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大片段DNA克隆载体的研究进展
被引量:
4
1
作者
于洋
蒋世翠
+3 位作者
王康宇
薛菲
张美萍
王义
《黑龙江农业科学》
2015年第2期147-151,共5页
DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究中非常重要的一项技术。自第一个质粒载体pSC101作为第一个克隆载体以来,随着分子生物学技术的迅猛发展克隆载体的整体结构、容载能力和转化效率都有了很大的改善。通过综述克隆载体的发展概况,...
DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究中非常重要的一项技术。自第一个质粒载体pSC101作为第一个克隆载体以来,随着分子生物学技术的迅猛发展克隆载体的整体结构、容载能力和转化效率都有了很大的改善。通过综述克隆载体的发展概况,以及大片段DNA文库的构建和应用,对大片段DNA遗传转化的发展做了展望。
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关键词
克隆载体
BIBAC
大片段
dna
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职称材料
以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定
2
作者
朱嘉明
李月琴
+1 位作者
王波
谢春芳
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
2004年第2期154-158,共5页
目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液...
目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNACycleSequencingSystem试剂盒的方法进行测序。结果:获得纯度较高可直接作为模板进行测序的DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论:长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。
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关键词
巨细胞病毒
大片段
dna
dna
测序
热循环测序法
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职称材料
难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序
被引量:
2
3
作者
李明
申晓冬
+3 位作者
丛延广
谭银玲
饶贤才
胡福泉
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期539-542,共4页
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛...
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。
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关键词
大片段克隆
噬菌体
基因组测序
PaP1
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职称材料
高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的克隆及序列分析
被引量:
6
4
作者
周亚星
于肖夏
+1 位作者
于卓
李造哲
《中国草地学报》
CSCD
北大核心
2012年第6期75-80,共6页
为明确高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的DNA分子特征,以散穂高粱×黑壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段H-1、H-2、H-3和散穂高粱×白壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段B-1、B-2、B-3为材料,对6个...
为明确高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的DNA分子特征,以散穂高粱×黑壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段H-1、H-2、H-3和散穂高粱×白壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段B-1、B-2、B-3为材料,对6个不同的ISSR特征片段进行了克隆和测序分析。结果表明:克隆的特征片段H-1序列全长为1377bp,序列包含1个357bp的完整编码区(ORF),位于743~1099bp区域,共编码119个氨基酸,片段与小麦亚种蛋白b的同源性为60%。片段H-2序列全长2268bp,序列包含1个279bp的ORF,位于735~1013bp区域,共编码93个氨基酸,片段与高粱假设蛋白SORBIDRAFT_05g027190同源性为63.9%,与水稻粳稻组假设蛋白OsJ_07776同源性为62%。片段H-3序列全长2614bp,序列包含1个339bp的ORF,位于1024~1362bp区域,共编码113个氨基酸。片段B-1序列全长1432bp,序列包含1个300bp的ORF,位于700~999bp区域,共编码100个氨基酸。片段B-2序列全长1363bp,序列包含1个228bp的ORF,位于603~830bp区域,共编码76个氨基酸。片段B-3序列全长2751bp,序列包含1个186bp的ORF,位于2534~2719bp区域,共编码62个氨基酸。片段H-3、B-1、B-2、B-3与现有已知的植物碱基序列和氨基酸序列没有同源性,可能是与高丹草超低氢氰酸含量关系更为密切的DNA新序列。
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关键词
高丹草
超低氢氰酸含量
ISSR特征
dna
片段
克隆
测序
在线阅读
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职称材料
题名
大片段DNA克隆载体的研究进展
被引量:
4
1
作者
于洋
蒋世翠
王康宇
薛菲
张美萍
王义
机构
吉林农业大学生命科学学院
出处
《黑龙江农业科学》
2015年第2期147-151,共5页
基金
国家高技术研究发展计划(863计划)资助项目(2013AA102604-3)
文摘
DNA克隆技术是分子生物学和基因工程研究中非常重要的一项技术。自第一个质粒载体pSC101作为第一个克隆载体以来,随着分子生物学技术的迅猛发展克隆载体的整体结构、容载能力和转化效率都有了很大的改善。通过综述克隆载体的发展概况,以及大片段DNA文库的构建和应用,对大片段DNA遗传转化的发展做了展望。
关键词
克隆载体
BIBAC
大片段
dna
Keywords
BIBAC
大片段
dna
cloning
vector
BIBAC
large
fragment
dna
分类号
Q78 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定
2
作者
朱嘉明
李月琴
王波
谢春芳
机构
暨南大学生物工程学系
出处
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
2004年第2期154-158,共5页
基金
国务院侨办重点学科科研基金资助项目
文摘
目的:为确认Tn3-gpt已插入小鼠巨细胞病毒(mousecytomegalovirus,MCMV)基因组的特定位置,改进大分子病毒DNA的测序方法,建立以230kbDNA为模板直接进行DNA序列测定的方法。方法:待测MCMV的Tn3-gpt插入突变株感染NIH3T3细胞后,从培养液中制备病毒颗粒并从中纯化得到基因组DNA,以此DNA为模板,合成的寡核苷酸为引物,用热循环方法按Promega公司的DNACycleSequencingSystem试剂盒的方法进行测序。结果:获得纯度较高可直接作为模板进行测序的DNA,测序所得放射自显影图片条带清晰明亮,间隔正常,分辨率较高,可顺利读出插入位点的MCMV的DNA序列,证实Tn3-gpt插入在特定的位置。结论:长达230kb的大分子病毒DNA可直接作为模板,用热循环测序方法进行测序,无需切割成小片段后才进行测序。
关键词
巨细胞病毒
大片段
dna
dna
测序
热循环测序法
Keywords
cytomegalovirus
large
fragment
dna
dna
sequencing
dna
cycle
sequencing
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序
被引量:
2
3
作者
李明
申晓冬
丛延广
谭银玲
饶贤才
胡福泉
机构
第三军医大学基础医学部微生物学教研室重庆市微生物工程重点实验室
出处
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006年第6期539-542,共4页
基金
国家自然科学基金资助项目(30270065)~~
文摘
目的采用大片段克隆策略对难测序铜绿假单胞菌噬菌体PaP1基因组进行克隆及测序。方法用限制性内切酶AatⅡ将噬菌体PaP1基因组DNA切成几个大片段,分别进行末端修饰后与线性化的大片段克隆载体pYLTAC7连接,将连接产物电转化感受态细胞,筛选阳性克隆进行测序。结果AatⅡ将PaP1基因组切成8个片段,通过大片段克隆共获得3个阳性克隆,测出插入片段大小分别为9 805、8 335 bp和3 465 bp,使该难测序基因组的测出量达到47 757 bp。结论大片段克隆策略能够克服鸟枪法测序的不足,将有望获得噬菌体PaP1的全基因组序列。
关键词
大片段克隆
噬菌体
基因组测序
PaP1
Keywords
large dna fragment cloning and sequencing approach
phage
genome
sequencing
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
Q785 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的克隆及序列分析
被引量:
6
4
作者
周亚星
于肖夏
于卓
李造哲
机构
内蒙古农业大学农学院
内蒙古民族大学农学院
中国农业大学农业部作物遗传改良重点实验室
内蒙古农业大学生态环境学院
出处
《中国草地学报》
CSCD
北大核心
2012年第6期75-80,共6页
基金
国家自然科学基金项目(30960262)
内蒙古农业综合开发办项目(2012-97)
文摘
为明确高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的DNA分子特征,以散穂高粱×黑壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段H-1、H-2、H-3和散穂高粱×白壳苏丹草杂种F2的3个超低氢氰酸含量ISSR特征片段B-1、B-2、B-3为材料,对6个不同的ISSR特征片段进行了克隆和测序分析。结果表明:克隆的特征片段H-1序列全长为1377bp,序列包含1个357bp的完整编码区(ORF),位于743~1099bp区域,共编码119个氨基酸,片段与小麦亚种蛋白b的同源性为60%。片段H-2序列全长2268bp,序列包含1个279bp的ORF,位于735~1013bp区域,共编码93个氨基酸,片段与高粱假设蛋白SORBIDRAFT_05g027190同源性为63.9%,与水稻粳稻组假设蛋白OsJ_07776同源性为62%。片段H-3序列全长2614bp,序列包含1个339bp的ORF,位于1024~1362bp区域,共编码113个氨基酸。片段B-1序列全长1432bp,序列包含1个300bp的ORF,位于700~999bp区域,共编码100个氨基酸。片段B-2序列全长1363bp,序列包含1个228bp的ORF,位于603~830bp区域,共编码76个氨基酸。片段B-3序列全长2751bp,序列包含1个186bp的ORF,位于2534~2719bp区域,共编码62个氨基酸。片段H-3、B-1、B-2、B-3与现有已知的植物碱基序列和氨基酸序列没有同源性,可能是与高丹草超低氢氰酸含量关系更为密切的DNA新序列。
关键词
高丹草
超低氢氰酸含量
ISSR特征
dna
片段
克隆
测序
Keywords
Sorgum-Sudangrass
Super low hydrocyanic acid content
ISSR characteristic
dna
fragment
Clone
Sequence test
分类号
S544 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
大片段DNA克隆载体的研究进展
于洋
蒋世翠
王康宇
薛菲
张美萍
王义
《黑龙江农业科学》
2015
4
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职称材料
2
以病毒的230 kb DNA分子为模板的DNA序列测定
朱嘉明
李月琴
王波
谢春芳
《暨南大学学报(自然科学与医学版)》
CAS
CSCD
2004
0
在线阅读
下载PDF
职称材料
3
难测序噬菌体基因组PaP1的大片段克隆及测序
李明
申晓冬
丛延广
谭银玲
饶贤才
胡福泉
《第三军医大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2006
2
在线阅读
下载PDF
职称材料
4
高丹草超低氢氰酸含量ISSR特征片段的克隆及序列分析
周亚星
于肖夏
于卓
李造哲
《中国草地学报》
CSCD
北大核心
2012
6
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