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大片段DNA克隆载体的研究进展 被引量:4
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作者 于洋 蒋世翠 +3 位作者 王康宇 薛菲 张美萍 王义 《黑龙江农业科学》 2015年第2期147-151,共5页
DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究中非常重要的一项技术。自第一个质粒载体pSC101作为第一个克隆载体以来,随着分子生物学技术的迅猛发展克隆载体的整体结构、容载能力和转化效率都有了很大的改善。通过综述克隆载体的发展概况,... DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究中非常重要的一项技术。自第一个质粒载体pSC101作为第一个克隆载体以来,随着分子生物学技术的迅猛发展克隆载体的整体结构、容载能力和转化效率都有了很大的改善。通过综述克隆载体的发展概况,以及大片段DNA文库的构建和应用,对大片段DNA遗传转化的发展做了展望。 展开更多
关键词 克隆载体 BIBAC 大片段dna
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以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定
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作者 朱嘉明 李月琴 +1 位作者 王波 谢春芳 《暨南大学学报(自然科学与医学版)》 CAS CSCD 2004年第2期154-158,共5页
 目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液...  目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNACycleSequencingSystem试剂盒的方法进行测序。结果:获得纯度较高可直接作为模板进行测序的DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论:长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。 展开更多
关键词 巨细胞病毒 大片段dna dna测序 热循环测序法
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难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序 被引量:2
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作者 李明 申晓冬 +3 位作者 丛延广 谭银玲 饶贤才 胡福泉 《第三军医大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期539-542,共4页
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛... 目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。 展开更多
关键词 大片段克隆 噬菌体 基因组测序 PaP1
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高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的克隆及序列分析 被引量:6
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作者 周亚星 于肖夏 +1 位作者 于卓 李造哲 《中国草地学报》 CSCD 北大核心 2012年第6期75-80,共6页
为明确高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的DNA分子特征,以散穂高粱×黑壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段H-1、H-2、H-3和散穂高粱×白壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段B-1、B-2、B-3为材料,对6个... 为明确高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的DNA分子特征,以散穂高粱×黑壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段H-1、H-2、H-3和散穂高粱×白壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段B-1、B-2、B-3为材料,对6个不同的ISSR特征片段进行了克隆和测序分析。结果表明:克隆的特征片段H-1序列全长为1377bp,序列包含1个357bp的完整编码区(ORF),位于743~1099bp区域,共编码119个氨基酸,片段与小麦亚种蛋白b的同源性为60%。片段H-2序列全长2268bp,序列包含1个279bp的ORF,位于735~1013bp区域,共编码93个氨基酸,片段与高粱假设蛋白SORBIDRAFT_05g027190同源性为63.9%,与水稻粳稻组假设蛋白OsJ_07776同源性为62%。片段H-3序列全长2614bp,序列包含1个339bp的ORF,位于1024~1362bp区域,共编码113个氨基酸。片段B-1序列全长1432bp,序列包含1个300bp的ORF,位于700~999bp区域,共编码100个氨基酸。片段B-2序列全长1363bp,序列包含1个228bp的ORF,位于603~830bp区域,共编码76个氨基酸。片段B-3序列全长2751bp,序列包含1个186bp的ORF,位于2534~2719bp区域,共编码62个氨基酸。片段H-3、B-1、B-2、B-3与现有已知的植物碱基序列和氨基酸序列没有同源性,可能是与高丹草超低氢氰酸含量关系更为密切的DNA新序列。 展开更多
关键词 高丹草 超低氢氰酸含量 ISSR特征dna片段 克隆 测序
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