究。在脂肪酶纯化中 ,采用氯仿萃取、中空纤维柱超滤及CM SepharoseFF阳离子交换柱层析等技术对发酵制备的脂肪酶进行了纯化 ,结果得到达到电泳纯的脂... 以海洋微生物通过发酵制备的脂肪酶为材料 ,对该酶的分离纯化条件及理化性质进行了研究。在脂肪酶纯化中 ,采用氯仿萃取、中空纤维柱超滤及CM SepharoseFF阳离子交换柱层析等技术对发酵制备的脂肪酶进行了纯化 ,结果得到达到电泳纯的脂肪酶。在脂肪酶理化性质研究中 ,采用SDS PAGE电泳对该脂肪酶分子量进行测定 ,并在实验中以橄榄油为底物采用脂肪酶酸碱滴定测活法 ,对脂肪酶的最适水解条件、各种因素对脂肪酶稳定性的影响进行了研究。结果显示 ,该脂肪酶分子量为 ( 38 0± 1 )kD ,最适水解温度为 35℃ ,最适pH为 8 5 ,为一低温碱性脂肪酶。该脂肪酶可在 35℃以下、pH =4 0— 9 0范围内保持良好的稳定性 ,与常见金属离子、化学试剂等的配伍性较好 ,并且具有良好的耐盐及抗氧化性能。研究中还以p NPL(月桂酸对硝基苯酚酯 )为底物采用脂肪酶化学发光测活法 ,对脂肪酶进行了酶促动力学的研究。结果表明 ,该脂肪酶在最适条件下Km 值为 7 80 5 μmol/L ,Vmax为 1 2 385mmol/ (L·min)。通过对Zn2 +抑制脂肪酶水解活性的研究 ,发现Zn2 +对脂肪酶具有可逆抑制作用 ,从而筛选到该脂肪酶的可逆抑制剂Zn2 +。 展开更多

关键词 海洋微生物 低温碱性脂肪酶 分离纯化 理化性质

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低温碱性蛋白酶菌株的筛选及产酶条件的研究 被引量：15

3

作者 万琦 陆兆新 高宏 《微生物学杂志》 CAS CSCD 2002年第5期16-18,24,共4页

从 2 0株枯草芽孢杆菌筛选出了 1株产低温碱性蛋白酶菌株 ;并通过单因子实验、正交实验确定该菌株的最佳培养基为 :葡萄糖 8%,豆粕粉 6 %,Tween80 0 .0 3%,KH2 PO4 0 .0 6 %;确定了酶作用的最适条件为 30℃。

关键词 枯草芽孢杆菌 碱性蛋白酶 低温

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的制备工艺研究 被引量：11

4

作者 王跃军 孙谧 +5 位作者 洪义国 张云波 沙珍霞 阎晓玲 苗小庆 姜展军 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第2期11-20,共10页

对黄海黄杆菌所产低温碱性蛋白酶的工业生产技术和电泳纯级试剂酶的分离纯化工艺进行了实验。按照设计的中试生产技术 ,每吨发酵液可得酶粉 2 0 kg,粗酶比活大于 2 0× 10 4 U/ g;同时运用一系列纯化手段和条件 ,制备出电泳纯级试剂... 对黄海黄杆菌所产低温碱性蛋白酶的工业生产技术和电泳纯级试剂酶的分离纯化工艺进行了实验。按照设计的中试生产技术 ,每吨发酵液可得酶粉 2 0 kg,粗酶比活大于 2 0× 10 4 U/ g;同时运用一系列纯化手段和条件 ,制备出电泳纯级试剂酶 ,纯化过程蛋白回收率在 7%左右 ,活性回收率在60 %以上 ,比活性也稳定在 1.9× 10 3U/ mg以上 ,激光灰度扫描结果试剂酶纯度大于 99% ,可以作为试剂酶满足进一步生物学研究和实际应用。其产品质量和制造工艺均达到了中试放大规模的要求。 展开更多

关键词 海洋低温碱性蛋白酶 絮凝沉淀 超率浓缩 分离纯化 黄海黄杆菌

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产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130的复合诱变原生质体选育 被引量：11

5

作者 王跃军 孙谧 +4 位作者 张云波 洪义国 阎晓玲 王春波 刘晓萍 《海洋水产研究》 CSCD 2000年第4期20-25,共6页

以黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130突变株 SW1- 10 4为出发菌 ,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体 ,对原生质体进行复合诱变 ,对大量再生突变株进行筛选和淡水驯化 ,最终获得了高产、稳定的碱性蛋白酶产生菌 SW2 - 10 4 ,在自... 以黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130突变株 SW1- 10 4为出发菌 ,在原生质体形成和再生的最佳条件下制备原生质体 ,对原生质体进行复合诱变 ,对大量再生突变株进行筛选和淡水驯化 ,最终获得了高产、稳定的碱性蛋白酶产生菌 SW2 - 10 4 ,在自来水培养基中能够大量产酶 ,产酶活力为 3910 U/ ml。从而解决了黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130低温碱性蛋白酶大规模工业化生产设备和产业化区域的局限性。 展开更多

关键词 黄海黄杆菌 原生质体 诱变 低温碱性蛋白酶

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶性质鉴定 被引量：21

6

作者 孙谧 修朝阳 +7 位作者 王跃军 陈丽芳 张云波 洪义国 阎晓玲 韩艳波 李晶 陈良 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第2期1-10,共10页

对黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明 ,该酶由 2 56个氨基酸组成 ,分子量为 330 0 0 Dar,等电点 p I为 9.4 5,米氏常数 Km为 5× 10 -3 m mol/ L;酶的最适作用p H范围为 9.5～ 10 .5,最适作用温度... 对黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130菌株产低温碱性蛋白酶的理化性质研究表明 ,该酶由 2 56个氨基酸组成 ,分子量为 330 0 0 Dar,等电点 p I为 9.4 5,米氏常数 Km为 5× 10 -3 m mol/ L;酶的最适作用p H范围为 9.5～ 10 .5,最适作用温度 30℃ ,具有一定的抗氧化稳定性。Ca2 +、Mn2 对酶有激活作用 ,而 Hg2 +、Ag+对酶有抑制作用。 DFP、NBS严重抑制酶的活性 ,而同时该酶也能被 EDTA抑制。结果表明该低温碱性蛋白酶为一新型的丝氨酸蛋白酶。 展开更多

关键词 黄海黄杆菌YS-9412-130 海洋低温碱性蛋白酶 理化性质

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黄海黄杆菌YS-9412-130产酶发酵条件的优化 被引量：10

7

作者 张云波 孙谧 +5 位作者 王跃军 洪义国 阎晓玲 田杰 谢峰 姜展军 《海洋水产研究》 CSCD 2000年第4期26-35,共10页

以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130突变株 SW2 - 10 4为培养菌株 ,进行碳源、氮源、无机盐、起始 p H值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明 ,在以1%葡萄糖为碳源 ,以 3.5%豆饼粉为氮源 ,无机... 以产低温碱性蛋白酶的黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130突变株 SW2 - 10 4为培养菌株 ,进行碳源、氮源、无机盐、起始 p H值、培养时间、接种量和接种龄等发酵条件的优化实验。实验结果证明 ,在以1%葡萄糖为碳源 ,以 3.5%豆饼粉为氮源 ,无机盐 :0 .4 % Na2 HPO4 、0 .0 3% KH2 P0 4 、0 .0 2 % Mg SO4 、0 .1% Na2 CO3、0 .2 % Ca Cl2 ,起始 p H值 7.0 ,接种 12 h种龄的种子 4 % ,2 0℃、2 50 r/ min的条件下在旋转摇床中培养 36h,菌株产酶活性最高。 展开更多

关键词 黄海黄杆菌 低温碱性蛋白酶 发酵条件 产酶菌

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶活性必需基团分析 被引量：3

8

作者 洪义国 孙谧 +3 位作者 修朝阳 张云波 王海英 王跃军 《海洋水产研究》 CSCD 2002年第3期26-29,共4页

用化学修饰法结合酶的紫外吸收光谱变化研究黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130分泌的海洋低温蛋白酶的功能基团性质 ,结果表明 ,羟基、咪唑基、ε-氨基及胍基均与酶活性有关 ,而羧基、巯基与酶活性无关。酶的性质与丝氨酸蛋白酶有很大的相似性。

关键词 黄海黄杆菌 低温碱性蛋白酶 必需基团 酶活力 化学修饰法

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的应用研究Ⅱ.——洗涤剂用包覆型酶的配伍特性与应用效果评价 被引量：2

9

作者 王海亭 孙谧 +3 位作者 王宇婧 丁彩凤 王海英 张宝莲 《海洋水产研究》 CSCD 2002年第3期30-36,共7页

论述了洗涤剂中的低温碱性蛋白酶的物理和化学特性、去污性能及它与常规洗涤助剂的配伍性。实验结果表明 ,该包覆型酶最适反应温度为 35℃ ,p H为 10。在温度 4 0℃以下、p H5～ 11范围内均具有良好的稳定性 ,同时对低温有突出的适应性... 论述了洗涤剂中的低温碱性蛋白酶的物理和化学特性、去污性能及它与常规洗涤助剂的配伍性。实验结果表明 ,该包覆型酶最适反应温度为 35℃ ,p H为 10。在温度 4 0℃以下、p H5～ 11范围内均具有良好的稳定性 ,同时对低温有突出的适应性和抗氧化稳定性 ;与常规洗涤剂各成分配伍性良好 ,且低温条件下能有效地降解蛋白污渍 。 展开更多

关键词 黄海黄杆菌 洗涤剂 包覆型酶 配伍特性 应用效果评价 低温碱性蛋白酶

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶的基因克隆和序列测定 被引量：4

10

作者 洪义国 孙谧 +5 位作者 郑家声 王跃军 张云波 郝建华 王瑞娟 向悟生 《海洋水产研究》 CSCD 2000年第4期46-53,共8页

黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体 DNA用 Sau3A 部分酶切后 ,低熔点琼脂糖回收 2 - 10 Kb的 DNA片段 ,用 Klenow大片段酶半补齐 ,与用 Sal 酶切且半补齐的质粒 p UC19连接后 ,转化 E.Coli.JM1... 黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130具有稳定的分泌低温碱性蛋白酶的能力。将其染色体 DNA用 Sau3A 部分酶切后 ,低熔点琼脂糖回收 2 - 10 Kb的 DNA片段 ,用 Klenow大片段酶半补齐 ,与用 Sal 酶切且半补齐的质粒 p UC19连接后 ,转化 E.Coli.JM10 9,构建基因文库。用酪蛋白平板法和酶联免疫吸附 ( EL ISA)的活性筛选方法从基因文库中筛选到一株产海洋低温碱性酶的阳性克隆 (命名为p HH1)。序列测定分析表明 ,此重组质粒包含有长度为 768bp低温碱性蛋白酶基因的完整的开放读码框架 ( ORF)和上游基因调控序列。此片段编码由 2 56个氨基酸组成的酶 ,计算分子量为 330 0 0 Dal。通过 Southern杂交证实了此片段来自于黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130基因组 DNA。 展开更多

关键词 低温碱性蛋白酶 基因克隆 序列测定

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶多克隆抗体的制备 被引量：1

11

作者 洪义国 孙谧 +5 位作者 王跃军 张云波 郑家声 郝建华 王瑞娟 王春波 《海洋水产研究》 CSCD 2000年第4期41-45,共5页

利用纯化的黄海黄杆菌海洋低温碱性蛋白酶 ( Marine L ow- temperature Alkaline Protease,MLAP) ,采用背皮内多点注射和皮下组织注射免疫相结合的方法对新西兰白兔进行免疫 ,制备了多克隆抗体 ,并对多克隆抗体进行了纯化。用 EL ISA的... 利用纯化的黄海黄杆菌海洋低温碱性蛋白酶 ( Marine L ow- temperature Alkaline Protease,MLAP) ,采用背皮内多点注射和皮下组织注射免疫相结合的方法对新西兰白兔进行免疫 ,制备了多克隆抗体 ,并对多克隆抗体进行了纯化。用 EL ISA的方法对其效价检测表明 ,其效价为 12 80 0 0。作者所做的 展开更多

关键词 黄海黄杆菌 低温碱性蛋白酶 多克隆抗体 ELISA

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黄海黄杆菌YS-9412-130低温碱性蛋白酶发酵过程动力学研究 被引量：1

12

作者 孙谧 王跃军 +3 位作者 李民 张云波 洪义国 阎晓玲 《海洋水产研究》 CSCD 2001年第3期14-23,共10页

应用自动控制发酵设备 ,对黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130碱性蛋白酶发酵动力学和工艺条件进行了研究。从基本的动力学概念和方程出发 ,通过分批发酵试验摸索了黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130生长与代谢的基本规律 ,证明了发酵过程中低温碱性... 应用自动控制发酵设备 ,对黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130碱性蛋白酶发酵动力学和工艺条件进行了研究。从基本的动力学概念和方程出发 ,通过分批发酵试验摸索了黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130生长与代谢的基本规律 ,证明了发酵过程中低温碱性蛋白酶的形成为生长部分关联型。采用补料分批培养方法限制生长基质浓度 ,确定其一系列参数值 。 展开更多

关键词 黄海黄杆菌 YS-9412-130 海洋低温碱性蛋白酶 发酵动力学 补料分批培养

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产低温碱性蛋白酶黄海黄杆菌YS-9412-130高产菌株的选育

13

作者 张云波 孙谧 +6 位作者 洪义国 王跃军 阎晓玲 董美娜 桑玉泉 田杰 王瑞娟 《海洋水产研究》 CSCD 2000年第4期14-19,共6页

以黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130菌株为出发株 ,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线 ( UV)与微波( MI)复合诱变和自然选育 ,获得 1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株 YS- 94 12 - 130 - SW1- 10 4 ,其产低温碱性蛋白酶为出发株的 16倍。在... 以黄海黄杆菌 YS- 94 12 - 130菌株为出发株 ,经亚硝基胍、硫酸二乙酯、紫外线 ( UV)与微波( MI)复合诱变和自然选育 ,获得 1株产低温碱性蛋白酶高产稳定的突变株 YS- 94 12 - 130 - SW1- 10 4 ,其产低温碱性蛋白酶为出发株的 16倍。在摇瓶发酵培养条件下 ,酶活力达 2 32 0 U/ ml( 2 0℃测定 ) ,该诱变株具有 Refr、Strr、Ampr和 Met-、Lys-标记。突变株与出发菌株在细胞形态上比较 。 展开更多

关键词 低温碱性蛋白酶 黄海黄杆菌 诱变 选育

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低温连续相变萃取对蓝圆■鱼蛋白结构的影响及其抗氧化肽制备工艺优化 被引量：2

14

作者 王淑惠 罗旭洸 +2 位作者 王爽 周爱梅 曹庸 《食品工业科技》 CAS 北大核心 2019年第12期199-205,共7页

本文以低温连续相变萃取鱼油后的脱脂蓝圆鲹鱼粉为原料,研究了低温连续相变萃取技术对脱脂蓝圆鲹鱼粉基本成分的影响。并采用傅里叶红外光谱(FT-IR)和圆二色谱(CD)研究了该萃取技术对脱脂蓝圆鲹鱼粉中蛋白质二级结构的影响。以DPPH自由... 本文以低温连续相变萃取鱼油后的脱脂蓝圆鲹鱼粉为原料,研究了低温连续相变萃取技术对脱脂蓝圆鲹鱼粉基本成分的影响。并采用傅里叶红外光谱(FT-IR)和圆二色谱(CD)研究了该萃取技术对脱脂蓝圆鲹鱼粉中蛋白质二级结构的影响。以DPPH自由基清除率为指标,利用碱性蛋白酶酶解脱脂蓝圆鲹鱼粉制备蓝圆鲹抗氧化肽,通过正交试验进行酶解工艺优化。结果表明:脱脂蓝圆鲹鱼粉的水分含量为5.38%,灰分为4.29%,粗脂肪为0.23%,而粗蛋白高达83.78%;通过FT-IR结果可知,脱脂蓝圆鲹鱼粉中蛋白的刚性及韧性结构均没有发生明显的变化;再经过CD验证,发现脱脂蓝圆鲹鱼粉的蛋白内部保持了完整的二级结构。综上可知,低温连续相变萃取鱼油不会对脱脂蓝圆鲹鱼粉的蛋白结构和活性造成破坏;碱性蛋白酶酶解制备抗氧化肽的最佳工艺条件为:料液比1∶25 (w/v),酶解温度50℃,加酶量8000 U/g·pro,pH9.5,在此条件下测定酶解液的DPPH自由基清除率为89.99%±0.13%。 展开更多

关键词 蓝圆鲹 低温连续相变 傅里叶红外 圆二色谱 碱性蛋白酶 抗氧化肽 DPPH自由基清除率

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