本试验旨在制备用于小尾寒羊瘦素长型受体(leptin receptor long form)基因实时荧光定量PCR的标准品质粒和标准曲线。提取初情期前小尾寒羊下丘脑弓状核组织总RNA,进行反转录合成第1链cDNA,然后进行PCR和目的基因片段的回收;通过T-A克...本试验旨在制备用于小尾寒羊瘦素长型受体(leptin receptor long form)基因实时荧光定量PCR的标准品质粒和标准曲线。提取初情期前小尾寒羊下丘脑弓状核组织总RNA,进行反转录合成第1链cDNA,然后进行PCR和目的基因片段的回收;通过T-A克隆将该基因片段插入pMD18-T载体中,构建回收产物的重组质粒;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。重组质粒经PCR扩增和测序,结果表明,瘦素长型受体基因已成功克隆。提示,所构建的瘦素长型受体基因实时荧光定量标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为实时荧光定量PCR检测瘦素长型受体基因的标准方法。展开更多
文摘本试验旨在制备用于小尾寒羊瘦素长型受体(leptin receptor long form)基因实时荧光定量PCR的标准品质粒和标准曲线。提取初情期前小尾寒羊下丘脑弓状核组织总RNA,进行反转录合成第1链cDNA,然后进行PCR和目的基因片段的回收;通过T-A克隆将该基因片段插入pMD18-T载体中,构建回收产物的重组质粒;大量提取质粒,定量后进行标准曲线的制作和实时荧光定量PCR。重组质粒经PCR扩增和测序,结果表明,瘦素长型受体基因已成功克隆。提示,所构建的瘦素长型受体基因实时荧光定量标准曲线线性关系好,灵敏度和特异性高,准确可靠,此方法可作为实时荧光定量PCR检测瘦素长型受体基因的标准方法。
